蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾分析:組蛋白是一類高度保守的蛋白質(zhì),是染色質(zhì)的關(guān)鍵成分,是DNA包裝的結(jié)構(gòu)單位。組蛋白的功能受其翻譯后修飾介導(dǎo)。組蛋白翻譯后修飾包括通過絲氨酸或蘇氨酸殘基的磷酸化,賴氨酸或精氨酸的甲基化,賴氨酸的乙?;兔撘阴;?,賴氨酸的泛素化和磺?;葘M蛋白進行的共價修飾。組蛋白這些修飾對于核完整性至關(guān)重要,因為它們可以調(diào)節(jié)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)并募集參與基因調(diào)節(jié)、DNA修復(fù)和染色體濃縮的酶。組蛋白的翻譯后修飾大多位于N末端的尾巴上,因為N末端是蛋白質(zhì)中比較暴露和比較靈活的區(qū)域。分析組蛋白翻譯后修飾有助于探索組蛋白修飾與染色體濃縮、DNA轉(zhuǎn)錄等生物功能之間的關(guān)系。蛋白質(zhì)翻譯后修飾有什么生物學(xué)意義?南京蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)有哪些
蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)技術(shù):乙?;揎検求w內(nèi)保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾,對細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的刺激有著重要的作用。此外,還存在的非組蛋白乙?;揎梾⑴c了代謝通路及代謝酶活性的調(diào)節(jié)。采用肽段預(yù)分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙?;b定的影響,再結(jié)合免疫共沉淀通過抗體富集乙?;碾亩?,從而實現(xiàn)乙?;蔫b定及定量。樣品要求:1、SDS-PAGE條帶:5個以上可見考染條帶。2、溶液(目標蛋白質(zhì)):目標蛋白總量>50μg,目標蛋白濃度>80%。3、溶液(大規(guī)模混合蛋白質(zhì)):蛋白總量>1mg,蛋白濃度>1μg/μl。四川棕櫚?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)價錢蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法有免疫印跡技術(shù)。
蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮功能的主要機制之一,在DNA損傷修復(fù),自噬和代謝等過程中都扮演著非常重要的角色,蛋白相互作用異常便會導(dǎo)致疾病的發(fā)生.在蛋白質(zhì)的賴氨酸,絲氨酸和蘇氨酸等氨基酸殘基上,可發(fā)生甲基化,乙?;?磷酸化和泛素化等200多種翻譯后修飾,這些修飾通常能改變蛋白質(zhì)的電性,疏水性和空間結(jié)構(gòu)等屬性,為與之結(jié)合的蛋白提供結(jié)合的錨定或產(chǎn)生位阻效應(yīng),像一把開關(guān)在時空上精確調(diào)控蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的發(fā)生以及動態(tài)變化.結(jié)構(gòu)研究表明,蛋白質(zhì)之間的相互作用通常由臨近的幾個氨基酸殘基直接結(jié)合,替換該區(qū)域的氨基酸殘基,通常能破壞結(jié)合,使其失去部分功能或酶活性,可以針對性地開發(fā)和設(shè)計抑制劑,用于疾病的診療。
蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法:免疫印跡技術(shù):技術(shù)優(yōu)勢特點。1、 檢測特異性高。2、能夠特異鑒定單個磷酸化位點。同位素標記(Isotope Labeled)結(jié)合免疫印跡法:此方法的原理是當?shù)鞍装l(fā)生磷酸化時,放射性32P的摻入和分子質(zhì)量變化引起的凝膠遷移(gelshift),再通過免疫印跡方法檢測同位素標記,從而達到鑒定磷酸化蛋白的目的。技術(shù)優(yōu)勢特點:1、檢測技術(shù)靈敏并且直觀。2、常用于體外磷酸化反應(yīng)結(jié)果檢測。3、 磷酸化鑒定不受抗體限制。4、可同時分析多個蛋白磷酸化。蛋白質(zhì)乙?;揎棧櫭剂x指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎(chǔ)上面嫁接上乙?;鶊F。
質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾:相對于蛋白質(zhì)印跡等技術(shù),質(zhì)譜技術(shù)能更有效的對蛋白質(zhì)的翻譯后修飾進行分析,且可以對常規(guī)的Western blot 翻譯后修飾蛋白鑒定進行補充。質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾一般使用自下而上的基于肽段的方法。但是自下而上的質(zhì)譜方法無法保證可以完全識別目的蛋白的特定翻譯后修飾,因為質(zhì)譜是通過蛋白質(zhì)序列內(nèi)的多個肽段來鑒定的,這很大程度上降低了翻譯后修飾肽段被識別的機會。一種提高質(zhì)譜儀檢測到修飾肽段數(shù)量的策略是使用PTM親和試劑進行肽段富集,而不是使用PTM親和試劑進行蛋白富集,這將減少富集的未修飾肽段的數(shù)量。泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位。河南磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)價錢
蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有全方面性。南京蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)有哪些
蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué):磷酸化蛋白質(zhì)是由蛋白激酶將ATP或GTP分子上的磷酸基團轉(zhuǎn)移到底物蛋白特定的氨基酸側(cè)鏈上形成的。蛋白質(zhì)磷酸化是一種可逆的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。在哺乳動物的細胞生命周期中,至少有三分之一的蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化修飾。磷酸化修飾參與許多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和細胞代謝過程,且許多已知的疾病也與蛋白質(zhì)的異常磷酸化有關(guān)。因此,對磷酸化蛋白質(zhì)組進行定量研究,尋找差異表達的磷酸化蛋白質(zhì),有助于發(fā)現(xiàn)疾病的生物標志物和尋找新的具有診療潛力的藥物靶標。南京蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)有哪些
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