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來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-03-06

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保存于嚴(yán)密緊塞或加蓋的容器里,同時(shí)在容器外上標(biāo)簽,并隨同材料在溶液中投入相應(yīng)的標(biāo)簽,以免相互混淆。標(biāo)簽上注明固定液、材料來(lái)源、日期等。標(biāo)簽上的文字,應(yīng)用黑色鉛筆或繪圖黑墨水書(shū)寫(xiě)。3.脫水注意事項(xiàng)(1)脫水原理:乙醇與石蠟不相溶,而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蠟。當(dāng)組織中全部被二甲苯占有時(shí),光線可以透過(guò),組織呈現(xiàn)出不同程度的透明狀態(tài)。(2)脫水必須在有蓋的玻璃品中進(jìn)行,防止吸收空氣中的水分。(3)在更換高一級(jí)的脫水劑時(shí),不要移動(dòng)材料以免損壞,可用吸管吸出器皿中的脫水劑,再用吸水吸盡器皿內(nèi)剩余液,然后于皿中加入高一級(jí)脫水劑。(4)在低濃度酒精中,每級(jí)停留不宜太長(zhǎng),否則易使組織變軟,助長(zhǎng)材料的解體。(5)在高濃度或純酒精中,每級(jí)停留的時(shí)間也不宜太長(zhǎng),否則會(huì)使組織變脆,影響切片。(6)如需過(guò)夜,應(yīng)停留在70%酒精中。(7)脫水必須徹底,否則不易透明,甚至使透明劑內(nèi)出現(xiàn)白色混濁現(xiàn)象。4.透明注意事項(xiàng)(1)使用透明劑時(shí),要隨時(shí)蓋緊蓋子,以免空氣中的水分進(jìn)入。(2)更換每級(jí)透明劑,動(dòng)作要迅速,一方面為了不使材料塊干涸,另一方面能避免吸收濕氣。(3)在透明過(guò)程中,如果材料周圍出現(xiàn)白色霧狀,說(shuō)明材料中的水未被脫凈。貴州哪里有科研技術(shù)服務(wù)培養(yǎng)在藥物研發(fā)過(guò)程中,科研人員可以通過(guò)對(duì)動(dòng)物模型進(jìn)行藥物處理,觀察其療效和副作用,為新藥的試驗(yàn)提供依據(jù)。

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用伊紅乙醇液對(duì)比染色1~3min。(4)將切片放入95%乙醇中洗去多余的紅色,然后放入無(wú)水乙醇中3~5min,吸干后將切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3~5min。3、觀察在鏡下可見(jiàn)卵巢呈扁橢圓形,表面為單層扁平上皮細(xì)胞或單層立方上皮,卵巢實(shí)質(zhì)分為皮質(zhì)和髓質(zhì)??梢?jiàn)上皮,原始卵泡和生長(zhǎng)卵泡。卵巢組織中各發(fā)育階段卵泡及卵巢基質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰可見(jiàn),細(xì)胞核呈藍(lán)紫色,細(xì)胞質(zhì)及間質(zhì)成分呈淺紅色,卵泡中卵母細(xì)胞、卵泡細(xì)胞、透明帶均清晰可見(jiàn)。注意事項(xiàng)1.取材注意事項(xiàng)(1)取材動(dòng)作要迅速,不宜作太久的拖延以免組織細(xì)胞的成分、結(jié)構(gòu)等發(fā)生變化。(2)切片材料應(yīng)根據(jù)需要觀察的部位進(jìn)行選擇,盡可能不要損傷所需要的部分。(3)切取的組織塊不宜太大,以利于固定劑穿透,通常以5mmx5mmx2mm或10mmx10mmx2mm為宜。2.固定注意事項(xiàng)(1)一般固定液,都以新配為好,配好后應(yīng)貯存在陰涼處,不宜放在日光下,以免引起化學(xué)變化,失去固定作用。(2)有些混合固定液的成份之間會(huì)發(fā)生氧化還原作用,一定要在使用前才混合,如果混合太早,固定時(shí)就沒(méi)有作用了。(3)固定材料時(shí),固定液必須充足,一般為材料塊的20~30倍,有些水分多的材料,中間應(yīng)更換1~2次新液。(4)材料固定完畢后。

二甲苯Ⅰ、Ⅱ各15min至透明。(2)放入二甲苯和石蠟等量混合液處理15min,再放入石蠟Ⅰ、Ⅱ透蠟各50~60min。透蠟在恒溫箱內(nèi)進(jìn)行,箱內(nèi)溫度保持在55~60℃左右。4、包埋(1)用鑷子夾取蠟?zāi)T诰凭珶羯仙约訜?,并倒入少許從溫箱中取出的純石蠟。(2)再將鑷子在酒精燈上稍加熱,夾取材料將切面朝下放入蠟?zāi)V?,排列整齊,再放上包埋盒,輕輕倒入熔蠟。5、切片、展片、貼片(1)將包埋好的石蠟塊固定在切片機(jī)上,調(diào)整厚度調(diào)節(jié)器到所需的切片厚度,一般為4~6μm。(2)切下的組織薄片要放到加熱的水中燙平,再貼到載玻片上,放45℃恒溫箱中烘干。二、HE染色1、脫蠟、復(fù)水(1)保持水浴鍋溫度為60℃,將切片放入干燥的染色缸內(nèi),放入水浴鍋中,30min至蠟熔化。(2)石蠟切片經(jīng)二甲苯Ⅰ、Ⅱ脫蠟各5min,然后放入100%、95%、90%、80%、70%各級(jí)酒精溶液中各3~5min,再放入蒸餾水中3min,以便染料可以進(jìn)入組織。2、染色、脫水(1)切片放入蘇木精中染色約10~30min,用流水沖洗約15min,使切片顏色變藍(lán)。(2)將切片放入1%鹽酸乙醇液中褪色,幾秒后見(jiàn)切片變紅、顏色較淺即可,后將切片再放入流水中使其恢復(fù)藍(lán)色。(3)切片放入50%、70%、80%乙醇中各3~5min。了解更多關(guān)于動(dòng)物模型的問(wèn)題歡迎來(lái)電咨詢,如您需要,竭誠(chéng)為您服務(wù)。

