蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學:血漿蛋白糖基化修飾分析:蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過程,是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。分泌的細胞外蛋白常被糖基化,糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白。血漿中的蛋白質(zhì)包括維持機體正常生理狀態(tài)的蛋白質(zhì)和機體分泌、滲漏、脫落的蛋白質(zhì),其中不乏存在一些糖基化蛋白質(zhì)。而蛋白質(zhì)糖基化修飾不只影響蛋白質(zhì)的空間構象、生物活性、運輸和定位,而且在分子識別、細胞通信、信號轉(zhuǎn)導等特定生物過程中發(fā)揮著至關重要的作用。因此對血漿蛋白糖基化進行分析,有助于研究血漿蛋白的生理功能等。蛋白質(zhì)翻譯后修飾可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學性質(zhì)。江蘇糖基化修飾蛋白質(zhì)組學類型
蛋白質(zhì)學組翻譯后修飾的類型:翻譯后修飾的類型包括N端fMet或Met的去除、二硫鍵的形成、化學修飾和肽鍵的裂解,其中磷酸化是比較常見的。蛋白質(zhì)的化學修飾反應是在維持蛋白質(zhì)的完整性和功能性的基礎上,通過基于其氨基酸殘基的化學反應獲得新的生物結合物。翻譯后修飾在哪里發(fā)生?翻譯后修飾主要發(fā)生在氨基酸側(cè)鏈或蛋白質(zhì)的C端或N端?,F(xiàn)有的官能團或新官能團的引入可被用于修飾蛋白質(zhì),以擴展20個標準氨基酸的化學組成。翻譯后修飾的位點通常帶有可以在化學反應中充當親核試劑的官能團,如絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的羥基;賴氨酸、精氨酸和組氨酸胺形式;同時,在蛋白質(zhì)的N端和C端,天冬酰胺也可作為翻譯后修飾中的一種聚糖連接點。翻譯后修飾也發(fā)生在氧化的蛋氨酸和側(cè)鏈位點的一些亞甲基上。山東蛋白質(zhì)亞硝基化修飾組學鑒定蛋白質(zhì)修飾可檢測修飾類型有磷酸化、糖基化、乙酰化、泛素化、丙?;?、丁?;⒈;?/p>
蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學:磷酸化蛋白質(zhì)是由蛋白激酶將ATP或GTP分子上的磷酸基團轉(zhuǎn)移到底物蛋白特定的氨基酸側(cè)鏈上形成的。蛋白質(zhì)磷酸化是一種可逆的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。在哺乳動物的細胞生命周期中,至少有三分之一的蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化修飾。磷酸化修飾參與許多信號轉(zhuǎn)導途徑和細胞代謝過程,且許多已知的疾病也與蛋白質(zhì)的異常磷酸化有關。因此,對磷酸化蛋白質(zhì)組進行定量研究,尋找差異表達的磷酸化蛋白質(zhì),有助于發(fā)現(xiàn)疾病的生物標志物和尋找新的具有診療潛力的藥物靶標。
蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學定量分析:1. SILAC細胞標記,組織/細胞破碎,提取、提純目的蛋白質(zhì)(基于SILAC的乙?;揎椊M學定量)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 對多肽片段進行iTRAQ標記(基于iTRAQ的乙酰化修飾組學定量)。4. 使用高效特異性乙酰化抗體對乙?;揎楇亩芜M行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對富集的乙?;亩芜M行序列分析。6. 數(shù)據(jù)分析,比對不同樣本中蛋白乙?;揎椝讲町?,并對產(chǎn)生變化的生物學意義進行解釋。通過蛋白質(zhì)翻譯后修飾也進一步增加了細胞通路機制和生命活動的多樣性和復雜性。
乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學分析:乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學分析是指從蛋白質(zhì)組學的水平分析蛋白質(zhì)乙?;揎棧ㄒ阴;鞍踪|(zhì)的鑒定和定量。提供基于質(zhì)譜的乙?;鞍捉M研究服務。蛋白質(zhì)乙?;ńM蛋白乙?;头墙M蛋白乙?;=M蛋白乙?;饕琴嚢彼嵋阴;言诨蜣D(zhuǎn)錄調(diào)控作用方面被普遍的研究。非組蛋白乙?;瘶嫵闪瞬溉閯游锛毎幸阴;鞍椎闹饕糠?,參與了所有主要生物過程,包括蛋白質(zhì)的定位、轉(zhuǎn)移、功能和降解,遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)錄和復制等。除了重要的生物學功能以外,乙酰化蛋白質(zhì)及其調(diào)控酶還與衰老和多種疾?。ㄈ缟窠?jīng)變形紊亂、心血管疾病等)緊密相關。因此,對乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組進行研究有助于進一步探索細胞的生命活動與了解相關疾病的發(fā)病機制。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點分析時應該注意些什么問題?北京蛋白質(zhì)泛素化修飾組學分析
蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法有免疫印跡技術。江蘇糖基化修飾蛋白質(zhì)組學類型
蛋白質(zhì)學組翻譯后修飾的研究策略:自中而下:自中而下的分析方法是自下而上分析方法的一種替代方法,分析組蛋白時其原理類似于自下而上分析策略。在使用這種分析方法時,通常需要將被檢測蛋白質(zhì)消化成3-9kDa范圍內(nèi)的肽段,因此也無法保證檢測到的肽段的完整性。但是,由于儀器的進步和保留了組蛋白尾部的組合修飾,自中而下分析法正逐漸受到歡迎。自中而下更接近于自下而上法的靈敏度。自上而下:自上而下技術可以直接對完整的蛋白質(zhì)進行測序,包括翻譯后修飾的蛋白質(zhì)和其他大的蛋白質(zhì)片段,而不只是肽段。這可以比較大程度地保留與PTMs相關的信息,使其適用于組蛋白的全方面表征和分析。自上而下技術對蛋白質(zhì)的有效分辨率已達到229kDa,一次可以檢測到的蛋白質(zhì)數(shù)量也在增加。江蘇糖基化修飾蛋白質(zhì)組學類型
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