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北京SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學分析鑒定

來源: 發(fā)布時間:2022-02-10

circRNA轉(zhuǎn)錄組學成環(huán)機制:circRNA環(huán)化方式分為內(nèi)含子環(huán)化和外顯子環(huán)化。目前主流的成環(huán)機制可歸類為:依賴于剪切體的索尾插接環(huán)化。在mRNA前體上,通過連續(xù)的組裝小核核糖體蛋白從而催化外顯子下游的5′供體的位點連接到上游的3′受體的位點,索尾插接形成環(huán)化,然后通過剪切形成circRNA。順式作用元件促進circRNA形成。部分circRNA外顯子兩側(cè)的內(nèi)含子中含有反向互補序列,首先在剪切位點上并排形成RNA雙鏈體,再通過可變剪切形成帶內(nèi)含子和不帶內(nèi)含子兩種不同的circRNA。或者外顯子內(nèi)部以及兩側(cè)的內(nèi)含子可以競爭進行RNA配對,然后通過可變剪切形成不同類型的circRNA。轉(zhuǎn)錄組學測序可以同時測到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?北京SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學分析鑒定

轉(zhuǎn)錄組學應用于胃腸瘤轉(zhuǎn)移機制研究:circRNA是一種非編碼RNA,可以多種方式參與生物學功能,如細胞增殖、細胞周期、侵襲和轉(zhuǎn)移等。近年來研究發(fā)現(xiàn),環(huán)狀RNA可以通過海綿吸附微小RNA和RNA結(jié)合蛋白參與轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,從而影響瘤耐藥過程中的DNA修復、凋亡、增殖、細胞轉(zhuǎn)運,以及介導瘤耐藥的細胞內(nèi)酶,進而在瘤耐藥中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。有研究證實通過干擾環(huán)狀RNA的表達,可以提高瘤對藥物的敏感性,提示環(huán)狀RNA可能為抗瘤藥物耐藥性的研究提供新的靶點。武漢單細胞轉(zhuǎn)錄組學主要技術(shù)轉(zhuǎn)錄組學能準確地識別可變剪切位點及cSNP,UTR區(qū)域。

全轉(zhuǎn)錄組測序為什么需要構(gòu)建兩個文庫?全轉(zhuǎn)錄組測序需要構(gòu)建2個測序文庫,一個小RNA文庫和一個去除核糖體RNA的鏈特異性文庫,然后分別上機測序。小RNA長度較短,一般小于50nt,采用測序策略為50SE。其他三類RNA序列一般大于200,通常在1000以上,可達幾萬,通過片段化構(gòu)建150PE測序文庫。然后小RNA文庫可以獲得miRNA序列信息,去核糖體的鏈特異性文庫可以獲得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。轉(zhuǎn)錄組學即特定細胞在某一功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。

轉(zhuǎn)錄組是特定發(fā)育階段或生理條件下細胞內(nèi)的完整轉(zhuǎn)錄信息的匯合,表示了基因表達的中間狀態(tài)。轉(zhuǎn)錄組測序可以對所有轉(zhuǎn)錄物進行分類、確定基因的轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)、量化轉(zhuǎn)錄物的表達水平。蛋白質(zhì)是生命功能的直接執(zhí)行者,蛋白組是一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質(zhì)。整合轉(zhuǎn)錄組學和蛋白質(zhì)組學的表達數(shù)據(jù)對生物樣本進行研究,可以從整體上解釋生物學問題,探究生物體生理和疾病機理等。轉(zhuǎn)錄組學應用于胃腸瘤發(fā)生機制研究:利用轉(zhuǎn)錄組學可檢測瘤細胞惡化過程中的RNA(編碼RNA及非編碼RNA)的變化,有助于更好地理解胃腸瘤的發(fā)生機制。轉(zhuǎn)錄組學測序樣品純度要求,電泳檢測28S:18S至少大于1.8。

轉(zhuǎn)錄組學,基因組學,蛋白質(zhì)組學的區(qū)別:蛋白組學針對的是全體蛋白,組要以2D-Gel和質(zhì)譜為主,分為top-down和bottom-up分析方法。理念和基因組類似,將蛋白用特定的物料化學手段分解成小肽段,在通過質(zhì)量反推蛋白序列,之后進行搜索,標識已知未知的蛋白序列。轉(zhuǎn)錄組學研究的是某個時間點的mRNA總和,可以用芯片,也可以用測序。芯片是用已知的基因探針,測序則有可能發(fā)現(xiàn)新的mRNA?;蚪M學研究的主要是基因組DNA,使用方法目前以二代測序為主,將基因組拆成小片段后再用生物信息學算法進行迭代組裝。當然這只是第1步,隨后還有繁瑣的基因注釋等數(shù)據(jù)分析工作。轉(zhuǎn)錄學組測序能夠提供更普遍的檢測范圍。武漢全長轉(zhuǎn)錄學組領(lǐng)域

普通轉(zhuǎn)錄組測序主要適用于不同的生長階段或者發(fā)育過程。北京SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學分析鑒定

轉(zhuǎn)錄組學(Transcriptome)廣義上指某一生理條件下,細胞內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的匯合,包括信使RNA(mRNA)、核糖體RNA(rRNA)、轉(zhuǎn)運RNA(tRNA)及非編碼RNA(ncRNA);狹義上指所有mRNA的匯合。轉(zhuǎn)錄組具有很強的時間和空間特性,是基因功能及結(jié)構(gòu)研究的基礎(chǔ)和出發(fā)點,掌握了生物個體基因轉(zhuǎn)錄水平的變化,可深入了解其生命活動特征和調(diào)控機制。通過新一代高通量測序,能夠全方面快速地獲得某一物種特定組織在某一狀態(tài)下的幾乎所有轉(zhuǎn)錄本的基因序列信息。北京SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學分析鑒定

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