原理HE染色主要使用蘇木精和伊紅這兩種染液，其中蘇木精堿性染液為藍(lán)色，可以將組織的酸性結(jié)構(gòu)染成藍(lán)紫色（細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色；軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)；粘液呈灰藍(lán)）；伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中解離成帶負(fù)電荷的陰離子，易于蛋白質(zhì)氨基中的正電荷結(jié)合使細(xì)胞漿染色。細(xì)胞漿、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色。材料與儀器小鼠、固定液、酒精、二甲苯、石蠟、蜂蠟蘇木精染液、伊紅酒精溶液、鹽酸酒精溶液甘油蛋白粘片劑、中性樹膠石蠟包埋機(jī)、切片機(jī)、恒溫箱、蠟杯酒精燈、解剖剪、培養(yǎng)皿、鑷子、單面刀片染色缸、蓋玻片、載玻片、玻片盤、顯微鏡溫度計(jì)、水浴鍋步驟一、制作卵巢石蠟切片1、取材小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉（50mg/kg）進(jìn)行麻醉，頸椎脫臼法處死小鼠，取出雙側(cè)卵巢。取下所需組織，切成一小塊3~4mm厚。2、固定、洗滌、脫水（1）將切好的卵巢組織用生理鹽水洗一下，使用中性福爾馬林固定液固定30~50min。后用流水沖洗3次，每次5min。（2）卵巢組織依次經(jīng)70%、80%、90%乙醇溶液脫水，各30min。（3）再放入95%、100%乙醇溶液各2次，每次20min。3、透明、透蠟（1）使用純酒精、二甲苯等量混合液處理組織15min。純干貨Western blot （WB）條帶灰度統(tǒng)計(jì)與GraphPad作圖.上海兔科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)

METTL3能夠促進(jìn)肺腺細(xì)胞的生長、生存和侵襲，但還不清楚它是否作為m6A調(diào)節(jié)器或效應(yīng)器發(fā)揮作用[25]。在急性髓細(xì)胞白血?。ˋML）患者中，m(6)A調(diào)控基因的突變或拷貝數(shù)變化與TP53突變存在密切聯(lián)系，且m(6)A調(diào)控基因的改變與AML不良預(yù)相關(guān)[26]。此外，F(xiàn)TO在AML中高表達(dá)，它通過降低mRNA轉(zhuǎn)錄本中的m(6)水平，調(diào)節(jié)ASB2和RARA等靶點(diǎn)的表達(dá)，增強(qiáng)了白血病基因介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和白血病形成，并抑制全反式維甲酸(ATRA)誘導(dǎo)的AML細(xì)胞分化[27]。在脂肪形成過程中，F(xiàn)TO表達(dá)與m6A水平成負(fù)相關(guān)，促進(jìn)脂肪形成[3]。在膠質(zhì)細(xì)胞瘤樣細(xì)胞中，ALKBH5通過lncRNAFOXM1介導(dǎo)FOXM1基因pre-mRNA上的m6A修飾維持膠質(zhì)瘤細(xì)胞的成瘤性[28]。此外，甲基轉(zhuǎn)移酶METTL3或METTL14的敲除，能夠改變m6A的富集和ADAM19的表達(dá)，極大地促進(jìn)了膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長、自我更新和形成[29]。圖2m6ARNA修飾和介導(dǎo)的功能[30]m6A的研究方向主要是通過研究m6A修飾相關(guān)的甲基化、去甲基化酶和識別蛋白的功能，進(jìn)而研究m6A修飾的生物學(xué)功能和作用機(jī)制：一般通過敲除m6A酶分子，研究下游功能基因分子的表達(dá)和m6A甲基化情況，通過介導(dǎo)相關(guān)基因異常（可變剪切、穩(wěn)定性、翻譯、miRNA調(diào)控）影響細(xì)胞表型和功能特征。湖北組織科研技術(shù)服務(wù)服務(wù)細(xì)胞核是細(xì)胞的控制中心，它包含了遺傳物質(zhì)DNA，控制著細(xì)胞的生長和分裂。

