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浙江組織免疫組化

來源: 發(fā)布時間:2025-04-11

免疫組化在在病理診斷中,隨著各種抗體新的用途不斷被發(fā)現(xiàn)及越來越多的新型抗體的出現(xiàn),免疫組化在cancer診斷及鑒別診斷、分類、預后判斷等方面產(chǎn)生了重大的影響。由于免疫組化技術也存在一些局限性,因此,深入研究免疫組化原理和技術,并努力實現(xiàn)規(guī)范化的操作,才能充分發(fā)揮免疫組化在病理的診斷及鑒別診斷、判斷預后、指導臨床醫(yī)療中的作用。

觀察組織切片中抗原的數(shù)量及其在組織中的分布情況,對抗原進行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學,由于抗原與抗體特異性結合,因此通過免疫組化使標記抗體的顯色劑(酶、熒光素、同位素、金屬離子等等)顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質)。IHC所用標本主要為兩大類:組織標本和細胞標本,其中制作組織標本更常用、更基本的方法是石蠟切片。石蠟切片對于組織形態(tài)保存好,有利于各種染色對照觀察,而且能長期保存;石蠟切片中使用的甲醛固定劑對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進行抗原修復,是免疫組化中優(yōu)先選擇的組織標本制作方法。 免疫組化可以看什么?浙江組織免疫組化

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關于免疫組化的封閉:用和二抗來源一致的血清在保濕盒中于37℃孵育15~30min,然后甩去封閉用血清,勿洗;注意:封閉時間根據(jù)具體實驗調整;封閉液一般選用5%BSA或與二抗來源一致的血清,切記是BSA,不是PBS.很多論壇寫的是PBS,太坑了。①使用血清好還是BSA好?答:***是待檢樣本會非特異性的和蛋白結合,從而導致背景過高,因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結合,從這點看,BSA和血清沒有明顯區(qū)別。第二是待檢樣本中可能會有Fc受體,可以和抗體恒定區(qū)結合,與抗體特異性無關,封閉血清中有抗體,因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結合。BSA則無法封閉Fc受體。貴州動物組織免疫組化推薦英瀚斯生物,可做免疫組化定量分析。

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免疫組化的基本原理 

免疫組化(Immunohistochemistry, IHC)是一種利用抗原-抗體特異性結合的原理,通過顯色反應在組織切片上定位特定蛋白質的技術。該技術結合了免疫學和組織學的優(yōu)點,能夠在細胞或亞細胞水平上精確顯示目標蛋白的分布和表達情況。免疫組化的基本原理是利用一抗與目標蛋白結合,再通過二抗與一抗結合,通過顯色系統(tǒng)(如DAB)使目標蛋白可視化。這種方法不僅能夠提供蛋白質的定位信息,還能通過半定量分析評估蛋白質的表達水平。

免疫組化有哪幾種分類 ?

 1)按標記物質的種類,如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標法和免疫金銀法等。

 2)按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法)。與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多。

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3)按結合方式可分為抗原-抗體結合,如過氧化物酶-抗過氧化物酶(***)法;親和連接,如卵白素-生物素-過氧化物酶復合物(ABC)法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(SP)法等,其中SP法是比較常用的方法;聚合物鏈接,如即用型二步法,此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測。 免疫組化結果怎么看?

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免疫組化實驗注意事項總結:

?本實驗室所用切片一般是石蠟切片。

?烘片:使蠟片水分蒸發(fā),石蠟軟化,組織切片牢固貼在玻片上;烘片至跟烘片前透明度有差異。

?抗原修復時,使片子始終浸沒在修復液中,液體不能干。

?一抗孵育在37度培養(yǎng)箱,濕盒放置1h,省時間和結合效果好,不要超過1h,容易過染。

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?二抗使用:兩個二抗放大信號或一個二抗;若抗體信號強,可不用放大信號,盡量增大信噪比。

?10XDAB在常溫溶解,盡可能現(xiàn)用現(xiàn)配,放于4度儲存時間久了效果不佳。

?復水和脫水時所用的梯度酒精不可混用,要區(qū)分開。

?加抗體和顯色液時,都要將片子甩干,在半干半濕的狀態(tài)下再加,不然容易造成溶液的二次稀釋。

?整個操作過程中在顯色之前,一定不能干片。 免疫組化公司哪家好?甘肅組織免疫組化實驗

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臨床應用中,藥物靶點免疫組化,英瀚斯生物專業(yè)做實驗外包服務,一站式醫(yī)學科研平臺。免疫組化及分子病理學方法在疾病診斷中只只起輔助醫(yī)療的作用,而藥物病理學是用病理學的方法確定藥物醫(yī)療的靶點、評價藥物醫(yī)療的療效、預測藥物醫(yī)療的反應,因此藥物靶點免疫組化屬“單獨的診斷”。因此對于對照的設置、質量的控制均需要更高的要求,如對試劑的要求,不同于一般的診斷試劑,應按對藥物管理的要求操作。HER2蛋白著色3+者可作為臨床醫(yī)生建議患者接受曲妥珠單抗等藥物醫(yī)療的依據(jù)。浙江組織免疫組化