Labelfree非標記定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)特點:(1)不需要標記處理,操作簡單,成本低、實驗周期短;(2)每個樣品單獨處理、上機;(3)可以做任意樣本的總蛋白質(zhì)差異定量,樣品類型不受限制;(4)對單個樣品的蛋白總量要求相對較低,對于組織本身蛋白量不高,可以選擇Label-Free,適用于一些難收集樣品;(5)定性沒有問題,但是定量的準確性較標記定量稍差,會受到質(zhì)譜穩(wěn)定性等因素的影響;(6)適合于大樣本量的定量比較(大于24個樣本)。蛋白質(zhì)組學在醫(yī)學的研究應用:蛋白質(zhì)組學(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學。蛋白質(zhì)組的概念與基因組的概念有許多差別。哈爾濱Label free非標記定量蛋白質(zhì)組學研究方法
蛋白質(zhì)組學主要以全蛋白組(組織、細胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,通過對蛋白組進行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學功能、作用機制、疾病診斷的標志物以及預測蛋白的上、下游變化關(guān)系。蛋白質(zhì)組學可以克服核酸水平預測的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。常用技術(shù):非靶向蛋白組學:蛋白質(zhì)定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學。杭州Label free非標記定量蛋白質(zhì)組學價格蛋白質(zhì)組學與其它學科的交叉也將日益明顯和重要。
定量蛋白質(zhì)組學方法學介紹:iTRAQ:iTRAQ定量是目前定量蛋白質(zhì)組學應用比較普遍的技術(shù),該技術(shù)的關(guān)鍵原理是多肽標記和定量,將多肽的含量轉(zhuǎn)化為114、115、116和117同位素的含量(或113、114、115、116、117、118、119和121的8標記),從而簡化了定量的復雜性,然后通過多肽定量值回歸到蛋白的定量值,從而測定出不同樣本之間蛋白質(zhì)的差異。iTRAQ定量不依賴樣本,可檢測出較低豐度蛋白,胞漿蛋白、膜蛋白、胞外蛋白等,且定量準確,可同時對8個樣本進行分析,并可同時得出鑒定和定量的結(jié)果,特別適用于采用多種處理方式或來自多個處理時間的樣本的差異蛋白分析。
LabelFree(非標記蛋白質(zhì)組學技術(shù)):應用:1.需要快速在大量樣本中找到差異表達的蛋白組合。2.需要在較短時間以較低成本得到具有提示意義的蛋白表達數(shù)據(jù)。3.需要檢測的樣品蛋白含量低。4.需要檢測相互作用蛋白。技術(shù)特點:1.對質(zhì)譜儀器設(shè)備要求較高,色譜和質(zhì)譜需要同時有較好的穩(wěn)定性和重復性。2.需要有特殊的定量分析軟件。3.對樣品中蛋白質(zhì)總量要求較低,實驗周期短,實驗費用低。4.不需要額外并且昂貴的標記試劑,排除了標記過程帶入實驗誤差的風險,同時也不必考慮標記效率的問題。定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)主要分為標記(label)和非標記(label free)定量策略。
蛋白質(zhì)組學研究這樣做:蛋白質(zhì)組與基因組相對應,也是一個整體的概念,隨著基因組學研究的不斷深入,蛋白質(zhì)組學已逐漸成為研究熱點,對蛋白組學的研究可以使我們更容易接近生命的機理本質(zhì),但探究成千上萬的蛋白質(zhì)特性也是一個重大的技術(shù)挑戰(zhàn)。蛋白質(zhì)組(Proteome)指的是某一時刻或某一狀態(tài)基因組表達的所有相應的蛋白,即細胞、組織或機體全部蛋白質(zhì)的存在及活動形式,其是一個動態(tài)概念,它是在組織、細胞的整體蛋白質(zhì)水平上,探索蛋白質(zhì)作用模式、功能機理、調(diào)節(jié)控制以及蛋白質(zhì)群體內(nèi)的相互關(guān)系、從而獲得生命活動調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的全方面而深入的認識,以揭示生命活動的基本規(guī)律。定量蛋白質(zhì)組學通過對蛋白質(zhì)的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境條件下的表達情況。廣州新型修飾蛋白組學價錢
蛋白質(zhì)組學技術(shù)有等電聚焦。哈爾濱Label free非標記定量蛋白質(zhì)組學研究方法
定量蛋白質(zhì)組學的方法學背景和意義:從生命活動的直接執(zhí)行者——蛋白質(zhì)的角度研究生命現(xiàn)象和規(guī)律(特別是疾病防治和病理研究)已成為研究生命科學的主要手段。而這些研究往往離不開對細胞、組織中含有蛋白質(zhì)種類和表達量的研究。對處不同時期、不同條件下蛋白質(zhì)表達水平變化的研究,識別功能模塊和路徑,監(jiān)控疾病的生物標志物,這些研究都需要對蛋白質(zhì)進行鑒定和定量。生物質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)和不斷成熟為蛋白質(zhì)差異表達分析提供了更可靠、動態(tài)范圍更廣的研究手段?;谫|(zhì)譜技術(shù),科學家們不斷開發(fā)出新的定量蛋白質(zhì)組學方法,來了解細胞、組織或生物體的整體蛋白質(zhì)動力學。哈爾濱Label free非標記定量蛋白質(zhì)組學研究方法
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