超分辨光學(xué)顯微鏡NANOPSISM采用了新一代超分辨辨技術(shù)，即固態(tài)半球超級(jí)透鏡成像技術(shù)，突破傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的光學(xué)衍射分辨率極限，使顯微鏡的橫向分辨率達(dá)到50nm。通過(guò)該成像技術(shù)，用戶能夠得到超分辨辨率彩圖像并保留光學(xué)顯微鏡所有優(yōu)勢(shì)-快速、簡(jiǎn)單、無(wú)損、完整、真實(shí)顏色。在100X浸水物鏡上加裝固態(tài)半球超級(jí)透鏡裝置，在水平分辨率上可以從原來(lái)的200nm提高到50nm，等同于400X物鏡的實(shí)際效果。生物醫(yī)學(xué)成像技術(shù)是基礎(chǔ)生物學(xué)研究和臨床醫(yī)學(xué)**重要的工具之一?；仡櫄v史，已有多位科學(xué)家憑借在成像技術(shù)方面的突破獲得諾貝爾獎(jiǎng)。其中，Ｒoentgen因發(fā)現(xiàn)X射線獲得1901年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng);Zernike因發(fā)明相襯顯微鏡獲得1953年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng);Ｒuska的電子顯微鏡以及Binning和Rohrer的掃描隧道顯微鏡獲得1986年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng);Lauterbur和Mansfield因發(fā)明核磁共振成像技術(shù)共同獲得2003年諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。在剛剛過(guò)去的2014年，諾貝爾獎(jiǎng)評(píng)審**會(huì)再一次肯定成像技術(shù)的重要性，將諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)授予發(fā)展超分辨率熒光顯微成像技術(shù)的3位科學(xué)家。

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由于激發(fā)強(qiáng)度隨到焦平面的距離的平方變化， 在 z 軸方向雙光子激發(fā)

幾率隨離焦距離的四次方衰減， 熒光團(tuán)激發(fā)只發(fā)生在焦點(diǎn)內(nèi)。 用數(shù)值孔徑

為 1.25 的物鏡， 激發(fā)波長(zhǎng)為 780 納米， 全部激發(fā)熒光的 80%被局限在焦平

面 1 微米范圍內(nèi)， 激發(fā)體積大約為 0.1-1 飛升， 與傳統(tǒng)熒光顯微鏡相比，

該體積降低了 1010 倍。

在激光掃描熒光顯微術(shù)中， 雙光子激發(fā)具有三維層析能力， 該三維層

析效果可與共焦顯微鏡相比擬， 它還比具有另外兩個(gè)優(yōu)勢(shì)： 因?yàn)檎彰鞴庠?

時(shí)間空間上匯聚， 沒(méi)有離焦光漂白； 激發(fā)光不會(huì)被離焦吸收衰減， 因而有

較大的穿透深度。 山西本地顯微鏡聯(lián)系方式激光掃描共聚焦顯微鏡價(jià)格。

雙色激發(fā)比雙光子激發(fā)的優(yōu)勢(shì)并不在于較高的分辨率， 而是在于小目

標(biāo)物經(jīng)過(guò)較大散射媒質(zhì)后更容易觀察。 事實(shí)上， 與雙光子激發(fā)比較， 雙色

激發(fā)在焦點(diǎn)內(nèi)熒光散射增加， 而干擾背景熒光只有很小增加。

結(jié)合多光子熒光技術(shù)， 多光子共聚焦顯微鏡（Multiphoton Excitation

－MPE） 的發(fā)展成功的解決了傳統(tǒng)共聚焦顯微鏡（單光子共聚焦顯微鏡）

所存在的問(wèn)題， MPE 的激光源是超快激光器（多為鈦寶石激光器， 可以達(dá)

到皮秒或者飛秒級(jí)的掃描速度）， 具有非常高的峰值功率和較低的平均功

率， 從而可以減小或者消除光漂白和光毒作用。 多光子的吸收現(xiàn)象是非線

性效應(yīng)， 只發(fā)生在聚焦焦點(diǎn)處， 不需要共聚焦孔徑光闌濾光， 從而**提

高成像亮度和信噪比。 在傳統(tǒng)激光共聚焦顯微鏡中， 光通過(guò)出的所有樣品

都被激發(fā)， 所以必須用孔徑光闌來(lái)選取焦點(diǎn)處樣品發(fā)出的熒光。 孔徑光闌

不僅遮擋了焦點(diǎn)以外樣品發(fā)出的熒光， 而且也遮擋了焦點(diǎn)處散射和漫反射

的熒光。 在 MPE 中， 焦點(diǎn)處發(fā)出的所有熒光， 包括散射和漫反射的熒光都

可以被收集并探測(cè)到。 并且由于多光子實(shí)驗(yàn)所用的激發(fā)光的波長(zhǎng)較長(zhǎng)， 激

發(fā)光的散射損失很小， 軸向分辨率更高， 樣品的穿透能力更強(qiáng)