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應(yīng)根據(jù)所檢測(cè)指標(biāo)的要求,需采取不同策略處理。在如今分子學(xué)當(dāng)?shù)赖默F(xiàn)實(shí)背景下,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)除了對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體征及生理指標(biāo)進(jìn)行全的監(jiān)控外,各種分子檢測(cè)甚至是組學(xué)檢測(cè)也開(kāi)始大行其道,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后的機(jī)制研究成為了實(shí)驗(yàn)的重頭戲。一般來(lái)說(shuō),動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)象主要包括:(1)體液中各類因子定性及定量檢測(cè)由于此類檢測(cè)對(duì)象多為蛋白及各類小分子物質(zhì),因此在取樣過(guò)程中應(yīng)注意防止此類物質(zhì)降解,在獲取后,應(yīng)及時(shí)置于溫(≤-80℃)進(jìn)行保存,在后續(xù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,也應(yīng)當(dāng)注意保存條件的穩(wěn)定性,避免反復(fù)凍融。常用的方法便是酶聯(lián)免吸附測(cè)定(ELISA),除此之外,可利用生化分析儀及不同檢測(cè)方法的(比色法、比濁法等)方法對(duì)各類生化指標(biāo)及因子進(jìn)行定性及定量檢測(cè)。(2)生理變化及免組化檢測(cè)常用的理檢測(cè)多使用H&E染色對(duì)細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核進(jìn)行染色標(biāo)記,以觀察細(xì)胞變化。除此之外,許多特殊染色也在理生理變化中得到了應(yīng)用,如利用Masson染色檢測(cè)纖維化變,Nissl染色檢測(cè)神經(jīng)元損傷,β-半乳糖甘酶染色檢測(cè)細(xì)胞衰老等。此外,還可以通過(guò)免組化技術(shù)對(duì)某些特異性標(biāo)記物進(jìn)行免顯色檢測(cè),達(dá)到原位定性或定量檢測(cè)的目的。。隨著跨學(xué)科研究的深入開(kāi)展,動(dòng)物疾病模型將在未來(lái)發(fā)揮更為普遍的作用,成為生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域研究工具。山西組織科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)

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用途基因功能研究、免/殺傷/增殖等、抗體活性篩選(細(xì)胞水平的結(jié)合和阻斷)、CAR分子的殺傷活性評(píng)價(jià)。材料與儀器(以慢pMSCV載體為例)包含目的基因和eGFP-Tag的pMSCV質(zhì)粒、帶有eGFP-Tag的pMSCV空載質(zhì)粒、GAG質(zhì)粒、VSV質(zhì)粒、Puromycin、Polybrene、Lipo3000、HEK293T細(xì)胞、opti-MEM、DMEM、FBS、雙抗、μm的濾膜、熒光顯微鏡等。步驟1、基因的構(gòu)建1)根據(jù)目的基因mRNA編碼區(qū)設(shè)計(jì)引物,分別在引物兩端加入酶切位點(diǎn)EcoRI和BglII。2)從細(xì)胞中提取目的基因mRNA,然后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,然后從cDNA里面用引物把目的基因的CDS區(qū)擴(kuò)增出來(lái)。PCR擴(kuò)增出帶有酶切位點(diǎn)的目的基因編碼區(qū)序列,連接至pMD19-T載體后轉(zhuǎn)化至感受態(tài)DH5α,分別進(jìn)行菌落PCR鑒定和酶切鑒定。3)使用EcoRI和BglII雙酶切下目的基因序列,電泳割膠回收純化,連接到pMSCV-eGFP載體。再次轉(zhuǎn)化到感受態(tài)DH5α,菌落PCR鑒定和酶切鑒定成功后,送至公司測(cè)序、鑒定。4)鑒定成功后,將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至感受態(tài)DH5α中,并進(jìn)行無(wú)內(nèi)質(zhì)粒抽提。GAG質(zhì)粒和VSV質(zhì)粒同樣可以轉(zhuǎn)化至感受態(tài)DH5α中,并進(jìn)行無(wú)內(nèi)質(zhì)粒抽提。質(zhì)粒抽提后冷凍于-20℃保存。2、慢包裝1)使用DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)6cm皿HEK293T至匯合度為70~80%。江蘇大鼠科研技術(shù)服務(wù)購(gòu)買