易操作原代細胞和細胞系的比較3.原代細胞的應用由于原代細胞生物學特性未發(fā)生很大改變，接近和反映體內(nèi)生長特性，因此是：(1)研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的工具；(2)更好實現(xiàn)醫(yī)診治模式，實現(xiàn)個體化用藥的目的。第二部分：原代細胞分離和培養(yǎng)技術原代培養(yǎng)的原理將動物機體的各種組織從機體中取出，經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶/膠原酶)、螯合劑(常用EDTA)或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng)。主要包括取材——分離——培養(yǎng)等3部分；在原代細胞應用較多的包括：組織（如實體瘤、皮膚等）、懸浮細胞的取材等。下面依次介紹：一、組織的取材病人自體的原代細胞由于更接近臨床患者標本，可以更好實現(xiàn)醫(yī)療的診治模式，實現(xiàn)個體化用藥的目的。所以對病人自體細胞體外分離與培養(yǎng)十分必要。基本過程如下圖所示：原代細胞的分離步驟備注：上圖細胞為肉瘤患者的原代細胞具體步驟如下：1.在無菌條件下的冰上對新鮮離體的組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；2.加入2mmol的EDTA，搖勻后放置冰上約30-60min；3.離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；4.消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。使得體外培養(yǎng)的臍靜脈平滑肌細胞作為研究血管的模型細胞。上海C57原代細胞實驗

    具體實施方式以下結(jié)合附圖和具體實施例，對本實用新型進行詳細說明。如圖1至圖5所示，一種新型原代細胞培養(yǎng)箱，包括若干個用于存放細胞培養(yǎng)皿的內(nèi)箱盒2、及用于存放所述內(nèi)箱盒的外箱體1，所述外箱體1內(nèi)設有若干列中空的矩形槽11，各所述矩形槽11的兩側(cè)分別設有若干層對稱的滑槽111，若干層所述滑槽111由上至下等間距依次設置，每一層所述滑槽111的正面及背面各存設有一內(nèi)箱盒2，所述內(nèi)箱盒2包括底盒21、紫外燈23及上蓋22，所述紫外燈23設于底盒21內(nèi)，所述底盒21與上蓋22的一側(cè)通過合頁鉸接，所述底盒21與上蓋22的另一側(cè)通過鎖扣24扣合連接，所述底盒21上設有推拉把手25，所述底盒21的兩側(cè)分別設有與滑槽111適配的滑輪211，所述底盒21兩側(cè)的頭部分別設有與滑槽111適配的滑塊212。如圖1至圖3所示，內(nèi)箱盒2內(nèi)可存放細胞的培養(yǎng)皿，外箱體1的正面及背面均可存放內(nèi)箱盒2，正背兩面可同時存放內(nèi)箱盒2的設計，提高了細胞培養(yǎng)箱的空間利用率，使得細胞培養(yǎng)箱在同一占地面積的情況下可存儲更多的細胞培養(yǎng)皿。存放時，只需將內(nèi)箱盒2的滑輪211對準滑槽111，手持在底盒21上的推拉把手25，通過滑輪211滑動的方式，將內(nèi)箱盒2推送至滑槽111內(nèi)。云南模式原代細胞購買本產(chǎn)品經(jīng)過光鏡檢測形態(tài)，經(jīng)陽性蛋白標記物免疫熒光檢測鑒定及糖原染色檢測鑒定陽性。

    4、凍存的細胞該如何開始培養(yǎng)？(1)將一管細胞從液氮罐中取出，注意保護手和眼睛。(2)將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體完全融化。(3)將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。(4)用70％的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。(5)打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋（注意，由于凍存管有負壓，開蓋時可能會有少量溢出，這是正?，F(xiàn)象）。(6)用多聚賴氨酸（或參照說明書）包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細胞。(7)蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。(8)將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中（37℃，5%CO2，95%空氣）(9)放入培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。5、細胞培養(yǎng)過程中，多久更換一次培養(yǎng)基？這取決于細胞生長的速度。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基，許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。注意：凍存細胞復蘇后，在6-16小時內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細胞。6、我能擴增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細胞嗎？這取決于細胞的類型。一些細胞類型像神經(jīng)細胞，神經(jīng)膠質(zhì)細胞和一些生長緩慢的上皮細胞。

