轉錄組學和基因組學目前有實用價值嗎?二者實用價值非常大,尤其是對有瘤的患者的醫(yī)治,簡直顛覆了傳統(tǒng)醫(yī)治的模式。轉錄組和基因組月在生物學研究中有著重要價值。例如研究某個基因功能的時候,可以構建該基因的敲除或者過表達生物,然后對比野生型進行轉錄組分析看看該基因涉及什么表達網(wǎng)絡。此外在醫(yī)學方面的應用也很大,例如在有的瘤病人中進行基因組學測序和分析能夠了解其中的發(fā)生的發(fā)展的驅動基因,然后能根據(jù)發(fā)展的驅動基因研究靶向藥物,從而推動瘤的藥物研發(fā)和醫(yī)治!轉錄組學可應用于植物生長機制的發(fā)現(xiàn)及干預。湖北全長轉錄學組鑒定
轉錄組學測序流程:1、樣品RNA準備。2、測序文庫構建。3、DNA成簇(Cluster)擴增。4、高通量測序(Illumina)。5、數(shù)據(jù)分析。轉錄組的分析大致有以下幾種情況:1、同一物種在發(fā)育過程中的各時間節(jié)點的基因表達特點及存在的差異;2、不同品系之間存在的差異表達基因;3、不同的外界條件處理,如細菌、病毒、光照、紫外、干旱、高溫、高鹽脅迫,對基因表達的影響;4、同一個體,不同組織之間的基因表達差異。簡而言之,轉錄組學是從RNA水平研究基因表達的情況。杭州IncRNA轉錄組學分析方法轉錄組學分析轉錄本的結構和表達水平的同時,還能發(fā)現(xiàn)未知轉錄本和稀有轉錄本。
轉錄組學:轉錄組學是研究特定的細胞、組織或個體在特定時間和狀態(tài)下所轉錄出所有RNA的學科,轉錄組測序是指利用高通量測序方法,研究特定的細胞、組織或個體在特定時間和狀態(tài)下所轉錄出的所有mRNA,用于揭示不同功能狀態(tài)下的基因表達、結構的差異,闡明分子機制。應用領域:醫(yī)學研究:疾病標志物篩查、疾病的診斷和分型、疾病復發(fā)診斷、病因與病理機制探究、臨床療效評價、藥物毒理學評價。生命科學研究:非生物環(huán)境關系研究、植物與微生物、在表型鑒定中的應用、代謝途徑及功能基因組研究、藥用植物研究中的應用。
轉錄組學(Transcriptome)廣義上指某一生理條件下,細胞內所有轉錄產(chǎn)物的匯合,包括信使RNA(mRNA)、核糖體RNA(rRNA)、轉運RNA(tRNA)及非編碼RNA(ncRNA);狹義上指所有mRNA的匯合。轉錄組具有很強的時間和空間特性,是基因功能及結構研究的基礎和出發(fā)點,掌握了生物個體基因轉錄水平的變化,可深入了解其生命活動特征和調控機制。通過新一代高通量測序,能夠全方面快速地獲得某一物種特定組織在某一狀態(tài)下的幾乎所有轉錄本的基因序列信息。轉錄組學能夠檢測未知基因,發(fā)現(xiàn)新的轉錄本。
單細胞轉錄組關鍵步驟:單細胞的分離和捕獲:溫和分離,稀有細胞。轉錄本的捕獲和擴增:RNA測序需要0.1-1.0ugtotalRNA,捕獲效率10%(5-**NA測序需要1ngDNA,極限稀釋加移液分離單細胞;顯微操作分選單細胞;流式分選帶有表面Marker的單細胞;激光切割實體組織;微流控技術;磁珠捕獲,主要用于CTC。它的一個優(yōu)點是可以結合流式細胞熒光分選(FACS,fluorescentactivatedcellsorting)根據(jù)表面Marker分選細胞。因此特別適合分選細胞子集用于測序。它的另一個優(yōu)點是可以獲得細胞形態(tài)全覽圖,提供另外一個維度的信息,可用于鑒定微孔中是否有損傷的細胞或雙份細胞,主要缺點是通量低且每個細胞所需的工作量相當大。RNA-Seq轉錄組學即對轉錄組進行測序和分析。杭州IncRNA轉錄組學分析方法
轉錄組學檢測范圍廣,高于6個數(shù)量級的動態(tài)檢測范圍。湖北全長轉錄學組鑒定
RNA-Seq轉錄組學技術優(yōu)勢:相比基因芯片和標記的堿基序列的測序方法,RNA-seq具有一定的優(yōu)越性。與基因芯片相比,RNA-Seq不只可以在更高的分辨率下用來測量基因的表達水平情況,還可以揭示未知的轉錄組和拼接亞型,并為選擇性拼接亞型提供定量分析。相對于傳統(tǒng)的芯片雜交平臺,轉錄組測序無需預先針對已知序列設計探針,即可對任意物種的整體轉錄活動進行檢測,提供更精確的數(shù)字化信號、更高的檢測通量以及更普遍的檢測范圍,是目前深入研究復雜性轉錄組的強大工具。鑒于這些優(yōu)勢,RNA-Seq很快就被應用到關于瘤病相關研究的多個方面。湖北全長轉錄學組鑒定
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