建立疾病模型的目的是為了防治人類疾病。因此，疾病模型研究結(jié)果的可靠程度取決于模型與人類疾病的相似或可比擬的程度。接下來就讓上海研錄帶您了解相關(guān)知識。一個(gè)好的疾病模型應(yīng)具有以下特點(diǎn)：①能夠再現(xiàn)所要研究的人類疾病，動(dòng)物疾病表現(xiàn)應(yīng)該與人類疾病相似；②動(dòng)物能重復(fù)產(chǎn)生該疾病，盡可能能在兩種動(dòng)物體內(nèi)復(fù)制該?。虎蹌?dòng)物背景資料完整，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格，生命周期要滿足實(shí)驗(yàn)需要;④動(dòng)物要價(jià)廉、來源充足、便于運(yùn)送；⑤盡可能選用小動(dòng)物。生物醫(yī)學(xué)科研專業(yè)設(shè)計(jì)中常要考慮如何建立動(dòng)物模型的問題，因?yàn)楹芏嚓U明疾病及療效機(jī)制的實(shí)驗(yàn)不可能或不應(yīng)該在患者身上進(jìn)行。常要依賴于復(fù)制動(dòng)物模型，但一定要進(jìn)行周密設(shè)計(jì)，設(shè)計(jì)時(shí)要遵循下列一些原則：(一)相似性在動(dòng)物身上復(fù)制人類疾病模型，目的在于從中找出可以推演應(yīng)用于患者的有關(guān)規(guī)律。外推法(extrapolation)要冒風(fēng)險(xiǎn)，因?yàn)閯?dòng)物與人到底不是一種生物。如，在動(dòng)物身上無效的藥物不等于臨床無效，反之亦然。因此，設(shè)計(jì)動(dòng)物疾病模型的一個(gè)重要原則是，所復(fù)制的模型應(yīng)盡可能近似于人類疾病的情況。能夠找到與人類疾病相同的動(dòng)物自發(fā)性疾病當(dāng)然是比較好的。(二)重復(fù)性理想的動(dòng)物模型應(yīng)該是可重復(fù)的，甚至是可以標(biāo)準(zhǔn)化的。如。

靜置25分鐘后把酒精倒干，用吸水紙吸出多余的酒精，然后配壓縮膠，同樣的操作，關(guān)鍵是梳子要插得快，要小心梳子下產(chǎn)生氣泡，然后靜置30分鐘。如果是當(dāng)天跑膠，我會等上層膠凝2個(gè)小時(shí)再用，但要注意防干燥縮水，可以在一個(gè)小時(shí)的時(shí)候沿著梳子上緣加點(diǎn)電泳液。所以我一般提前一晚制膠，泡于純水或者電泳液里置于4度冰箱暫存。三、蛋白電泳1、上樣前準(zhǔn)備把膠組裝到電泳芯上，注意密閉性(否則漏液)，如果內(nèi)槽漏液就不是勻強(qiáng)電場了，條帶可能就不是一條直線。然后內(nèi)槽倒?jié)M電泳液，拔梳子，這一步要小心，梳子要兩邊一起緩緩?fù)习纬觯缓笥^察泳道內(nèi)有無脫落的膠?；蛘吣z絲，有的話用1毫升注射器吸出。然后從冰箱取出蛋白樣品，解凍。準(zhǔn)備振蕩器。2、上樣和電泳注意，上樣后蛋白會開始慢慢在膠中彌散，所以上樣越快越好。我習(xí)慣先上蛋白Marker,再上蛋白樣品，蛋白上樣前確保樣品完全解凍和充分振蕩(推薦使用振蕩器振蕩)，吸的時(shí)候沒有拉絲即可，建議上樣分鐘把樣品從冰上取出來，不然樣品中SDS可能會結(jié)晶析出，從而影響電泳效果。上層膠80V25分鐘，下層膠120V65分鐘。四、轉(zhuǎn)膜1、轉(zhuǎn)膜前準(zhǔn)備我會在電泳結(jié)束0分鐘準(zhǔn)備，把轉(zhuǎn)膜液配好置于4度冰箱預(yù)冷，然后裁膜，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)膜裝置。隨著科技的不斷進(jìn)步，科研人員將能夠開發(fā)出更為精確、實(shí)用的動(dòng)物模型，更好地為人類健康保駕護(hù)航。

