質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾原理：相較于沒(méi)有發(fā)生翻譯后修飾的蛋白，翻譯后修飾蛋白會(huì)在特定肽段序列有分子量的增加。在蛋白翻譯后修飾方式的質(zhì)譜分析過(guò)程中，蛋白會(huì)首先被酶切成肽段，然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析；通過(guò)質(zhì)譜分析，得到的是一系列肽段的相對(duì)分子質(zhì)量信息。對(duì)于某一個(gè)特定的肽段而言，在沒(méi)有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下其序列信息和分子量是確定的，當(dāng)它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后，例如磷酸化修飾，因?yàn)榱姿岣姆肿恿恳彩谴_定的，所以在質(zhì)譜檢測(cè)過(guò)程中如果發(fā)現(xiàn)部分肽段的分子量剛好增加了一個(gè)磷酸根的分子量，則可以假設(shè)這個(gè)肽段發(fā)生了磷酸化修飾，再通過(guò)二級(jí)或多級(jí)質(zhì)譜的譜圖進(jìn)行二次確認(rèn)即可實(shí)現(xiàn)翻譯后修飾類型鑒定及修飾位點(diǎn)分析等。泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。山東乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

翻譯后修飾蛋白的檢測(cè)方法：翻譯后修飾蛋白的檢測(cè)技術(shù)包括有免疫沉淀、western blot、質(zhì)譜技術(shù)、體外生化分析等。其中，免疫沉淀是大多數(shù)翻譯后修飾檢測(cè)中的關(guān)鍵步驟，它利用蛋白特異性抗體或某種翻譯后修飾的特異性抗體來(lái)富集目標(biāo)蛋白，之后再用western blot或質(zhì)譜技術(shù)分析目標(biāo)蛋白。Western blot和質(zhì)譜技術(shù)均可用于蛋白質(zhì)翻譯后修飾的下游檢測(cè)，其中Western blot相對(duì)簡(jiǎn)單但依賴于特異性抗體且無(wú)法識(shí)別單個(gè)蛋白質(zhì)變化，質(zhì)譜則可以檢測(cè)包括未知PTM在內(nèi)的幾乎所有的PTMs但成本更高需要專業(yè)知識(shí)來(lái)分析產(chǎn)生的大量數(shù)據(jù)。研究人員可以根據(jù)成本、有無(wú)可用抗體，以及有沒(méi)有目標(biāo)等選擇合適的方法進(jìn)行檢測(cè)。河南糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要方式蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：能夠特異鑒定單個(gè)磷酸化位點(diǎn)。

蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾自下而上分析策略：常用的糖蛋白分離和富集技術(shù)有：a. 凝集素親和技術(shù)；b. 肼化學(xué)富集；c. 親水性相互作用色譜法；d. β-消除/邁克爾加成反應(yīng)?；谫|(zhì)譜的糖蛋白鑒定和糖基化位點(diǎn)測(cè)定方法有：a. PNGase F酶法；b. Endo H酶法；c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。泛素化：泛素是一種由76個(gè)氨基酸組成的多肽，在真核生物中高度保守，可通過(guò)異肽鍵與目標(biāo)蛋白賴氨酸殘基的氨基進(jìn)行共價(jià)連接。泛素化蛋白的富集主要基于標(biāo)記，泛素用親和標(biāo)簽（通常為6xHis）進(jìn)行標(biāo)記，并通過(guò)鎳螯合色譜親和提取泛素化蛋白。由于泛素的C端為Arg-Gly-Gly結(jié)構(gòu)，經(jīng)胰蛋白酶水解后，Gly-Gly保留在修飾蛋白的肽鏈上，使肽的質(zhì)量增加114，因此可作為泛素定位位點(diǎn)的質(zhì)量標(biāo)記。用HPLC對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)分離，使用針對(duì)特定殘留結(jié)構(gòu)的抗體富集泛素化肽，可很大程度上提高泛素化蛋白的濃度。串聯(lián)質(zhì)譜可以鑒定泛素化位點(diǎn)。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)：血漿蛋白糖基化修飾分析：蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過(guò)共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過(guò)程，是一種常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。分泌的細(xì)胞外蛋白常被糖基化，糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白。血漿中的蛋白質(zhì)包括維持機(jī)體正常生理狀態(tài)的蛋白質(zhì)和機(jī)體分泌、滲漏、脫落的蛋白質(zhì)，其中不乏存在一些糖基化蛋白質(zhì)。而蛋白質(zhì)糖基化修飾不只影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象、生物活性、運(yùn)輸和定位，而且在分子識(shí)別、細(xì)胞通信、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等特定生物過(guò)程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。因此對(duì)血漿蛋白糖基化進(jìn)行分析，有助于研究血漿蛋白的生理功能等。質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測(cè)的常用技術(shù)之一。

蛋白質(zhì)有哪些翻譯后修飾？作用機(jī)制和生物學(xué)功能是什么？前體蛋白是沒(méi)有活性的，常常要進(jìn)行一個(gè)系列的翻譯后加工，才能成為具有功能的成熟蛋白。加工的類型是多種多樣的，一般分為以下幾種：N-端fMet或Met的切除、二硫鍵的形成、化學(xué)修飾和剪切。當(dāng)合成蛋白質(zhì)時(shí)，20種不同的氨基酸會(huì)組合成為蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)的翻譯后蛋白質(zhì)其他的生物化學(xué)官能團(tuán)（如醋酸鹽、磷酸鹽、不同的脂類及碳水化合物）會(huì)附在蛋白質(zhì)上從而改變蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)，或是造成結(jié)構(gòu)的改變（如建立雙硫鍵），來(lái)擴(kuò)闊蛋白質(zhì)的功能。再者，酶可以從蛋白質(zhì)的N末端移除氨基酸，或從中間將肽鏈剪開(kāi)。舉例來(lái)說(shuō)，胰島素它會(huì)在建立雙硫鍵后被剪開(kāi)兩次，并在鏈的中間移走多肽前體，而形成的蛋白質(zhì)包含了兩條以雙硫鍵連接的多肽鏈。乙酰化修飾是原核和真核生物所共有的一種翻譯后修飾類型。河南糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要方式

蛋白質(zhì)修飾可檢測(cè)修飾類型有磷酸化、糖基化、乙?；⒎核鼗?、丙酰化、丁酰化、丙二?；Ｉ綎|乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)服務(wù)

蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)技術(shù)：泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外，泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位，調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動(dòng)。樣品要求：1、SDS-PAGE條帶：5個(gè)以上可見(jiàn)考染條帶。2、溶液（目標(biāo)蛋白質(zhì)）：目標(biāo)蛋白總量>50μg，目標(biāo)蛋白濃度>80%。3、溶液（大規(guī)?；旌系鞍踪|(zhì)）：蛋白總量>1mg，蛋白濃度>1μg/μl。山東乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

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