免疫組化。染色 免疫組化可以輔助病理診斷、指導診斷、評估預后，所以在做免疫組化過程中的質控問題處理尤其重要［1］。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現(xiàn)及方法的改進，特別是即用型試劑盒的出現(xiàn)，使抗體的標記更加簡便、快捷，更加規(guī)范化。免疫組化標準化染色技術是一項實驗性很強的技術，任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)......免疫組化可以輔助病理診斷、指導診斷、評估預后，所以在做免疫組化過程中的質控問題處理尤其重要，隨著免疫組化試劑新種類不斷出現(xiàn)及方法的改進，特別是即用型試劑盒的出現(xiàn)，使抗體的標記更加簡便、快捷，更加規(guī)范化。免疫組化標準化染色技術是一項實驗性很強的技術，任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都可以直接影響免疫組化結果。免疫組化病理實驗切片 染色等找融享生物 。安徽特殊染色免疫組化檢測哪里有

    （1）ABC復合物的制備：（2）ABC法反應原理6．SP或SAP法（過氧化物酶標記的鏈霉卵白素或過氧化物酶標記的堿性磷酸酶染色）Streptavidin/peroxidaseorstrepta-vidin/alkalinephosphatase）※該法是ABC法基礎上的進一步改良，使卵白素與鏈霉（而非生物素）結合，而后再結合PO。它有4個亞基可與生物素結合，靈敏特異，背景低，成本低。現(xiàn)在還有plus盒。優(yōu)點是：更簡便，放大倍數(shù)↑，等電點中性更適合組織。分子量小，穿透力↑。7．蛋白A—金法（Protein—Agoldmethod）~多用于電鏡8．雙重組化染色法應用雙重免疫組織化學可在同一張切片，同一細胞或亞細胞結構內同時顯示兩種不同的抗原。9．免疫金—銀染色法（Immunogold—silverstainingIGSS）固定——見前述注意事項：1．固定劑的選擇：因組織而不同，注意質量和性能。2．固定方式的選擇：①浸漬固定（參考文獻）②灌注固定（+后固定）③蒸汽固定免疫組化染色步驟（以ABC法為例）1．切片脫蠟入水，入PBS洗三次/15分鐘。2．封閉內源性過氧化物酶。用新配置的（在PAS或—HCL緩沖液）室溫，30分鐘。3．水洗，入PBS，洗三次，每次5分鐘。4．減少非特異性著色用稀釋20倍的正常血清（產生二次抗體動物血清?。覝?，30分鐘。北京免疫組化實驗公司哪里有比較好的免疫組化服務融享生物。

免疫組化技術是利用已知的特異性抗體或抗原特異性結合的特點，通過化學反應使標記于結合后的特異性抗體上的顯示劑通過借助顯微鏡的觀察，從而在抗原抗體結合部位確定組織細胞結構的一門組化技術。在病理診斷、基礎醫(yī)學研究工作中免疫組化技術已成為非常重要的手段。免疫組化顯色是一種酶促反應，它通過連結在抗原抗體復合物上的過氧化物酶或堿性磷酸酶與底物DAB發(fā)生反應，生成有色的復合物沉淀在組織細胞中的抗原部位。由于標本組織來源不同，細胞分化不一，抗原含量不等，顯色反應所需時間不可能完全一致。整個免疫組化過程步驟較多，每步應按操作要求嚴格操作，脫蠟一定要充分。每步PBS沖洗時間、次數(shù)一定不能省略，因PBS液內含有鹽，

拍照

有條件的話比較好立即拍照，若不能及時拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和濕度。使用熒光顯微鏡注意嚴格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程序;應在暗室中進行檢查;防止紫外線對眼睛的損害，在調整光源時應戴上防護眼鏡;檢查時間每次以1~2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸下降，熒光減弱;標本受紫外線照射3~5min后，熒光也明顯減弱或褪色;激發(fā)光長時間的照射，會發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)象;所以較多不得超過2~3h;熒光顯微鏡光源壽命有限，標本應集中檢查，以節(jié)省時間，保護光源。天熱時，應加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再啟用時，須待燈光充分冷卻后才能點燃。天中應避免數(shù)次點燃光源。關閉汞燈至少在開啟15-30分鐘后;標本染色后立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發(fā);使用的玻片等載體，都必須厚度均勻，無明顯的自發(fā)熒光，如果使用油鏡，還必須保證鏡油為無熒光鏡油;電源比較好裝穩(wěn)壓器，否則電壓不穩(wěn)不只會降低汞燈的壽命，也會影響鏡檢的效果。

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經驗總結編輯

做過病理實驗的人都知道，實驗看似容易，但真想把它做好，還是需要花上很長一段時間去積累和摸索經驗。我從事病理實驗已有6年多了，在這段時間里，我做過許許多多病理相關實驗，剛開始啥也不懂，一味按照網上操作流程來做，但做的結果往往并不是十分理想，較好終結果未能達到預期的效果。經過一段時間的瀏覽和學習，從一些在論壇內學習、請教，并結合實踐操作，我經歷了初級——查找資料和摸索方法；中級——問題求助和不斷總結；高級——難題解答和經驗分享這三個階段，也學到了不少知識，積累了很多寶貴經驗，與大家一起分享下。

關于掉片

HE、Masson、番紅O、Nissl、Mallory等染色方法很少有掉片現(xiàn)象；免疫組化和細胞凋亡檢測我們采用專門購買的防脫片，由于整個實驗流程比較長，在實驗過程中產生掉片是很正常的現(xiàn)象。對于容易掉片的組織，如：骨組織、腦組織、皮膚組織等掉片有時候是不可避免的。

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DAB顯色

背景的深淺和特異性染色的深淺均可以由DAB孵育條件決定。DAB顯色時間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時間，到出現(xiàn)特異性染色較強而本底著色較淺時即可沖洗；DAB顯色時間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長，需要下調抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間；此外，若很短時間就出現(xiàn)背景很深，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長封閉時間；DAB顯色時間很長（如超過十幾分鐘）才出現(xiàn)陽性染色，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短（比較好一抗4℃過夜）；另一方面就是封閉時間過長。

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