轉錄組是特定發(fā)育階段或生理條件下細胞內的完整轉錄信息的匯合,表示了基因表達的中間狀態(tài)。轉錄組測序可以對所有轉錄物進行分類、確定基因的轉錄結構、量化轉錄物的表達水平。蛋白質是生命功能的直接執(zhí)行者,蛋白組是一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質。整合轉錄組學和蛋白質組學的表達數據對生物樣本進行研究,可以從整體上解釋生物學問題,探究生物體生理和疾病機理等。轉錄組學應用于胃腸瘤發(fā)生機制研究:利用轉錄組學可檢測瘤細胞惡化過程中的RNA(編碼RNA及非編碼RNA)的變化,有助于更好地理解胃腸瘤的發(fā)生機制。轉錄組學是一門在整體水平上研究細胞中基因轉錄的情況及轉錄調控規(guī)律的學科。廣東宏轉錄學組服務
單細胞轉錄組學技術:10×genomics技術:首先在凝膠微珠上種上特定的DNA的片段,DNA的片段由三部分組成:Barcode、UMI、PolyT組成。Barcode是16個堿基的長度。一共有400萬種Barcode,一個微珠是對應于一種Barcode,通過這400萬種Barcode,可以把凝膠微珠給區(qū)分開(通過barcode可以把cell分開)。UMI是一段隨機序列,也就是說每一個DNA分子,都有自己的UMI序列(一個微珠上有很多種UMI,通過UMI可以把RNA分子分開,并可以標記RNA分子的數量)。10個堿基長的UMI,有100萬種序列的變化(4^10=1,048,576),UMI的作用是為了區(qū)分哪些reads是來自于一個原始cDNA分子區(qū)分基因片段重復還是duplication及區(qū)分是真實的SNP位點還是PCR產生的突變。通過10×genomics儀器將單個細胞與單個凝膠微珠通過油相混在一起,形成油包水的小微滴。廣東宏轉錄學組服務轉錄組學測序可以同時測到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?
轉錄組學:轉錄組學是研究特定的細胞、組織或個體在特定時間和狀態(tài)下所轉錄出所有RNA的學科,轉錄組測序是指利用高通量測序方法,研究特定的細胞、組織或個體在特定時間和狀態(tài)下所轉錄出的所有mRNA,用于揭示不同功能狀態(tài)下的基因表達、結構的差異,闡明分子機制。應用領域:醫(yī)學研究:疾病標志物篩查、疾病的診斷和分型、疾病復發(fā)診斷、病因與病理機制探究、臨床療效評價、藥物毒理學評價。生命科學研究:非生物環(huán)境關系研究、植物與微生物、在表型鑒定中的應用、代謝途徑及功能基因組研究、藥用植物研究中的應用。
全轉錄組學測序技術優(yōu)勢:文庫優(yōu)化:針對不同長度的序列采用兩種文庫構建方法,采用去核糖體的鏈特異性文庫可以獲得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。數據全:全轉錄組測序完成后可獲取4類主要RNA(miRNA,mRNA,lncRNA,circRNA)數據,可對這些數據進行標準分析及整合分析。關聯全:通過對mRNA/miRNA/lncRNA/circRN序列測定及后續(xù)分析,深入開展全轉錄組調控網絡(ceRNA網絡)分析。樣本類型:細胞,組織,體液、血清、血漿、全血,總RNA等。建議總RNA起始量:>15μg,濃度≥200ng/μL)。轉錄學組測序可對任意物種的整體轉錄活動進行檢測。
什么是轉錄組學測序?轉錄組廣義上指在某一生理條件下,細胞內所有轉錄組產物的組合,包括:mRNA、ncRNA、rRNA等;狹義上指所有mRNA的組合。轉錄組測序的研究對象為特定細胞在某一功能狀態(tài)下所能轉錄出來的所有RNA的總和,主要包括mRNA和ncRNA。轉錄組具有時間特異性、組織特異性、空間特異性等特點。無參轉錄組和有參轉錄組的區(qū)別?如果所研究的物種有組裝注釋質量較好基因組序列,且和該基因組序列比對效率較高,那么可以采用有參轉錄組的分析策略,直接進行分析。反之,則需要按照無參轉錄組的分析策略進行轉錄本組裝,構建unigene庫,然后進行后續(xù)分析。RNA-Seq轉錄組學有著巨大的應用前景。浙江全轉錄學組檢測價格
轉錄組學即一個活細胞所能轉錄出來的所有RNA的總和。廣東宏轉錄學組服務
轉錄組學為什么原核物種只能做有參轉錄組分析?由于原核生物的基因組中存在大量基因重疊區(qū)域、操縱子及多順反子,如果按照無參轉錄組分析策略進行組裝的話,難度較大,組裝結果存在較大風險。轉錄組學差異基因數目多少比較合理?不同的處理,不同的研究目標,差異基因的數目是不同的,從幾十個到幾千個都有可能。但是如果差異基因數目是個位數或者上萬,那么就需要和分析人員溝通一下,查一查是否有問題。轉錄組學差異基因太多,注釋信息太雜亂,怎么挑選目標基因?對不同的差異組合進行維恩圖分析,挑選共有或者特有的差異基因作為后續(xù)的研究對象;根據前人的文獻報道,挑選相關差異基因,不要局限在自己研究的物種上。廣東宏轉錄學組服務
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