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山東靶向代謝組學分析價格

來源: 發(fā)布時間:2022-02-20

代謝組學細胞樣本收集:懸浮細胞:1)連同培養(yǎng)基轉移到1.5 mL的進口離心管中。2)低速離心5 min(低于3000 rpm),使細胞沉淀于離心管的底部(1*107個細胞為宜)。3)倒掉培養(yǎng)基(盡量倒干凈),用預冷的PBS反復沖洗2 ~ 3次,低速離心5 min,棄上清。4)標記離心管,將離心管的尖的一端插入液氮中,淬滅細胞沉淀1 min,-80 ℃凍存,干冰寄送。注意事項:1. 培養(yǎng)基傾倒時盡量倒干凈,可使用濾紙將殘留培養(yǎng)液吸凈;2. 甲醇/水請使用色譜純及以上規(guī)格;3. 液氮淬滅細胞時,請小心避免離心管破碎導致樣本受損;4. 建議細胞樣本在進行培養(yǎng)時多準備樣本,以備后續(xù)使用。代謝組學作為系統(tǒng)生物學的一個重要的分支,與其他組學相比有著其特有的優(yōu)勢。山東靶向代謝組學分析價格

代謝組學樣本收集注意事項:(1)血液離開動物或人體后,應盡快開展血清、血漿的分離,并嚴格按照操作說明進行。(2)采集到的血清為黃色透明液體、血漿為淡黃色半透明液體,如果發(fā)現(xiàn)樣本中是紅色,說明在已經(jīng)發(fā)生了了溶血現(xiàn)象,樣本需重新制備。(3)血清與血漿的主要區(qū)別在于血清中不含纖維蛋白原。血清和血漿中脂質(zhì),氨基酸,核苷酸等代謝譜存在差別。糞便樣本收集:1.人糞便:(1)用無菌勺挖取新鮮的,排泄中后部的內(nèi)側糞便(避免尿液及其他壁對樣本污染);(2)分裝樣本20mg/管。(3)迅速放入液氮中冷凍處理至少15min.(4)-80℃冰箱凍存。寄樣需足量干冰。山東靶向代謝組學分析價格非靶向代謝組學(Untargeted metabolomics)即非目標代謝組學或發(fā)現(xiàn)代謝組學。

代謝組學疾病診斷應用: 代謝組學研究人員已經(jīng)對此進行了研究。新生兒是否缺失酶基因,可以在出生時就檢測出來。可檢測出包括涉及合成途徑中的基本成分(如氨基酸)的酶。酶缺失的結果就是相應的代謝產(chǎn)物過少或過多。尿癥(PKU)是一種常見的嬰兒疾病。這種疾病是由于缺失將苯丙氨酸水解成酪氨酸所必須的苯丙氨酸水解酶基因,導致血液中苯丙氨酸累積造成的。若是不能及時檢測出這種天生的代謝缺乏,在嬰兒出生后九個月內(nèi),就會引起無法挽救的大腦損傷。這種疾病通過簡單的血樣和尿素化驗就可以確診。而血樣和尿素化驗以后也將成為代謝指紋研究方法的一部分。像尿癥那樣的疾病,研究人員正試圖從疾病的生物化學基礎著手,而不是只有檢測生物標記物。他們希望通過代謝組學,可以找到更好的方法去治這些疾病。

代謝組學研究方法:代謝組學的研究方法與蛋白質(zhì)組學的方法類似,通常有兩種方法。一種方法稱作代謝物指紋分析 (metabolomic fingerprinting),采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)的方法,比較不同血樣中各自的代謝產(chǎn)物以確定其中所有的代謝產(chǎn)物。從本質(zhì)上來說,代謝指紋分析涉及比較不同個體中代謝產(chǎn)物的質(zhì)譜峰,然后了解不同化合物的結構,建立一套完備的識別這些不同化合物特征的分析方法。另一種方法是代謝輪廓分析(metabolomic profiling),研究人員假定了一條特定的代謝途徑,并對此進行更深入的研究。相比于其他組學,代謝組學有哪些特殊的優(yōu)勢?

GC-MS非靶向代謝組學能檢測到哪些類別的代謝物?衍生化極大地拓展了GC/MS的檢測分析范圍。GC/MS能檢測到有機酸、氨基酸、單糖、糖醇、胺類、脂肪酸、吲哚、單甘油酯、核苷、二糖、生育酚、甾醇和膽汁酸等代謝物。如何提高定性準確度?GC/MS的定性有雙重標準,一是保留指數(shù),二是質(zhì)譜信息的相似度(similarity)。不同于LC/MS的軟電離源,GC/MS使用的EI源屬于硬電離,能量較強且穩(wěn)定,在將代謝物分子電離后,分子離子峰進一步碎裂產(chǎn)生豐富的碎片離子。因此,我們很難在GC/MS上看到分子離子峰。GC/MS提供的是代謝物的“指紋圖譜”,將儀器得到的實際指紋圖譜和質(zhì)譜庫(如NIST庫)進行比對后,我們將會得到一個叫相似度的指標。保留指數(shù)和相似度都必須滿足設定的閾值,軟件才會給出色譜峰的定性結果。然后采用標準品質(zhì)譜信息進行完全比對定性,也就是說只有經(jīng)過標準品比對,代謝物才是被100%定性。代謝組學關注的對象是分子量在1000以下的小分子化合物。山東靶向代謝組學分析價格

代謝組學主要研究的是產(chǎn)物的小分子代謝物(MW<1000)。山東靶向代謝組學分析價格

代謝組學什么類型的樣本更適合,樣本采集需要注意什么?絕大多數(shù)可以可靠收集的生物樣本都適用于代謝組學研究。常見的樣本主要有:臨床和動物的血清、血漿、尿液、糞便、各類組織、體液;細胞和微生物、培養(yǎng)液和發(fā)酵液;植物的根、莖、葉、花等。代謝每時每刻都在發(fā)生變化,我們需要研究的是某個或多個瞬時狀態(tài),因此樣本采集一般需要保證“快速、一致、簡單”的,采集后通過低溫淬滅(如液氮淬滅或低溫凍存等)的方法阻止離體后的樣本的代謝活動。另外,不同的檢測要求也需要配合不同的收集方法,具體步驟請參照譜領生物樣本收集步驟文件。山東靶向代謝組學分析價格

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