    使得初學者或不熟練的實驗人員在用爬片法制備原代細胞時，會造成污染或?qū)嶒炂鞑?實驗動物)的浪費，損失人力，物力，財力。這就急需一個出色的一體式原代細胞爬片培養(yǎng)瓶來滿足上述實驗需求。申請人根據(jù)多年的提取原代背根神經(jīng)節(jié)膠質(zhì)細胞和血管平滑肌細胞的經(jīng)驗,創(chuàng)造性、開拓性的設計了一種一體式原代細胞爬片培養(yǎng)瓶。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的為了解決現(xiàn)有培養(yǎng)瓶(皿)進行原代細胞爬片培養(yǎng)存在的許多不便和不足之處，故提出一種操作方便，結(jié)構(gòu)設計合理，有助于爬片法制備原代細胞的培養(yǎng)瓶。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案：一種一體式原代細胞爬片培養(yǎng)瓶，包括瓶身，所述瓶身的其中一側(cè)端部設有爬片瓶頸和加樣口，瓶身的上端部設有外接圓柱，所述外接圓柱的頂端封閉、下端與瓶身連通，并且外接圓柱內(nèi)設有活動圓盤和纖維圓盤，所述活動圓盤位于纖維圓盤的上方，活動圓盤的四周外壁與外接圓柱的內(nèi)壁可滑動接觸，并且在外接圓柱內(nèi)壁上設有用于限制活動圓盤向上活動的阻隔環(huán)，同時在外接圓柱位于活動圓盤上方的柱體上設有正壓口，所述纖維圓盤固定設置，并且在纖維圓盤內(nèi)可活動穿插有連接桿，所述連接桿上端與活動圓盤固定連接。血管疾病發(fā)生和發(fā)展的一個主要因素是由于血管平滑肌細胞轉(zhuǎn)變成為了具有繁殖能力的表型。

    換液時間隔一般較短。原代細胞培養(yǎng)問題解答1、原代細胞與細胞系有什么區(qū)別？根據(jù)傳統(tǒng)定義，自組織收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney,.(1987)..(NewYork,.)].這類細胞直接從組織分離，生命周期有限，經(jīng)數(shù)次傳代后會逐漸停止生長。原代細胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性。細胞系是不斷生長、分化的細胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研。但實際上，經(jīng)過長時間、連續(xù)的傳代培養(yǎng)后，細胞系隨著代數(shù)的增加，細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群，除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。2、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)的翻倍，通常是指細胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的，是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。3、接收到的凍存細胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快，以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。為了后續(xù)實驗成功進行，我們對分離培養(yǎng)的細胞做一個細胞鑒定實驗。江蘇小鼠原代細胞外包

利用流式細胞儀對分選的原代HUVECs進行鑒定。上海C57原代細胞實驗

    在短時間內(nèi)即可大量擴增，并產(chǎn)生殺死細胞。的種類繁多，肉眼可見，漂浮于培養(yǎng)液面上，可呈絲狀、管狀或樹枝狀等。2.合適的溫度一般哺乳類與禽類細胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37～38℃，不適宜的環(huán)境溫度會影響細胞的生長。細胞對低溫的耐受能力要強于對高溫的耐受能力，在低溫下，細胞的代謝活力及核分裂能力降低。若溫度不低于0℃，雖然細胞代謝受到影響，但無損傷作用；25～35℃時，細胞以緩慢的速度生長；但若被置于40℃數(shù)小時，則不不利于細胞生存、生長，甚至可導致其死亡。3.適宜的滲透壓高滲溶液或低滲溶液會引起細胞發(fā)生褶皺、腫脹、破裂。因此，滲透壓是體外培養(yǎng)細胞的重要條件之一。多數(shù)體外培養(yǎng)的細胞對滲透壓都有一定的耐受能力，實際應用中，260～320mmol/L的滲透壓可適用于大多數(shù)細胞。4．氣體環(huán)境與pH細胞的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境，氧氣、二氧化碳是細胞生存的必要條件。氧氣參與細胞的三羧酸循環(huán)，為細胞生存、代謝與合成提供能量；二氧化碳既是細胞的代謝產(chǎn)物，是細胞生長的必需成分，又與維持培養(yǎng)液的pH有關。大多數(shù)細胞適宜的pH范圍往往是～。在開放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳氣體比例為宜。上海C57原代細胞實驗