導(dǎo)語(yǔ)對(duì)于大部分科研人員來(lái)說(shuō)，研究中一般用到均是現(xiàn)成的細(xì)胞系/株，我們只需要：進(jìn)行細(xì)胞傳代和保種。然而，這些細(xì)胞系常常由于體外長(zhǎng)期培養(yǎng)，而丟失原有生物學(xué)特性，對(duì)藥物處理的反應(yīng)差距越來(lái)越大。因此，原代細(xì)胞的地位日漸凸顯，Paper中若有了原代細(xì)胞的數(shù)據(jù)都會(huì)添色不少。然而，就小編親生經(jīng)歷，原代細(xì)胞分離著實(shí)是個(gè)技術(shù)活，結(jié)合自身經(jīng)驗(yàn)，為大家介紹：組織和正常組織的原代細(xì)胞的分離與培養(yǎng)方法。原代細(xì)胞的基本知識(shí)1.什么是原代細(xì)胞培養(yǎng)?原代細(xì)胞（Primarycells）：是指直接從機(jī)體取出的組織或細(xì)胞獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞。這里的組織主要指：組織、外周血及胚胎等。原代細(xì)胞培養(yǎng)：由于原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，繁殖一定的代數(shù)停止生長(zhǎng)（一般10代以內(nèi)）。所以一般認(rèn)為：培養(yǎng)的原代的第1和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。2.原代細(xì)胞與細(xì)胞系（celllines）的區(qū)別原代細(xì)胞和細(xì)胞系的比較：PrimarycellsCelllines增殖能力較弱強(qiáng)繁殖代數(shù)一般只能傳10代以內(nèi)無(wú)限增殖，50代左右遺傳物質(zhì)完整性遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)發(fā)生改變生物特性接近臨床樣本偏離臨床樣本培養(yǎng)容易程度比較復(fù)雜簡(jiǎn)單。人臍靜脈血管平滑肌細(xì)胞分離自臍帶組織，是臍靜脈的重要結(jié)構(gòu)之一。寧夏哪里有原代細(xì)胞技術(shù)

    原代細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題解答1、原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別？根據(jù)傳統(tǒng)定義，自組織收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞[Freshney,.(1987)..(NewYork,.)].這類細(xì)胞直接從組織分離，生命周期有限，經(jīng)數(shù)次傳代后會(huì)逐漸停止生長(zhǎng)。原代細(xì)胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞的生長(zhǎng)空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性。細(xì)胞系是不斷生長(zhǎng)、分化的細(xì)胞群，因其經(jīng)過(guò)遺傳改造，致使其具有無(wú)限增長(zhǎng)的潛能。體外生長(zhǎng)的細(xì)胞系用于醫(yī)療或科研。但實(shí)際上，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間、連續(xù)的傳代培養(yǎng)后，細(xì)胞系隨著代數(shù)的增加，細(xì)胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群，除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。2、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)的翻倍，通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長(zhǎng)期。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過(guò)程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的，是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長(zhǎng)。3、接收到的凍存細(xì)胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細(xì)胞從干冰移入液氮中凍存。此過(guò)程盡量快，以避免升溫。不要將細(xì)胞儲(chǔ)存在-80℃，這樣會(huì)對(duì)細(xì)胞造成不可挽回的傷害。4、凍存的細(xì)胞該如何開(kāi)始培養(yǎng)？。湖南大鼠原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室骨骼肌的一般形態(tài)特征肌細(xì)胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方。

    一號(hào)培養(yǎng)板200頂部設(shè)置有梯形卡槽210，梯形卡槽210前側(cè)壁固定安裝有固定螺絲220，一號(hào)培養(yǎng)板200粘接在底座100的頂部，一號(hào)培養(yǎng)板200的頂部開(kāi)有梯形卡槽210，梯形卡槽210前側(cè)壁螺接有固定螺絲220，一號(hào)培養(yǎng)板200用于承載培養(yǎng)皿槽400和梯形卡槽210，梯形卡槽210用于配合梯形卡塊310連接二號(hào)培養(yǎng)板300，固定螺絲220用于固定二號(hào)培養(yǎng)板300；請(qǐng)?jiān)俅螀㈤唸D1，一號(hào)培養(yǎng)板200頂部設(shè)置有二號(hào)培養(yǎng)板300，二號(hào)培養(yǎng)板300底部固定安裝有與梯形卡槽210相配合的梯形卡塊310，二號(hào)培養(yǎng)板300底部粘接有梯形卡塊310，二號(hào)培養(yǎng)板300通過(guò)梯形卡塊310與一號(hào)培養(yǎng)板200卡接，二號(hào)培養(yǎng)板300用于承載培養(yǎng)皿槽400和梯形卡塊310，梯形卡塊310用于配合梯形卡槽210固定二號(hào)培養(yǎng)板300；請(qǐng)?jiān)俅螀㈤唸D1，一號(hào)培養(yǎng)板200和所述二號(hào)培養(yǎng)板300表面設(shè)置有培養(yǎng)皿槽400，培養(yǎng)皿槽400內(nèi)腔側(cè)壁設(shè)置有限位槽410，限位槽410內(nèi)腔固定安裝有限位彈簧420，限位彈簧420頂部貫穿限位槽410設(shè)置有固定桿430，具體的，一號(hào)培養(yǎng)板200和所述二號(hào)培養(yǎng)板300表面開(kāi)有培養(yǎng)皿槽400，培養(yǎng)皿槽400內(nèi)腔側(cè)壁開(kāi)有限位槽410，限位槽410內(nèi)腔螺接有限位彈簧420，限位彈簧420頂部貫穿限位槽410粘接有固定桿430，培養(yǎng)皿槽400用于承載限位槽410。

