代謝組學細胞樣本收集:懸浮細胞:1)連同培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到1.5 mL的進口離心管中。2)低速離心5 min(低于3000 rpm),使細胞沉淀于離心管的底部(1*107個細胞為宜)。3)倒掉培養(yǎng)基(盡量倒干凈),用預(yù)冷的PBS反復(fù)沖洗2 ~ 3次,低速離心5 min,棄上清。4)標記離心管,將離心管的尖的一端插入液氮中,淬滅細胞沉淀1 min,-80 ℃凍存,干冰寄送。注意事項:1. 培養(yǎng)基傾倒時盡量倒干凈,可使用濾紙將殘留培養(yǎng)液吸凈;2. 甲醇/水請使用色譜純及以上規(guī)格;3. 液氮淬滅細胞時,請小心避免離心管破碎導(dǎo)致樣本受損;4. 建議細胞樣本在進行培養(yǎng)時多準備樣本,以備后續(xù)使用。代謝組學著重研究的是生物整體、組織代謝途徑及其所受內(nèi)在或者外在因素的影響及隨時間變化的規(guī)律。貴州動物靶向代謝組學技術(shù)
靶向代謝組學的一般分析流程為:1. 數(shù)據(jù)采集 第1步是得到標準品。如果無法從市場上買到,就必須定制合成。然后通過優(yōu)化產(chǎn)物離子碰撞能量以得到的信號,再通過測定三重串聯(lián)四極桿測定代謝物的 MRM 躍遷值。2. 定量 接下來用定量分析軟件對 MRM 數(shù)據(jù)進行處理,得到報告。3. 統(tǒng)計分析和解釋 將定量報告輸入統(tǒng)計分析軟件包,用統(tǒng)計工具,如ANOVA,對數(shù)據(jù)進行處理。靶向分析:在基于質(zhì)譜的代謝組學分析中,要意識到離子強度和色譜保留時間都會隨著時間的推移而產(chǎn)生漂移,所以在實驗中,要按隨機順序?qū)颖具M行檢測,且數(shù)據(jù)需要在同天同一批次進行采集,以減少誤差。河南脂質(zhì)代謝組學多研究在食品安全領(lǐng)域,利用代謝組學工具發(fā)現(xiàn)農(nóng)獸藥等在動植物體內(nèi)的相關(guān)生物標志物也是一個熱點領(lǐng)域。
代謝組學有哪些應(yīng)用?近年來,代謝組學技術(shù)得到了迅速發(fā)展,主要可應(yīng)用于:功能基因組學、疾病早期診斷、病因病機研究、藥物毒理學、中醫(yī)藥現(xiàn)代化、植物代謝組學、微生物代謝組學、營養(yǎng)學、環(huán)境科學等生命科學的各個領(lǐng)域。為什么要選擇代謝組學?首先需要明確的是代謝組學的目標分析物主要為生物小分子及其代謝產(chǎn)物,如糖、有機酸、脂質(zhì)、維生素、氨基酸、芳香烴之類等化合物。所以,如果關(guān)注的是小分子物質(zhì),那么采用代謝組學的方法,可以對樣品內(nèi)檢測到的小分子物質(zhì)進行定性、定量分析。同于基因組學和蛋白組學,代謝組學的研究反映某一時刻下正在發(fā)生的生命活動情況,研究代謝物的表達量、代謝物與生理病理變化的關(guān)系,能夠幫助尋找新的生物標記物,發(fā)現(xiàn)新的代謝途徑,以及更進一步深入了解目前已知的這些途徑,應(yīng)用于疾病的早期診斷、藥物靶點的發(fā)現(xiàn)、疾病的病理生理研究。
代謝組學概念:代謝組學主要研究的是作為各種代謝路徑的底物和產(chǎn)物的小分子代謝物(MW<1000)。 在食品安全領(lǐng)域,利用代謝組學工具發(fā)現(xiàn)農(nóng)獸藥等在動植物體內(nèi)的相關(guān)生物標志物也是一個熱點領(lǐng)域。其樣品主要是動植物的細胞和組織的提取液。主要技術(shù)手段是核磁共振(NMR),質(zhì)譜(MS),色譜(HPLC,GC),其中以NMR為主。通過檢測一系列樣品的NMR 譜圖,再結(jié)合模式識別方法,可以判斷出生物體的病理生理狀態(tài),并有可能找出與之相關(guān)的生物標志物(biomarker)。靶向代謝組學(Trgeted metabolomics)則為目標性代謝組學。
代謝組學樣本收集注意事項:1.對于動物組織樣本無法滿足50mg/樣,如海馬組織,大腦組織等,可考慮同組混樣以達到50mg/樣的要求。2.對于含水量高的果實進行取樣很難保持高度均一性(如番茄的果皮、果肉等),建議將整個果實進行液氮研磨后凍干混勻,對混勻后的粉末進行稱重分裝,凍存。3.盡量不要使用錫箔紙以及自封袋包裝樣本,建議將樣本液氮研磨后使用離心管/凍存管進行分裝。4.在使用PBS緩沖液/超純水進行漂洗時,需要盡快處理。5.植物各類組織樣本建議都使用超純水進行漂洗完之后,再研磨分裝凍存,防止因種植過程中施加的一些肥料、農(nóng)藥等含有表面活性劑或其他雜質(zhì),對后續(xù)實驗造成影響。代謝組學的代謝產(chǎn)物是基因表達的產(chǎn)物。河南農(nóng)學靶向代謝組學分析方法
代謝組學主要研究的是作為各種代謝路徑的底物和產(chǎn)物的小分子代謝物(分子量<1000)。貴州動物靶向代謝組學技術(shù)
代謝組學疾病診斷應(yīng)用: 代謝組學研究人員已經(jīng)對此進行了研究。新生兒是否缺失酶基因,可以在出生時就檢測出來??蓹z測出包括涉及合成途徑中的基本成分(如氨基酸)的酶。酶缺失的結(jié)果就是相應(yīng)的代謝產(chǎn)物過少或過多。尿癥(PKU)是一種常見的嬰兒疾病。這種疾病是由于缺失將苯丙氨酸水解成酪氨酸所必須的苯丙氨酸水解酶基因,導(dǎo)致血液中苯丙氨酸累積造成的。若是不能及時檢測出這種天生的代謝缺乏,在嬰兒出生后九個月內(nèi),就會引起無法挽救的大腦損傷。這種疾病通過簡單的血樣和尿素化驗就可以確診。而血樣和尿素化驗以后也將成為代謝指紋研究方法的一部分。像尿癥那樣的疾病,研究人員正試圖從疾病的生物化學基礎(chǔ)著手,而不是只有檢測生物標記物。他們希望通過代謝組學,可以找到更好的方法去治這些疾病。貴州動物靶向代謝組學技術(shù)
上海拜譜生物科技有限公司致力于商務(wù)服務(wù),是一家服務(wù)型公司。公司自成立以來,以質(zhì)量為發(fā)展,讓匠心彌散在每個細節(jié),公司旗下多組學服務(wù),質(zhì)譜檢測,蛋白質(zhì)組學,代謝組學深受客戶的喜愛。公司將不斷增強企業(yè)重點競爭力,努力學習行業(yè)知識,遵守行業(yè)規(guī)范,植根于商務(wù)服務(wù)行業(yè)的發(fā)展。拜譜生物憑借創(chuàng)新的產(chǎn)品、專業(yè)的服務(wù)、眾多的成功案例積累起來的聲譽和口碑,讓企業(yè)發(fā)展再上新高。