IgA腎病小鼠模型【目的】建立IgA腎病小鼠模型，并觀察模型的生化及病理指標(biāo)特點(diǎn)?！静牧稀?、酸化水：鹽酸調(diào)滅菌水；2、蓖麻油+CCl4：5:1配制；3、LPS：；4、血清白蛋白BSA：800mg/kg用量，滅菌水配制；【方法】小鼠BSA+CCl4+脂多糖LPS誘導(dǎo)法1、20g小鼠牛血清白蛋白BSA(800mg/kg)隔天灌胃1次，配制160mg/ml，灌胃100ul/只，持續(xù)8周；2、同時(shí)皮下注射蓖麻油和CCl4（5:1），1次/周，持續(xù)8周；3、分別于第6、8周以（）尾靜脈注射LPS，1次/周；4、每?jī)芍苋?4h尿液一次觀察尿蛋白及紅細(xì)胞；5、每日觀察精神、飲食、大小便，第9周處死，取血和腎、肝做相應(yīng)檢查；6、取尿液后2000r/min離心10min，取上清用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)尿蛋白肌酐比值，鏡下觀察尿沉渣中有無(wú)紅細(xì)胞。鹽酸阿霉素誘導(dǎo)心衰小鼠模型。寧夏裸鼠動(dòng)物模型建模

    首先，預(yù)實(shí)驗(yàn)必須要當(dāng)做正式實(shí)驗(yàn)來(lái)對(duì)待（態(tài)度要放端正，這是必須的）。預(yù)實(shí)驗(yàn)的每一步都需要詳細(xì)規(guī)劃，多方籌謀。不論是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇，還是檢測(cè)試劑的購(gòu)買(mǎi)，都盡量和正式實(shí)驗(yàn)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。建議大家先把所有試劑和藥物購(gòu)買(mǎi)完畢后，再去購(gòu)買(mǎi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。因?yàn)閯?dòng)物會(huì)長(zhǎng)胖，長(zhǎng)胖后給藥劑量就要增加，不僅多花錢(qián)，并且還容易影響實(shí)驗(yàn)效果。筆者曾經(jīng)提前將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物買(mǎi)回，但因?yàn)樘厥庠驔](méi)能購(gòu)買(mǎi)到造模藥物，終只能忍痛割?lèi)?ài)將動(dòng)物贈(zèng)送他人，白白虧了一筆血汗錢(qián)（那批老鼠在我這兒白吃白喝長(zhǎng)得太胖，沒(méi)辦法用作造模）。動(dòng)物及試劑購(gòu)買(mǎi)首先需要考慮：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品種、體重、性別、周齡（通常根據(jù)既往文獻(xiàn)報(bào)道可以獲得答案）、數(shù)量（需要考慮到實(shí)驗(yàn)有一定動(dòng)物死亡率或者動(dòng)物本身會(huì)打架互毆，因此需要提前購(gòu)買(mǎi)足夠的動(dòng)物）。動(dòng)物購(gòu)買(mǎi)的途徑、安置的地點(diǎn)，飲食管理（一般實(shí)驗(yàn)室會(huì)有動(dòng)物房，也可以從其他地方購(gòu)買(mǎi)），動(dòng)物免疫證明、倫理證明需要提前準(zhǔn)備好。實(shí)驗(yàn)相關(guān)的試劑和藥物：比如造模藥物和器械，動(dòng)物干預(yù)所需藥物，陽(yáng)物選擇及購(gòu)買(mǎi)（有些藥物購(gòu)買(mǎi)很困難，必須通過(guò)特殊程序才能買(mǎi)到）。如果涉及到有創(chuàng)操作，要提前準(zhǔn)備好物（建議提前購(gòu)買(mǎi)），手術(shù)器械。需要了解自身實(shí)驗(yàn)平臺(tái)能完成哪些技術(shù)。高脂高糖動(dòng)物模型手術(shù)骨質(zhì)疏松癥是以骨量減少及骨組織微觀結(jié)構(gòu)為特征的一種全身性骨骼疾病，伴有骨的脆性增加、易于發(fā)生骨折。

