人類(lèi)精子冷凍保存和儲(chǔ)存：增加了冷凍樣本的安全性、精液冷凍保存方案、快速液氮熏蒸冷凍、冷凍精液的解凍、玻璃化冷凍等內(nèi)容，更具可操作性。本手冊(cè)對(duì)人類(lèi)精子的冷凍保存提出了具體建議：將樣本分管分罐分開(kāi)儲(chǔ)存；對(duì)使用的材料和留存標(biāo)本建立定期核驗(yàn)程序；所有儲(chǔ)罐都應(yīng)有液位監(jiān)控報(bào)警系統(tǒng)，以監(jiān)測(cè)溫度和液氮液位，傳感器應(yīng)連接警報(bào)器，可通過(guò)實(shí)驗(yàn)室人員的終端進(jìn)行提醒。新證據(jù)表明，玻璃化冷凍是冷凍保存精液的一種有價(jià)值的方法。該方法的原理是將小體積樣本與無(wú)污染液氮直接接觸并快速冷凍，可以防止冰晶的形成，并減少精子的滲透性損傷。在麥管玻璃化冷凍(無(wú)菌玻璃化冷凍)中，也可以使用封閉系統(tǒng)，不需要無(wú)菌的液氮。CASA系統(tǒng)操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)速度快，且重復(fù)性優(yōu)于人工檢測(cè)。北京狗精子分析BCF

通過(guò)比較進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估1．室內(nèi)比較是采用同一個(gè)標(biāo)本在同一參數(shù)下?經(jīng)CASA多次測(cè)定后?應(yīng)用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)測(cè)得數(shù)值進(jìn)行比較。在男科實(shí)驗(yàn)室中對(duì)CASA系統(tǒng)的質(zhì)量控制通常使用影像磁帶或完全相同的凍存**標(biāo)本進(jìn)行日間比較。當(dāng)室內(nèi)比較作為結(jié)果質(zhì)量的一種評(píng)估時(shí)?計(jì)算機(jī)中數(shù)值的在線獲得是極具優(yōu)勢(shì)的。2．室間比較要求標(biāo)本向其他幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室運(yùn)送文獻(xiàn)中的一些報(bào)道闡述了該方面的經(jīng)驗(yàn)但是運(yùn)動(dòng)精子是不能在不受限制的條件下運(yùn)輸?shù)膶⑵渲糜谝旱羞\(yùn)送需進(jìn)一步考慮更多的因素（解凍技術(shù)、標(biāo)本的處理等）這些因素會(huì)影響活動(dòng)力參數(shù)；到目前為止室間比較的研究還未見(jiàn)滿意報(bào)道；Jorgensen等進(jìn)行了研究嘗試克服實(shí)驗(yàn)室間運(yùn)送解凍標(biāo)本的困難其研究方式是：邀請(qǐng)四個(gè)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)人員攜帶各自的儀器到同一個(gè)地點(diǎn)以各自通常采用的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行精子評(píng)估但未見(jiàn)明確的結(jié)論。3．對(duì)于精子活力測(cè)定CASA系統(tǒng)的測(cè)定與直觀評(píng)估的比較有文獻(xiàn)進(jìn)行了報(bào)道但結(jié)果并不相同。認(rèn)為直觀評(píng)估揭示標(biāo)準(zhǔn)數(shù)值且其差異是由CASA系統(tǒng)的錯(cuò)誤引起的該觀點(diǎn)是不正確的；無(wú)論從理論上還是實(shí)踐中CASA數(shù)值比直觀評(píng)估所獲得的數(shù)值更接近于真值；對(duì)直線前進(jìn)的精子比例而言這一點(diǎn)是非常正確的。北京計(jì)數(shù)精子分析W.H.O 4計(jì)算機(jī)輔助精子分析（computer- assisted sperm analysis）是2014年公布的泌尿外科學(xué)名詞。

美國(guó)HamiltonThorne的TOXIVOS精子分析儀已經(jīng)被FDA和國(guó)內(nèi)外毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室所使用。本試驗(yàn)研究目的對(duì)精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在大鼠附睪精子計(jì)數(shù)結(jié)果的比較驗(yàn)證。方法選取三批次雄性SD大鼠60只,每批20只,對(duì)三批次雄鼠的精子計(jì)數(shù)進(jìn)行比較。健康雄鼠通過(guò)戊巴比妥鈉麻醉實(shí)施安樂(lè)死后,取左側(cè)附睪尾稱(chēng)重,將附睪尾部放入37℃預(yù)熱的含有M199培養(yǎng)液平皿中,剪碎附睪尾,放入培養(yǎng)箱中37℃孵育5min,然后吸取1份精子懸液,用M199培養(yǎng)液進(jìn)行一定倍數(shù)的稀釋,混勻后,取1滴稀釋液,滴入精子分析儀**載玻片上,將載玻片放入TOXIVOS精子分析儀載物臺(tái),進(jìn)行精子計(jì)數(shù),同時(shí)吸取稀釋后的精子懸液滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi),通過(guò)光學(xué)顯微鏡進(jìn)行計(jì)數(shù),比較兩種計(jì)數(shù)方法的差異性。結(jié)果***批次雄鼠精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的精子計(jì)數(shù)結(jié)果分別為70.2±33.2,61.0±27.1;第二批次雄鼠精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的精子計(jì)數(shù)結(jié)果分別為128.8±116.8,114.6±86.9;第三批次雄鼠精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的精子計(jì)數(shù)結(jié)果分別為165.9±91.7,140.0±59.6。三個(gè)批次的精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的精子計(jì)數(shù)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論精子分析儀是一種方便、可靠、快速、高效的研究工具,在生殖毒理學(xué)研究中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

