標(biāo)記的多樣化與多功能酶標(biāo)儀應(yīng)運而生 標(biāo)記物的多樣化,是免疫技術(shù)的發(fā)展和進步的一個方面。免疫檢測標(biāo)記物由本初的放射同位素,發(fā)展為安全無污染的辣根過氧化物酶(HRP)和磷酸酯酶,并進一步擴展到熒光素、稀土元素(目前主要是Eu)、上轉(zhuǎn)換等;底物溶液也對應(yīng)的由酶催化下產(chǎn)生顏色效應(yīng)的底物發(fā)展為產(chǎn)生光子或熒光信號,獲得更加靈敏和穩(wěn)定的信號和更寬的線性范圍,并相應(yīng)產(chǎn)生了更多檢測模式。 多種檢測模式整合在單臺儀器上,多功能酶標(biāo)儀就運用而生了,可實現(xiàn)對吸光度、時間分辨熒光(TRF)、化學(xué)發(fā)光(Lum)及非標(biāo)記檢測技術(shù)熒光偏振(FP) 、熒光強度(FI,F(xiàn)RET)等兩種或多種模式的檢測。此外,應(yīng)用于分子互作的BRET/NANO-BIT(生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù))、熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)(TR-FRET)和ALPHA等,近些年也被應(yīng)用于多功能酶標(biāo)儀中。而且多功能酶標(biāo)儀不限于微孔板檢測,還可內(nèi)置比色皿插槽。因此,酶標(biāo)儀目前已成為一個廣義的定義。在清洗酶標(biāo)板時,要輕輕擦拭每個孔位,避免用力過猛導(dǎo)致孔口變形或損壞。江西本地酶標(biāo)儀供應(yīng)商
操作注意事項 酶標(biāo)儀的功能是用來讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果,因此要得到準確結(jié)果,試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標(biāo)儀之前是通過目測判斷結(jié)果,操作過程隨意性較大,在使用酶標(biāo)儀后如果不能及時糾正操作習(xí)慣,會造成較大誤差。在酶標(biāo)儀的操作中應(yīng)注意以下事項: 1.使用加液器加液,加液頭不能混用。 2.洗板要洗干凈。如果條件允許,使用洗板機洗板,避免交叉污染。 3.嚴格按照試劑盒的說明書操作,反應(yīng)時間準確。 4.在測量過程中,請勿碰酶標(biāo)板,以防酶標(biāo)板傳送時擠傷操作人員的手。 5.請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部,操作完成后請洗手。 6.如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害,請嚴格按照試劑盒的操作說明,以防對操作人員造成損害。 7.如果儀器接觸過污染性或傳染性物品,請進行清洗和消毒。 8.不要在測量過程中關(guān)閉電源。 9.對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差,應(yīng)根據(jù)實際情況及時修改參數(shù),以達到較好效果。 10.使用后蓋好防塵罩。 11.出現(xiàn)技術(shù)故障時應(yīng)及時與廠家聯(lián)系,切勿擅自拆卸酶標(biāo)儀上海實驗室酶標(biāo)儀怎么用酶標(biāo)儀可應(yīng)用于實驗室診斷,動植物檢驗檢疫機構(gòu),畜牧局,生物技術(shù)研究單位等。
酶標(biāo)儀的分類 3.化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀:是來自生物化學(xué)反應(yīng)中的自發(fā)光,可分為輝光型和閃光型兩種類型,輝光型發(fā)光持久,穩(wěn)定,能持續(xù)一段時間;閃光型發(fā)光時間短,變化快,穩(wěn)定性不強,需要應(yīng)用自動加樣器才可以進行,化學(xué)發(fā)光中發(fā)出的光子數(shù)與樣品量呈一定比例關(guān)系,化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀靈敏度非常高,動力學(xué)范圍廣, 4.多功能酶標(biāo)儀:是以上三種酶標(biāo)儀的整合,它集成了兩種或者三種酶標(biāo)儀于一體,可以同時進行光吸收,熒光和化學(xué)發(fā)光的檢測,功能強大,使用范圍廣,可作為研究平臺,避免了重復(fù)購買,是實驗室的優(yōu)異之選,另外根據(jù)通道的個數(shù),可以將酶標(biāo)儀分為單通道和多通道兩種類型,單通道又有自動和手動兩種之分。