    缺點(diǎn)：該移植模型的原發(fā)出現(xiàn)與轉(zhuǎn)移發(fā)生之間時(shí)間間隔短，不利于藥物藥效研究;且細(xì)胞為鼠源，與人類(lèi)有一定的差異。2異種移植模型異種移植模型是將人類(lèi)的細(xì)胞或組織移植入免疫缺陷型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)。此模型一般采用免疫缺陷型小鼠，例如無(wú)胸腺裸鼠、CB17-SCID小鼠、NOD/SCID小鼠、NSG小鼠。一般來(lái)說(shuō)，免疫缺陷程度越高，成瘤性越好。的相關(guān)研究中，人源細(xì)胞系異種移植(cell-line-derivedxenograft，CDX)模型和患者組織異種移植(patient-derivedxenograft，PDX)模型已得到廣泛應(yīng)用。CDX模型方法：將5×106的人A375黑色素瘤細(xì)胞皮下注射N(xiāo)OD/SCID小鼠腹側(cè)的雙側(cè)，成功構(gòu)建黑色素瘤CDX模型。PDX模型方法：有研究者將93個(gè)新鮮的患者組織切成2×2×2mm3碎片的大小，皮下接種6周大的NOD/SCID雌性小鼠，建立PDX模型。優(yōu)點(diǎn)：保留了病人的組織學(xué)和遺傳學(xué)特征，可模擬潰瘍狀態(tài)對(duì)人類(lèi)黑色素瘤預(yù)后的影響。缺點(diǎn)：此模型移植后的潛伏期長(zhǎng)，連續(xù)傳代后鼠基質(zhì)被人類(lèi)基質(zhì)替代，移植率可變，免疫系統(tǒng)受損，有移植物抗宿主病的可能性以及某些免疫細(xì)胞功能的缺乏。三、轉(zhuǎn)基因小鼠模型可以通過(guò)異位表達(dá)基因，引入特定的致突變或滅活抑制基因來(lái)對(duì)小鼠進(jìn)行轉(zhuǎn)基因黑色素瘤模型的構(gòu)建。

    靜置25分鐘后把酒精倒干，用吸水紙吸出多余的酒精，然后配壓縮膠，同樣的操作，關(guān)鍵是梳子要插得快，要小心梳子下產(chǎn)生氣泡，然后靜置30分鐘。如果是當(dāng)天跑膠，我會(huì)等上層膠凝2個(gè)小時(shí)再用，但要注意防干燥縮水，可以在一個(gè)小時(shí)的時(shí)候沿著梳子上緣加點(diǎn)電泳液。所以我一般提前一晚制膠，泡于純水或者電泳液里置于4度冰箱暫存。三、蛋白電泳1、上樣前準(zhǔn)備把膠組裝到電泳芯上，注意密閉性(否則漏液)，如果內(nèi)槽漏液就不是勻強(qiáng)電場(chǎng)了，條帶可能就不是一條直線。然后內(nèi)槽倒?jié)M電泳液，拔梳子，這一步要小心，梳子要兩邊一起緩緩?fù)习纬?，然后觀察泳道內(nèi)有無(wú)脫落的膠粒或者膠絲，有的話用1毫升注射器吸出。然后從冰箱取出蛋白樣品，解凍。準(zhǔn)備振蕩器。2、上樣和電泳注意，上樣后蛋白會(huì)開(kāi)始慢慢在膠中彌散，所以上樣越快越好。我習(xí)慣先上蛋白Marker,再上蛋白樣品，蛋白上樣前確保樣品完全解凍和充分振蕩(推薦使用振蕩器振蕩)，吸的時(shí)候沒(méi)有拉絲即可，建議上樣分鐘把樣品從冰上取出來(lái)，不然樣品中SDS可能會(huì)結(jié)晶析出，從而影響電泳效果。上層膠80V25分鐘，下層膠120V65分鐘。四、轉(zhuǎn)膜1、轉(zhuǎn)膜前準(zhǔn)備我會(huì)在電泳結(jié)束0分鐘準(zhǔn)備，把轉(zhuǎn)膜液配好置于4度冰箱預(yù)冷，然后裁膜，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)膜裝置。SD大鼠腦缺血模型建立。