    ⑦實(shí)驗(yàn)完畢及時(shí)收拾，保持工作區(qū)域清潔整齊，用75%酒精清潔臺(tái)面。（3）細(xì)胞污染的預(yù)防①實(shí)驗(yàn)用品防止污染。細(xì)胞培養(yǎng)所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌要仔細(xì)，并在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)檢測(cè)陰性后才能使用。操作室及剩余的無(wú)菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。②操作過(guò)程防止污染。③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進(jìn)入細(xì)胞間。④實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前需要確定戴的手套沒(méi)有問(wèn)題，只要接觸過(guò)生物安全柜之外的物品，必須及時(shí)對(duì)手套進(jìn)行消毒。⑤進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)間后關(guān)好門，坐下來(lái)盡量少走動(dòng)以免影響生物安全柜的風(fēng)簾。工作開(kāi)始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴(yán)格檢查所用的器材、溶液和細(xì)胞，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無(wú)菌室內(nèi)，更不能隨便使用，以免造成大規(guī)模污染。⑥細(xì)胞操作時(shí)動(dòng)作要輕，必須在火焰周圍無(wú)菌區(qū)內(nèi)打開(kāi)瓶口，并將瓶口放在火焰周圍簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。⑦實(shí)驗(yàn)操作時(shí)生物安全柜的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時(shí)不能對(duì)著工作區(qū)，以免造成不必要的污染。⑧瓶蓋應(yīng)當(dāng)?shù)狗旁谶h(yuǎn)離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。⑨不要從敞開(kāi)的容器口上方經(jīng)過(guò)。HUVSMC(人臍靜脈血管平滑肌細(xì)胞)。

    使得初學(xué)者或不熟練的實(shí)驗(yàn)人員在用爬片法制備原代細(xì)胞時(shí)，會(huì)造成污染或?qū)嶒?yàn)器材(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物)的浪費(fèi)，損失人力，物力，財(cái)力。這就急需一個(gè)出色的一體式原代細(xì)胞爬片培養(yǎng)瓶來(lái)滿足上述實(shí)驗(yàn)需求。申請(qǐng)人根據(jù)多年的提取原代背根神經(jīng)節(jié)膠質(zhì)細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞的經(jīng)驗(yàn),創(chuàng)造性、開(kāi)拓性的設(shè)計(jì)了一種一體式原代細(xì)胞爬片培養(yǎng)瓶。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的為了解決現(xiàn)有培養(yǎng)瓶(皿)進(jìn)行原代細(xì)胞爬片培養(yǎng)存在的許多不便和不足之處，故提出一種操作方便，結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)合理，有助于爬片法制備原代細(xì)胞的培養(yǎng)瓶。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案：一種一體式原代細(xì)胞爬片培養(yǎng)瓶，包括瓶身，所述瓶身的其中一側(cè)端部設(shè)有爬片瓶頸和加樣口，瓶身的上端部設(shè)有外接圓柱，所述外接圓柱的頂端封閉、下端與瓶身連通，并且外接圓柱內(nèi)設(shè)有活動(dòng)圓盤(pán)和纖維圓盤(pán)，所述活動(dòng)圓盤(pán)位于纖維圓盤(pán)的上方，活動(dòng)圓盤(pán)的四周外壁與外接圓柱的內(nèi)壁可滑動(dòng)接觸，并且在外接圓柱內(nèi)壁上設(shè)有用于限制活動(dòng)圓盤(pán)向上活動(dòng)的阻隔環(huán)，同時(shí)在外接圓柱位于活動(dòng)圓盤(pán)上方的柱體上設(shè)有正壓口，所述纖維圓盤(pán)固定設(shè)置，并且在纖維圓盤(pán)內(nèi)可活動(dòng)穿插有連接桿，所述連接桿上端與活動(dòng)圓盤(pán)固定連接。細(xì)胞操作都需嚴(yán)格按照無(wú)菌操作進(jìn)行。湖北血液原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

血管平滑肌是許多重大血管疾病的細(xì)胞基礎(chǔ)。寧夏哪里有原代細(xì)胞技術(shù)

    易操作原代細(xì)胞和細(xì)胞系的比較3.原代細(xì)胞的應(yīng)用由于原代細(xì)胞生物學(xué)特性未發(fā)生很大改變，接近和反映體內(nèi)生長(zhǎng)特性，因此是：(1)研究生物體細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝、繁殖提供有力的工具；(2)更好實(shí)現(xiàn)醫(yī)診治模式，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥的目的。第二部分：原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)技術(shù)原代培養(yǎng)的原理將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶/膠原酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖，這一過(guò)程稱原代培養(yǎng)。主要包括取材——分離——培養(yǎng)等3部分；在原代細(xì)胞應(yīng)用較多的包括：組織（如實(shí)體瘤、皮膚等）、懸浮細(xì)胞的取材等。下面依次介紹：一、組織的取材病人自體的原代細(xì)胞由于更接近臨床患者標(biāo)本，可以更好實(shí)現(xiàn)醫(yī)療的診治模式，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥的目的。所以對(duì)病人自體細(xì)胞體外分離與培養(yǎng)十分必要。基本過(guò)程如下圖所示：原代細(xì)胞的分離步驟備注：上圖細(xì)胞為肉瘤患者的原代細(xì)胞具體步驟如下：1.在無(wú)菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的組織，剔除包膜及壞死組織，無(wú)菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；2.加入2mmol的EDTA，搖勻后放置冰上約30-60min；3.離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；4.消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。寧夏哪里有原代細(xì)胞技術(shù)