如胰腺，一般取胰島較多的胰腺尾部；肺應(yīng)取有細(xì)支氣管及帶有軟骨片的小支氣管部。如果實(shí)驗(yàn)需進(jìn)行多樣本的采集，采集順序應(yīng)按照：消化，神經(jīng)系統(tǒng)，皮膚，肌肉等的順序進(jìn)行。選好塊的切面。熟悉某些成分安排，然后決定其切面的走向；如一長管狀以橫切面較好。切除不需要的部分。特別是周圍的脂肪等，應(yīng)盡可能掉，否則給固定、脫水、浸蠟、切片等帶來一些不必要的問題。樣品的固定（1）固定的方法：①小塊固定法：從動(dòng)物取下的小塊，立即置入液態(tài)固定劑（這是應(yīng)用經(jīng)常的方法）。②注射/灌注固定法：某些塊由于體積過大或固定液極難滲入內(nèi)部或需要對整個(gè)臟器或整個(gè)動(dòng)物進(jìn)行固定，這時(shí)宜采用注射固定法，將固定液注入血管，經(jīng)血管分支到達(dá)整個(gè)和全身，從而得到充分的固定。另，空腔比如肺，肺內(nèi)含有空氣，固定液難以滲入，建議先做肺灌注，使得肺充盈滿固定液以后再進(jìn)行保存，如果空腔中氣體沒有排出，后續(xù)可能影響固定效果（沒有灌注的肺會浮在液體表面不利于固定，切片以后也會看到很多的空泡）。③蒸汽固定法：比較細(xì)小而薄的標(biāo)本，可用鋨酸或甲醛蒸汽固定。主要用于血液或細(xì)胞涂片以及某些薄膜的固定。。動(dòng)物模型的表現(xiàn)與人類疾病可能存在差異，因此需要謹(jǐn)慎使用。上海大鼠科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)

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1.首要原則：細(xì)胞不重要情況下立即丟棄，培養(yǎng)箱滅菌，所用培養(yǎng)基也都要丟棄，器械等重新滅菌或拆用新的。2.細(xì)菌污染一般都救不回來了，發(fā)現(xiàn)的時(shí)候培養(yǎng)基一般都很渾濁且細(xì)胞都死了3.污染且細(xì)胞很重要時(shí)：遇到念球菌污染，且細(xì)胞為基因改造細(xì)胞，非常重要。如231貼壁乳腺細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周圍出現(xiàn)很小的串珠透亮圓點(diǎn)，非常像念球菌污染，此時(shí)細(xì)胞狀態(tài)尚可，且污染少。處理如下：用預(yù)熱或室溫PBS清洗3次，可適當(dāng)振搖，將污染沖洗下來。隨后加入10-20%雙抗到培養(yǎng)瓶，置于37度培養(yǎng)箱1h，之后再用PBS清洗三遍，直至視野下無可見污染。此時(shí)細(xì)胞也被沖下大部分，因此此方法只適用在細(xì)胞貼壁強(qiáng)，狀態(tài)好，密度高時(shí)使用。之后每天再更換培養(yǎng)基，每次用PBS沖洗2遍。過幾天細(xì)胞狀態(tài)尚可時(shí)，消化離心時(shí)用500r，3min，去掉上清，重復(fù)3次。這個(gè)方法是根據(jù)文獻(xiàn)可利用念球菌和細(xì)胞體積重量差異實(shí)現(xiàn)分離?；旧线@一步做完以后，污染就基本了，接下來就注意多觀察，勤換液就行。上海兔科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)