酶標(biāo)儀基本原理和特點 酶標(biāo)儀是一種單通道自動進樣的酶標(biāo)儀工作原理圖。光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光,進入塑料微孔極中的待測標(biāo)本,該單色光一部分被標(biāo)本吸收,另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測器上。光電檢測器將透射過待測標(biāo)本后強弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號,電信號經(jīng)前置放大、對數(shù)放大、模數(shù)轉(zhuǎn)換等處理后,送入微處理器進行數(shù)據(jù)處理,轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的濃度,較后由顯示器和打印機輸出結(jié)果。酶標(biāo)儀的基本原理: 使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開,較后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可較大地放大反應(yīng)效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。光吸收酶標(biāo)儀是對可見或紫外吸光度的檢測,即檢測被樣品吸收掉的光密度。
檢測步驟 1.取固體或液體樣品5ml,加入25ml 70%的甲醇,混勻3分鐘,靜止10分鐘,過濾,收集濾液,吸取100ul濾液加100ul分析緩沖液,混勻。 2.取出綠色的稀釋孔和無色的有抗體包被的稀釋孔各放入一個板架上。 3.吸取200ul酶聯(lián)偶合物加入到綠色的稀釋孔,再吸取100ul標(biāo)樣(0、2、5、20、50ppb),和100ul步驟1的待檢混合樣,混勻3次。 4.然后從300ul混合物中吸取100ul加入到無色的有抗體包被的稀釋孔中,靜止15分鐘。 5.將孔中的液體倒掉,用蒸餾水沖洗每個孔,將微孔倒置于紙巾上把水吸干。 6. 加入100ul底物,放置5分鐘,顏色變?yōu)樗{色。 7. 加入100ul終止液,顏色變?yōu)辄S色。 8. 上機檢測,(酶標(biāo)儀濾鏡450nm,示差濾鏡630nm) 9. 稀釋倍數(shù)f:1 10. 定量限:生奶0.002ug/kg, 11. 牛奶或花生醬≤20ug/kg,合格, 12. 計算公式:X= c*f單功能酶標(biāo)儀主要包括光吸收酶標(biāo)儀、熒光酶標(biāo)儀、化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀等。浙江智能酶標(biāo)儀貨源充足
酶標(biāo)儀兼容微量檢測板:可進行體積為2μL或4μL,較大可支持60多個微量樣品的同時檢測。江西本地酶標(biāo)儀供應(yīng)商
酶標(biāo)儀的發(fā)展歷程 酶標(biāo)儀的前世今生 1966年,美國的Nakane和Pierce及法國的Avrameas和Uriel同時報道了以新的標(biāo)記物——辣根過氧化酶(HRP)替代熒光素,定位組織中抗原的酶免疫組織化學(xué)技術(shù)(EIH)。1971年,Engvall和Perlmann在酶免疫組織化學(xué)的基礎(chǔ)上,又發(fā)展出一種酶標(biāo)固相免疫測定技術(shù),即酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),成為繼放射免疫分析技術(shù)、熒光免疫之后的第三大標(biāo)記免疫分析技術(shù)。70年代中期,隨著雜交瘤技術(shù)的發(fā)展,發(fā)明了單克隆抗體制備技術(shù),將其應(yīng)用于酶免疫測定中,提高了其靈敏度和特異性,使一步法雙抗體夾心法等酶免疫測定方法相繼出現(xiàn)。 酶免疫分析技術(shù)是將酶催化的放大作用與抗原、抗體特異性反應(yīng)相結(jié)合的一種微量分析技術(shù)。酶標(biāo)記抗體或抗原后,既不影響抗體或抗原的免疫反應(yīng)特異性,也不改變酶本身的催化活性,在相應(yīng)的反應(yīng)底物參與下,標(biāo)記的酶水解底物或顯色,或使供氫體由無色的還原型轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩难趸停溆猩a(chǎn)物可以通過肉眼、分光光度計或顯微鏡觀察或測定。江西本地酶標(biāo)儀供應(yīng)商