蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)定量分析:1. SILAC細(xì)胞標(biāo)記,組織/細(xì)胞破碎,提取、提純目的蛋白質(zhì)(基于SILAC的乙?;揎椊M學(xué)定量)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 對(duì)多肽片段進(jìn)行iTRAQ標(biāo)記(基于iTRAQ的乙?;揎椊M學(xué)定量)。4. 使用高效特異性乙?;贵w對(duì)乙?;揎楇亩芜M(jìn)行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對(duì)富集的乙?;亩芜M(jìn)行序列分析。6. 數(shù)據(jù)分析,比對(duì)不同樣本中蛋白乙?;揎椝讲町?,并對(duì)產(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進(jìn)行解釋。蛋白質(zhì)翻譯后修飾有什么生物學(xué)意義?湖北乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定
乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)分析:乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)分析是指從蛋白質(zhì)組學(xué)的水平分析蛋白質(zhì)乙酰化修飾,包括乙?;鞍踪|(zhì)的鑒定和定量。提供基于質(zhì)譜的乙?;鞍捉M研究服務(wù)。蛋白質(zhì)乙?;ńM蛋白乙?;头墙M蛋白乙?;?。組蛋白乙?;饕琴嚢彼嵋阴;?,已在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用方面被普遍的研究。非組蛋白乙?;瘶?gòu)成了哺乳動(dòng)物細(xì)胞中乙?;鞍椎闹饕糠?,參與了所有主要生物過(guò)程,包括蛋白質(zhì)的定位、轉(zhuǎn)移、功能和降解,遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制等。除了重要的生物學(xué)功能以外,乙?;鞍踪|(zhì)及其調(diào)控酶還與衰老和多種疾?。ㄈ缟窠?jīng)變形紊亂、心血管疾病等)緊密相關(guān)。因此,對(duì)乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組進(jìn)行研究有助于進(jìn)一步探索細(xì)胞的生命活動(dòng)與了解相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)制。貴州棕櫚酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過(guò)共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過(guò)程。
質(zhì)譜分析乙酰化蛋白質(zhì)組:質(zhì)譜分析技術(shù)可以對(duì)蛋白質(zhì)組中的乙?;鞍走M(jìn)行鑒定、乙?;稽c(diǎn)定位以及定量。當(dāng)質(zhì)譜用于乙?;康鞍捉M研究中時(shí),因?yàn)橐阴;鞍踪|(zhì)在生物樣本中含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣,需要先對(duì)乙酰化肽段進(jìn)行富集,然后再對(duì)富集得到的乙?;亩螛悠愤M(jìn)行定量分析。質(zhì)譜定量乙酰化蛋白組采用肽段預(yù)分離降低高豐度蛋白的影響,結(jié)合免疫共沉淀通過(guò)高效的抗體富集乙?;碾亩?,從而實(shí)現(xiàn)大規(guī)模乙?;蔫b定及定量。為了鑒定和定量更多的乙?;亩?,在酶切過(guò)程中還可使用多種不同的酶對(duì)蛋白樣品進(jìn)行酶切。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時(shí)應(yīng)該注意些什么問(wèn)題?覆蓋率:覆蓋率越高,檢測(cè)和鑒定含有修飾基團(tuán)的肽幾率就越大。修飾位點(diǎn)的占有率:被修飾的蛋白質(zhì)的百分比低,則檢測(cè)到修飾肽的機(jī)會(huì)會(huì)隨之減少。如果百分比較高(> 30%),則有助于識(shí)別修飾位點(diǎn)。棕櫚?;鞍仔揎椯|(zhì)譜鑒定方法:S-棕櫚酰化的主要功能是促進(jìn)蛋白質(zhì)與細(xì)胞膜的結(jié)合。蛋白質(zhì)可以由一個(gè)棕櫚?;M成,也可以與更多棕櫚基或與其他脂質(zhì),如豆蔻?;S捎趯?duì)S-棕櫚?;鞍追治鋈匀痪哂刑魬?zhàn)性,由于S-棕櫚?;揎椀鞍讈喫揭约笆杷院蜐撛诓环€(wěn)定的硫代質(zhì)鏈的S-脂酰化肽?,F(xiàn)在常用的幾種方法可以捕獲S-脂?;鞍滓约皩?duì)目標(biāo)修飾蛋白進(jìn)行捕獲。蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法有免疫印跡技術(shù)。
蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)技術(shù)優(yōu)點(diǎn):1、全方面性:磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)以整個(gè)細(xì)胞蛋白為研究對(duì)象,研究?jī)?nèi)容包括了細(xì)胞內(nèi)具有生命功能的蛋白,如細(xì)胞增生、細(xì)胞分裂和細(xì)胞分化等相關(guān)蛋白,因而研究更為全方面。2、可靠性:傳統(tǒng)的生物學(xué)研究蛋白質(zhì)磷酸化往往針對(duì)特定條件,以兩個(gè)蛋白或更多蛋白之間的相互作用為出發(fā)點(diǎn),具有局限性,缺乏整體認(rèn)識(shí)。磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)則可檢測(cè)不同蛋白激酶及磷酸化酶對(duì)同一個(gè)蛋白磷酸化程度的影響,因而結(jié)果具有普遍性和可靠性。3、有效性:磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)反映的是細(xì)胞內(nèi)真實(shí)發(fā)生的事件,在一次試驗(yàn)中考慮了不同變量,克服了生物學(xué)中逐步添加變量的缺陷。4、探索性:磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)以細(xì)胞內(nèi)蛋白為研究對(duì)象,相對(duì)于傳統(tǒng)的生物學(xué)研究以及蛋白質(zhì)芯片,更易發(fā)現(xiàn)未知的新磷酸化位點(diǎn)和磷酸化蛋白質(zhì)。如果可以聯(lián)合生物學(xué)技術(shù),則可以發(fā)現(xiàn)具有磷酸化或者去磷酸化功能的酶。乙?;揎検求w內(nèi)保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾。湖北乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定
蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術(shù)優(yōu)點(diǎn):檢測(cè)特異性高。湖北乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定
蛋白質(zhì)乙?;揎楄b定流程:1. 組織/細(xì)胞破碎,提取、提純目的蛋白質(zhì)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特異性乙?;贵w對(duì)乙?;揎楇亩芜M(jìn)行免疫富集。4. 使用LC-MS/MS對(duì)富集的乙?;亩芜M(jìn)行鑒定分析。5. 數(shù)據(jù)分析,并對(duì)鑒定的乙?;稽c(diǎn)的生物學(xué)功能進(jìn)行解釋預(yù)測(cè)。隨著蛋白質(zhì)組研究的發(fā)展,我們?cè)絹?lái)越深刻地意識(shí)到,對(duì)于生物體生命活動(dòng)的管理和調(diào)控過(guò)程,密切相關(guān)的不只是單個(gè)蛋白質(zhì)層面的修飾狀態(tài),更重要的是研究蛋白質(zhì)組學(xué)水平研究在翻譯后修飾的動(dòng)態(tài)變化。高質(zhì)、高效的蛋白質(zhì)翻譯后修飾富集技術(shù)和豐富的、準(zhǔn)確的定量手段使得研究蛋白質(zhì)水平的翻譯后修飾組學(xué)成為現(xiàn)實(shí),借助這些組學(xué)研究手段能夠?qū)崿F(xiàn)不同生理病理狀態(tài)下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較,深入地揭示翻譯后修飾水平的波動(dòng)與生物生命活動(dòng)的密切聯(lián)系。湖北乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)鑒定
上海拜譜生物科技有限公司致力于商務(wù)服務(wù),是一家服務(wù)型公司。公司業(yè)務(wù)涵蓋多組學(xué)服務(wù),質(zhì)譜檢測(cè),蛋白質(zhì)組學(xué),代謝組學(xué)等,價(jià)格合理,品質(zhì)有保證。公司將不斷增強(qiáng)企業(yè)重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力,努力學(xué)習(xí)行業(yè)知識(shí),遵守行業(yè)規(guī)范,植根于商務(wù)服務(wù)行業(yè)的發(fā)展。拜譜生物秉承“客戶為尊、服務(wù)為榮、創(chuàng)意為先、技術(shù)為實(shí)”的經(jīng)營(yíng)理念,全力打造公司的重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力。