    轉(zhuǎn)基因小鼠對(duì)黑色素瘤發(fā)生的分子途徑的理解有重要意義。此外，轉(zhuǎn)基因小鼠是可靠且可重現(xiàn)的模型，用來(lái)評(píng)估受損基因?qū)谏亓錾飳W(xué)的影響。應(yīng)用：基因工程小鼠模型可用于研究特定基因組改變?cè)诤谏亓龅陌l(fā)生和發(fā)展的重要性及藥物的靶向。1Lum－/－基因敲除小鼠Lumican是一種富含亮氨酸的小蛋白聚糖(smallleucine-richproteoglycan，SLRP)，為膠原原纖維形成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑。黑色素瘤中Lumican表達(dá)降低與浸潤(rùn)相關(guān)。方法：有研究者利用BamHI建立的克隆衍生物導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞，建立Lum－/－轉(zhuǎn)基因小鼠。該模型可提供與發(fā)生和轉(zhuǎn)移相關(guān)機(jī)制及可見(jiàn)變的進(jìn)展，以及確定負(fù)責(zé)的黑色素瘤進(jìn)展的基因。2Tyr::N-RasQ61K轉(zhuǎn)基因小鼠方法：有研究者使用突變的人N-ＲasQ61K和SV40剪接以及聚腺苷酸化序列生成Tyr::N-ＲasQ61K構(gòu)建體，并注射到卵母細(xì)胞中，建立Tyr::N-ＲasQ61K轉(zhuǎn)基因小鼠。3BrafV600E轉(zhuǎn)基因小鼠模型有研究者使用LoxP-stop-LoxP(LSL)/Cre重組酶技術(shù)從內(nèi)源性Braf基因中誘導(dǎo)BrafV600E表達(dá)，建立BrafV600E轉(zhuǎn)基因黑色素瘤小鼠模型。總結(jié)目前已有三種不同的黑色素瘤小鼠模型，但由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人類(lèi)基因組、基因調(diào)控、細(xì)胞類(lèi)型、結(jié)構(gòu)與組成等方面是有一定差別。小鼠腎纖維化（UUO）模型建立。江蘇動(dòng)物模型技術(shù)

上面是我們已構(gòu)建成功的動(dòng)物模型，我們還可以根據(jù)客戶實(shí)驗(yàn)方案構(gòu)建其它模型，具體要求請(qǐng)咨詢。寧夏裸鼠動(dòng)物模型建模

    輕微的接觸角膜的中心頂端。一通道正極接右眼，二通道正極接左眼。通過(guò)針管對(duì)雙眼滴生理鹽水，改善金環(huán)電極及角膜的接觸效果。保證兩個(gè)金環(huán)電極以相同的角度、方式接觸兩眼角膜中心正端的相同位置。5記錄示波信號(hào)確認(rèn)無(wú)誤后，關(guān)閉暗紅光。可以先嘗試記錄一下暗適應(yīng)光強(qiáng)為·s/m2的erg檢測(cè)，確認(rèn)一下信號(hào)的質(zhì)量：如果雙眼的振幅出現(xiàn)了與預(yù)期不同的較大差異，建議再次檢查金環(huán)電極的安裝位置。然后依次記錄暗適應(yīng)光強(qiáng)為·s/m2的信號(hào)。需要注意的是，完成暗適應(yīng)·s/m2光強(qiáng)檢測(cè)后，系統(tǒng)將自動(dòng)打開(kāi)背景光。同樣的，需要打開(kāi)定時(shí)器，光適應(yīng)10-15分鐘，再記錄。6經(jīng)過(guò)光適應(yīng)后，依次記錄光適應(yīng)·s/m2以及·s/m2光強(qiáng)下波形，記錄·s/m2光強(qiáng)下閃爍視網(wǎng)膜誘發(fā)電位。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在4個(gè)月時(shí)，與ctrl(對(duì)照)小鼠比較，cko(gm20541基因敲除純合子小鼠)小鼠的a波和b波在暗適應(yīng)和光適應(yīng)條件下均明顯降低，表明gm20541敲除后導(dǎo)致視力受損(見(jiàn)圖5和圖6)。實(shí)施例4視網(wǎng)膜石蠟切片h&e染色：對(duì)4月齡小鼠的視網(wǎng)膜進(jìn)行石蠟切片、蘇木精-伊紅染色法(h&e染色方法)染色，具體操作如下：1)快速取小鼠眼球組織，并置于固定液中固定24h；2)石蠟包埋，切片，厚度為4μm；3)切片常規(guī)用二甲苯脫蠟。寧夏裸鼠動(dòng)物模型建模

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