精液顯微鏡檢查(1)精子存活率：排精后30～60分鐘，正常精子存活率應(yīng)為80%～90%，精子存活率降低是導(dǎo)致不育的重要原因。(2)精子活動(dòng)力：指精子活動(dòng)狀態(tài)，也是指活動(dòng)精子的質(zhì)量。世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦將精子活動(dòng)力分為4級(jí)：①精子活動(dòng)好，運(yùn)動(dòng)迅速，活潑有力，直線向前運(yùn)動(dòng)；②精子活動(dòng)較好，運(yùn)動(dòng)速度尚可，游動(dòng)方向不定，呈直線或非直線運(yùn)動(dòng)，帶有回旋；③精子運(yùn)動(dòng)不良，運(yùn)動(dòng)遲緩，原地打轉(zhuǎn)或抖動(dòng)，向前運(yùn)動(dòng)能力差；④死精子，精子完全不活動(dòng)。正常精子活動(dòng)力應(yīng)在③級(jí)以上，若＞40%的精子活動(dòng)不良(③、④)級(jí)，常是導(dǎo)致男性不育的重要原因。精子活動(dòng)力低，主要見(jiàn)于精索靜脈曲張、泌尿生殖系統(tǒng)非特異性***，應(yīng)用某些藥物如抗瘧藥、雄***等所致。Hamilton Thorne精子分析儀具有良好的數(shù)據(jù)管理和報(bào)告生成功能，能夠方便用戶查閱和分享分析結(jié)果。

擴(kuò)展性檢查：可以在某些情況下由實(shí)驗(yàn)室選擇或根據(jù)臨床醫(yī)生的特殊要求而使用的項(xiàng)目。手冊(cè)增加了精子DNA損傷、遺傳學(xué)和炎癥細(xì)胞等相關(guān)檢查項(xiàng)目。提出了基因突變是導(dǎo)致不育和精液常規(guī)檢查異常的原因。新增了精液相關(guān)細(xì)胞因子、趨化因子等檢測(cè)的方法、試劑、檢測(cè)步驟等內(nèi)容。在精液參數(shù)異常的男性中普遍存在精子DNA損傷，并且已有報(bào)道指出其與精液參數(shù)正常男性的不育有關(guān)。由于與精液質(zhì)量相關(guān)，精子DNA損傷檢測(cè)是男性不育檢查中的重要補(bǔ)充內(nèi)容，已成為男科學(xué)基礎(chǔ)和臨床中論述**多、**有前景的精子損傷分子標(biāo)志物之一。本版手冊(cè)增加了大量篇幅對(duì)其原理和檢測(cè)方法進(jìn)行了描述。新增了基因和基因組測(cè)序內(nèi)容。臨床上，越來(lái)越多的人意識(shí)到染色體異常[數(shù)量異常、結(jié)構(gòu)異常(包括微缺失和微重復(fù))]和基因突變是導(dǎo)致各種男性不育癥的基礎(chǔ)病因，而這正是在精液分析中觀察到的許多異常的原因。盡管基因和基因組測(cè)序常規(guī)在醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，但一些男科實(shí)驗(yàn)室也在做同樣的檢測(cè)。為明確生殖道炎癥對(duì)于男性不育的影響，泌尿男科醫(yī)生可能提出對(duì)精液中的趨化因子和細(xì)胞因子進(jìn)行評(píng)估。本手冊(cè)納入了精液中白細(xì)胞介素檢測(cè)方法。男性精液檢測(cè)主要依賴(lài)計(jì)算機(jī)輔助精子分析儀(computer assistant semen analyses，CASA)。香港瀕危物種精子分析精子動(dòng)力分析

?HAMILTON THORNE精子分析儀可分析參數(shù)，前向性（STR）?：平均路徑的直線性。北京狗精子分析BCF

CASA系統(tǒng)也可用于精子形態(tài)學(xué)評(píng)估。CASA系統(tǒng)可用來(lái)定量分析精子頭部形態(tài)學(xué)、中段甚至主段的形態(tài)，可以把精子頭部和中段分類(lèi)為正?；蛘卟徽?，還可以給出頭部和中段尺度、頭部橢圓率和勻稱(chēng)性的均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差和中位數(shù)，以及對(duì)染色的精子頂體區(qū)進(jìn)行測(cè)量[3]。與人工操作相比，自動(dòng)化系統(tǒng)更具客觀性，精確度和重復(fù)性的潛力[4]。精確度和重復(fù)性不低于7%[5]，這優(yōu)于有經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員的手工評(píng)估。兩個(gè)研究已經(jīng)提示在CASA結(jié)果與生育力之間存在***聯(lián)系。Coetzee等發(fā)現(xiàn)自動(dòng)分析的正常精子形態(tài)的結(jié)果是預(yù)示體外受精率和妊娠率的有意義指標(biāo)[6]。Garrett等發(fā)現(xiàn)**中能與透明帶結(jié)合的、具有某些頭部形態(tài)特征的精子所占的百分比（Z%），和直線速度（VSL）的精子的百分比，與大樣本的低生育力夫婦的自然妊娠率是有***且**的關(guān)系。Z%和VSL與生育力間的關(guān)系顯示是連續(xù)的，而且沒(méi)有顯示臨界值；高于臨界值，妊娠率也不會(huì)進(jìn)一步增加[7]。北京狗精子分析BCF