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蛋白組學技術:質譜技術相較于傳統(tǒng)蛋白質鑒定技術而言,擁有靈敏、準確、高通量、自動化等特點。質譜鑒定蛋白質的基本原理是先將樣品分子離子化,然后根據不同離子之間的質荷比差異來分離并確定蛋白質的相對分子質量。根據蛋白質酶解后所得到的肽質量指紋圖譜、肽序列標簽、和肽階梯序列去檢索蛋白質或核酸序列數據庫,質譜技術可達到對蛋白質的快速鑒定和高通量篩選。因產生離子的方法不同而發(fā)展起來的質譜包括基質輔助激光解吸離子化質譜、電噴霧離子化質譜、表面增強激光解吸離子化質譜等。定量蛋白質組學技術主要分為標記(label)和非標記(label free)定量策略。浙江修飾蛋白組學方法
蛋白質組學發(fā)展趨勢:技術發(fā)展方面:蛋白質組學的研究方法將出現(xiàn)多種技術并存,各有優(yōu)勢和的特點,而難以象基因組研究一樣形成比較一致的方法。除了發(fā)展新方法外,更強調各種方法間的整合和互補,以適應不同蛋白質的不同特征。另外,蛋白質組學與其它學科的交叉也將日益明顯和重要,這種交叉是新技術新方法的活水之源,特別是,蛋白質組學與其它大規(guī)??茖W如基因組學,生物信息學等領域的交叉,構成組學(omics)生物技術研究方法,所呈現(xiàn)出的系統(tǒng)生物學(SystemBiology)研究模式,將成為未來生命科學比較令人激動的新前沿。浙江修飾蛋白組學方法蛋白質組學由此獲得蛋白質水平上的關于疾病發(fā)生,細胞代謝等過程的整體而全方面的認識。
蛋白質組學技術:等電聚焦:等電聚焦(isoelectricfocusing,IEF)是一種利用有pH梯度的介質分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。等電聚焦凝膠電泳依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離,等電聚焦中,蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸,在電場中形成正極為酸性,負極為堿性的連續(xù)的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷,因此可以在電場中移動;當蛋白質遷移至其等電點位置時,其靜電荷數為零,在電場中不再移動,據此將蛋白質分離。
蛋白質組學:對人類而言,蛋白質組學的研究終究要服務于人類的健康,主要指促進分子醫(yī)學的發(fā)展。如尋找藥物的靶分子。很多藥物本身就是蛋白質,而很多藥物的靶分子也是蛋白質。藥物也可以干預蛋白質-蛋白質相互作用。在基礎醫(yī)學和疾病機理研究中,了解人不同發(fā)育、生長期和不同生理、病理條件下及不同細胞類型的基因表達的特點具有特別重要的意義。這些研究可能找到直接與特定生理或病理狀態(tài)相關的分子,進一步為設計作用于特定靶分子的藥物奠定基礎。蛋白質組學研究不僅是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益。
蛋白質組學技術:蛋白質組學技術的發(fā)展已經成為現(xiàn)代的生物技術快速發(fā)展的重要支撐,并將帶領生物技術取得關鍵性的突破。為幫助生命科學領域的工作者全方面掌握蛋白質組學的技術與方法、實驗難點與關鍵點、研究前沿與熱點,包括雙向凝膠電泳、等電聚焦、生物質譜分析及非凝膠技術。雙向凝膠電泳:雙向凝膠電泳的原理是第1向基于蛋白質的等電點不同用等電聚焦分離,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復雜蛋白混合物中的蛋白質在二維平面上分開。由于雙向電泳技術在蛋白質組與醫(yī)學研究中所處的重要位置,它可用于蛋白質轉錄及轉錄后修飾研究,蛋白質組的比較和蛋白質間的相互作用,細胞分化凋亡研究,致病機制及耐藥機制的研究,療效監(jiān)測,新藥開發(fā),病癥研究,蛋白純度檢查,小量蛋白純化,新替代疫苗的研制等許多方面。近年來經過多方面改進已成為研究蛋白質組的比較有使用價值的關鍵方法。蛋白質組學技術的本質(從分析化學角度來看),就是對蛋白質的定性定量分析。浙江修飾蛋白組學方法
對人類而言,蛋白質組學的研究終究要服務于人類的健康。浙江修飾蛋白組學方法
蛋白質組學在醫(yī)學的研究應用:蛋白質組學(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學,包括對蛋白質表達模式和蛋白質組功能模式的研究。蛋白質組學的發(fā)展對尋找疾病的診斷標志、篩選藥物靶點、毒理學研究等有重要意義,也因此被普遍應用于醫(yī)學研究。蛋白質組學研究,總體可分為一下幾個步驟:(1)差異篩選(Discovery)(2)初步驗證(Verification)(3)然后確診(Validation)?;谫|譜的蛋白質組學是目前比較主流的高通量蛋白質研究手段,當前在醫(yī)療健康方面的應用主要集中于基礎研究和轉化醫(yī)學。浙江修飾蛋白組學方法
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