腹主動脈縮窄致心衰大鼠模型一、服務(wù)信息1、動物模型名稱：腹主動脈縮窄致心衰大鼠模型2、實驗動物種屬：SD大鼠3、實驗動物性別：雌性4、實驗動物年齡：成年5、實驗動物體重：180~220g6、實驗動物環(huán)境：SPF級二、服務(wù)項目服務(wù)編號服務(wù)內(nèi)容服務(wù)周期價錢DH2015腹主動脈縮窄致心衰大鼠模型15周詢價1、實驗方法：采用主動脈縮窄法建立模型大鼠麻醉后，仰臥位固定、去腹毛、消毒，沿腹正中線切開皮膚及肌層，分離出腹主動脈，在腎動脈上方將腹主動脈與鈍頭8號探針一起結(jié)扎后，小心抽出針頭。手術(shù)造模后大鼠正常飼養(yǎng)3個月。大鼠終末體重(BW),心室重(VW),計算心體比(VW/BW),并進行心功能檢測,包括心率(HR)、左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)及左室最大壓力上升及下降速度(±dp/dtmax),并對心肌組織進行病理學(xué)檢測.2、檢測標(biāo)準(zhǔn)：模型組大鼠VW/BW明顯增加，LVSP明顯降低，LVEDP明顯升高，±dp/dtmax則**減小，與正常對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)差異。病理學(xué)檢測結(jié)果表明心肌出現(xiàn)典型心衰樣病理改變。三、交付標(biāo)準(zhǔn):1.提供動物模型構(gòu)建過程中的原始實驗記錄及數(shù)據(jù)圖片。2.根據(jù)要求提供構(gòu)建成功的模型動物或相關(guān)組織材料。四、服務(wù)項目說明：1、如有特殊要求，請另詢價。臨床上平時不易見到的疾病可用動物隨時復(fù)制出來。湖北小鼠動物模型培養(yǎng)

    e：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖b波統(tǒng)計；scotopicamplitude：暗光測定峰值；flashintensity：閃光強度；a-wave：a波；b-wave：b波。圖6：光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖(erg)檢測結(jié)果；圖中：a-b：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖軌跡圖；c：20cd·s/m2光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)閃爍(flicker)視網(wǎng)膜電圖軌跡圖；d：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖a波統(tǒng)計；e：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖b波統(tǒng)計；f：20cd·s/m2光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)閃爍(flicker)視網(wǎng)膜電圖統(tǒng)計。sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子。圖7：視網(wǎng)膜前體細(xì)胞特異敲除gm20541基因小鼠視網(wǎng)膜切片免疫組化染色結(jié)果；小鼠年齡：4個月；os：outer-segment(外節(jié))；is：inner-segment(內(nèi)節(jié))；onl：outernuclearlayer(外核層)；inl：innernuclearlayer(內(nèi)核層)；圖中：a：視網(wǎng)膜前體細(xì)胞特異敲除gm20541基因小鼠視網(wǎng)膜石蠟切片的h&e染色結(jié)果，外核層及內(nèi)核層均變??；b：對不同部位的gm20541敲除鼠視網(wǎng)膜外核層厚度統(tǒng)計。圖8：視網(wǎng)膜前體細(xì)胞特異敲除gm20541基因小鼠ihc染色結(jié)果。云南動物模型服務(wù)急性肺損傷(acute lung injury，ALI)。

    擴增產(chǎn)物為。其中a2,3,6,9,10,b1為陽性。擴增3’端長臂使用引物：neof:5’-cgccttcttgacgagttcttctga-3’；gm3’lrr:5’-ggtgcttgagtagtgttgaatctcagtggacca-3’結(jié)果見圖3中b，擴增產(chǎn)物為。其中：a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g為陽性雜合子，+/+為野生型對照。5將步驟4得到的雜合子小鼠動物與轉(zhuǎn)基因鼠flper鼠交配繁育，得到gm20541基因條件性敲除雜合子小鼠；6將步驟5得到的gm20541基因條件性敲除雜合子小鼠相互交配繁育，得到gm20541基因條件性敲除純合子小鼠；7將步驟6得到的gm20541基因條件性敲除純合子動物與轉(zhuǎn)six3-cre基因動物交配，得到視網(wǎng)膜前體細(xì)胞gm20541基因敲除小鼠。轉(zhuǎn)基因鼠flper鼠購自美國捷克森實驗室(品系名稱：(rosa)26sortm1(flp1)dym/rainj)。six3-cre轉(zhuǎn)基因小鼠(mgi：3574771)由美國德克薩斯大學(xué)安德森中心贈送。six3是一個前腦腹側(cè)和視網(wǎng)膜前體細(xì)胞的標(biāo)志性轉(zhuǎn)錄因子，其特異性驅(qū)動cre基因在視網(wǎng)膜前體細(xì)胞表達(dá)，cre蛋白可以進入細(xì)胞核，識別基因組上loxp位點，實現(xiàn)基因敲除。基因敲除小鼠鑒定步驟：對上述視網(wǎng)膜前體細(xì)胞敲除gm20541基因的小鼠的基因型鑒定，操作如下：(1)剪小鼠尾梢少許組織樣本，置于干凈的；(2)在離心管中加入100μl裂解液。