    激光掃描共聚焦顯微鏡(confocallaserscanningmi-croscopy,CLSM)是一種新型高精度的激光源加共聚焦顯微鏡,是利用激光作為光源,在傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡基礎(chǔ)上采用共軛聚焦原理和裝置,并利用計(jì)算機(jī)對(duì)所觀察分析對(duì)象進(jìn)行數(shù)字圖像處理的一套觀察和分析系統(tǒng)其比較大特點(diǎn)是對(duì)標(biāo)本進(jìn)行無(wú)損傷性的實(shí)時(shí)觀察分析,得到細(xì)胞或結(jié)構(gòu)內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)的熒光圖像,以及在亞細(xì)胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值、膜電位等生理信號(hào)以及細(xì)胞形態(tài)的變化,對(duì)生物標(biāo)本進(jìn)行定性、定量、定時(shí)和定位研究,具有極大的優(yōu)越性[1]。主要構(gòu)件一個(gè)完整的CLSM系統(tǒng)由幾個(gè)主要的硬件和一些成像分析軟件組成。硬件包括表面熒光顯微鏡、激光光源及冷卻系統(tǒng)、定位掃描裝置、分辨系統(tǒng)、計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)、顯示器和圖像輸出打印設(shè)備。 在哪里可以買(mǎi)到激光掃描共聚焦顯微鏡。

1． 雙光子顯微鏡出現(xiàn)的背景----傳統(tǒng)激光共聚焦顯微鏡的兩大局限:

1） 一是光毒性現(xiàn)象： 因?yàn)楣簿劢沟谋仨氉銐蛐∫垣@得辨率的圖像， 而孔徑小又會(huì)擋掉很大部分從

樣品發(fā)出的熒光， 包括從焦平面發(fā)出的熒光， 相應(yīng)的， 激發(fā)光必須足夠強(qiáng)以獲得足夠的信噪比； 而**度

的激光會(huì)使熒光染料在連續(xù)掃描過(guò)程中迅速褪色， 熒光信號(hào)會(huì)隨著掃描進(jìn)程度進(jìn)行變得越來(lái)越弱。

2） 光毒作用是另外一個(gè)問(wèn)題， 在激光照射下， 許多熒光染料分子會(huì)產(chǎn)生諸如單態(tài)氧或自由基等細(xì)胞，

所以實(shí)驗(yàn)中要限制掃描時(shí)間和激發(fā)光的光功率密度以保持樣品的活性。 在針對(duì)活性樣品的研究中， 尤其是

活性樣品生長(zhǎng)、 發(fā)育過(guò)程的各個(gè)階段， 光漂白和光毒現(xiàn)象使這些研究受到很大的限制。 有人知道雙光子顯微鏡嗎？天津顯微鏡

使用雙光子顯微鏡時(shí)要注意些什么呢？陜西光學(xué)顯微鏡貨源推薦

2． 為什么說(shuō)雙光子顯微鏡一般不需要配備紫外激發(fā)激光器？

雙光子顯微鏡技術(shù)是建立在雙光子激發(fā)效應(yīng)的基礎(chǔ)上的一種熒光激發(fā)技術(shù)： 熒光染料分子可以同時(shí)吸收低

能量的兩個(gè)光子而被激發(fā)（兩個(gè)光子到達(dá)熒光分子的時(shí)間間隔小于 1 飛秒） ， 其激發(fā)效果可以等同于吸收

一個(gè) 1/2 波長(zhǎng)的高能量光子。 例如， 吸收兩個(gè)紅色波長(zhǎng)的光子， 相當(dāng)于一個(gè)吸收紫外的分子。 長(zhǎng)波長(zhǎng)的光

子不易被細(xì)胞吸收， 因此對(duì)活細(xì)胞的光毒性減少， 也降低了光漂白。 這樣即起到紫外激發(fā)的功能， 又避免

了紫外光線對(duì)樣品的傷害。 陜西光學(xué)顯微鏡貨源推薦

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