    應(yīng)根據(jù)所檢測指標(biāo)的要求，需采取不同策略處理。在如今分子生物學(xué)當(dāng)?shù)赖默F(xiàn)實背景下，動物實驗除了對實驗動物的體征及生理指標(biāo)進行的監(jiān)控外，各種分子檢測甚至是組學(xué)檢測也開始大行其道，動物實驗結(jié)束之后的機制研究成為了實驗的重頭戲。一般來說，動物實驗檢測對象主要包括：（1）體液中各類因子定性及定量檢測由于此類檢測對象多為蛋白及各類小分子物質(zhì)，因此在取樣過程中應(yīng)注意防止此類物質(zhì)降解，在獲取后，應(yīng)及時置于溫（≤-80℃）進行保存，在后續(xù)實驗過程中，也應(yīng)當(dāng)注意保存條件的穩(wěn)定性，避免反復(fù)凍融。常用的方法便是酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA），除此之外，可利用生化分析儀及不同檢測方法的試劑盒（比色法、比濁法等）方法對各類生化指標(biāo)及因子進行定性及定量檢測。（2）組織病理、生理變化及免疫組化檢測常用的病理檢測多使用H&E染色對細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核進行染色標(biāo)記，以觀察細(xì)胞變化。除此之外，許多特殊染色也在病理生理變化中得到了應(yīng)用，如利用Masson染色檢測組織纖維化病變，Nissl染色檢測神經(jīng)元損傷，β-半乳糖甘酶染色檢測細(xì)胞衰老等。此外，還可以通過免疫組化技術(shù)對某些特異性標(biāo)記物進行免疫顯色檢測，達(dá)到原位定性或定量檢測的目的。。避免了在人身上進行實驗所帶來的風(fēng)險。

    實驗樣本分類實驗一般采取樣本有：血液樣本、組織樣本和細(xì)胞樣本。通常，組織樣本采集后，應(yīng)立即用等滲溶液（PBS或生理鹽水）盡量把血液漂洗干凈（除非血液也是分析對象），用濾紙或紗布吸干，把樣本分切成幾分，每份的體積約2個黃豆大小，每份用一個管子裝。血液樣本的采集應(yīng)根據(jù)不同實驗的要求，將會采取不同策略。血清樣本：全血中不加抗凝劑，血液凝固后取出的不含凝血因子的淡黃色透明液體。（全血標(biāo)本室溫放置2小時3000rpm/min離心15min）血漿樣本：全血中加抗凝劑，血液凝固后取出的含凝血因子的淡黃色透明液體。（可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃，3000rpm/min離心15min）如果是做生化\ELISA等檢測可以考慮血漿和血清，根據(jù)獲得的樣本量可考慮分裝成100-500μl/管，可避免反復(fù)凍融造成的檢測誤差。生化：建議優(yōu)先選擇血清，其次選擇肝素抗凝血漿；ELISA：建議優(yōu)先選擇血清，其次選擇肝素或EDTA抗凝血漿；凝血實驗：只能選擇枸櫞酸鈉抗凝血漿；血常規(guī)：只能選擇EDTA抗凝全血；如果要收集其中的白細(xì)胞、血小板等建議用抗凝全血。如果要做流式建議用專門的流式用血液收集管，防止表面抗原的丟失，或者盡快安排就近檢測。樣本處理取樣完后?？商峁I(yè)的大鼠小鼠動物疾病模型技術(shù)，包含心血管系統(tǒng)神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、生殖、泌尿系統(tǒng)、成瘤系統(tǒng)等。云南動物模型構(gòu)建

LPS脂多糖致膿毒血癥肝損傷小鼠模型。湖北小鼠動物模型培養(yǎng)

    靜置25分鐘后把酒精倒干，用吸水紙吸出多余的酒精，然后配壓縮膠，同樣的操作，關(guān)鍵是梳子要插得快，要小心梳子下產(chǎn)生氣泡，然后靜置30分鐘。如果是當(dāng)天跑膠，我會等上層膠凝2個小時再用，但要注意防干燥縮水，可以在一個小時的時候沿著梳子上緣加點電泳液。所以我一般提前一晚制膠，泡于純水或者電泳液里置于4度冰箱暫存。三、蛋白電泳1、上樣前準(zhǔn)備把膠組裝到電泳芯上，注意密閉性(否則漏液)，如果內(nèi)槽漏液就不是勻強電場了，條帶可能就不是一條直線。然后內(nèi)槽倒?jié)M電泳液，拔梳子，這一步要小心，梳子要兩邊一起緩緩?fù)习纬?，然后觀察泳道內(nèi)有無脫落的膠粒或者膠絲，有的話用1毫升注射器吸出。然后從冰箱取出蛋白樣品，解凍。準(zhǔn)備振蕩器。2、上樣和電泳注意，上樣后蛋白會開始慢慢在膠中彌散，所以上樣越快越好。我習(xí)慣先上蛋白Marker,再上蛋白樣品，蛋白上樣前確保樣品完全解凍和充分振蕩(推薦使用振蕩器振蕩)，吸的時候沒有拉絲即可，建議上樣分鐘把樣品從冰上取出來，不然樣品中SDS可能會結(jié)晶析出，從而影響電泳效果。上層膠80V25分鐘，下層膠120V65分鐘。四、轉(zhuǎn)膜1、轉(zhuǎn)膜前準(zhǔn)備我會在電泳結(jié)束0分鐘準(zhǔn)備，把轉(zhuǎn)膜液配好置于4度冰箱預(yù)冷，然后裁膜，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)膜裝置。湖北小鼠動物模型培養(yǎng)