蛋白翻譯后修飾：蛋白質(zhì)氨基酸序列的特定位置可以與化學(xué)基團(tuán)或者小分子量的蛋白共價(jià)結(jié)合從而發(fā)生蛋白質(zhì)翻譯后修飾（post-translational modifications，PTMs）。翻譯后修飾是蛋白質(zhì)生物合成的一個(gè)步驟，翻譯后多肽鏈在成為成熟的蛋白質(zhì)產(chǎn)品之前要經(jīng)過(guò)修飾，PTMs的類型包括磷酸化、乙酰化、糖基化、泛素化和二硫鍵等等，它導(dǎo)致蛋白質(zhì)組復(fù)雜性的大幅增加。對(duì)于任何給定的蛋白質(zhì)，各種各樣的PTMs提供了一種通過(guò)改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能來(lái)促進(jìn)細(xì)胞快速變化的方法。PTMs在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和周轉(zhuǎn)率、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)識(shí)別和相互作用以及空間定位中起著至關(guān)重要的作用。常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化。武漢乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)有哪些類型
蛋白質(zhì)翻譯后修飾的檢測(cè)方法：質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測(cè)的常用技術(shù)之一，可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測(cè)。蛋白質(zhì)翻譯后修飾（post-translational modifications，PTMs），如磷酸化、乙?；⒎核鼗?、SUMO化、糖基化等，大幅度的增加了蛋白質(zhì)組的復(fù)雜性。檢測(cè)蛋白質(zhì)的翻譯后修飾，了解它們?nèi)绾喂ぷ?、影響蛋白質(zhì)組和調(diào)控基因組將極大地提高我們對(duì)遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)的理解。目標(biāo)蛋白的PTMs研究通常需要一個(gè)富集步驟，因?yàn)樾揎椀鞍椎呢S度一般較低。大多數(shù)PTMs檢測(cè)方法都是結(jié)合富集策略開(kāi)發(fā)的，以比較好的識(shí)別、驗(yàn)證和研究目標(biāo)蛋白中PTMs的功能。泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時(shí)應(yīng)該注意些什么問(wèn)題？
蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)定量分析：1. SILAC細(xì)胞標(biāo)記，組織/細(xì)胞破碎，提取、提純目的蛋白質(zhì)（基于SILAC的乙?；揎椊M學(xué)定量）。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 對(duì)多肽片段進(jìn)行iTRAQ標(biāo)記（基于iTRAQ的乙酰化修飾組學(xué)定量）。4. 使用高效特異性乙?；贵w對(duì)乙?；揎楇亩芜M(jìn)行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對(duì)富集的乙?；亩芜M(jìn)行序列分析。6. 數(shù)據(jù)分析，比對(duì)不同樣本中蛋白乙酰化修飾水平差異，并對(duì)產(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進(jìn)行解釋。
蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：1、全方面性：磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)以整個(gè)細(xì)胞蛋白為研究對(duì)象，研究?jī)?nèi)容包括了細(xì)胞內(nèi)具有生命功能的蛋白，如細(xì)胞增生、細(xì)胞分裂和細(xì)胞分化等相關(guān)蛋白，因而研究更為全方面。2、可靠性：傳統(tǒng)的生物學(xué)研究蛋白質(zhì)磷酸化往往針對(duì)特定條件，以兩個(gè)蛋白或更多蛋白之間的相互作用為出發(fā)點(diǎn)，具有局限性，缺乏整體認(rèn)識(shí)。磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)則可檢測(cè)不同蛋白激酶及磷酸化酶對(duì)同一個(gè)蛋白磷酸化程度的影響，因而結(jié)果具有普遍性和可靠性。3、有效性：磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)反映的是細(xì)胞內(nèi)真實(shí)發(fā)生的事件，在一次試驗(yàn)中考慮了不同變量，克服了生物學(xué)中逐步添加變量的缺陷。4、探索性：磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)以細(xì)胞內(nèi)蛋白為研究對(duì)象，相對(duì)于傳統(tǒng)的生物學(xué)研究以及蛋白質(zhì)芯片，更易發(fā)現(xiàn)未知的新磷酸化位點(diǎn)和磷酸化蛋白質(zhì)。如果可以聯(lián)合生物學(xué)技術(shù)，則可以發(fā)現(xiàn)具有磷酸化或者去磷酸化功能的酶。在眾多乙?；揎椀牡鞍踪|(zhì)中，研究較多的要數(shù)細(xì)胞核中包圍DNA的組蛋白了。
蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)分析：基于LC-MS/MS分析能夠精確測(cè)定蛋白質(zhì)或多肽分子質(zhì)量這一特性，從而檢測(cè)蛋白質(zhì)或者多肽上位點(diǎn)發(fā)生何種修飾?？蓹z測(cè)修飾類型如下： 磷酸化、糖基化、乙?；⒎核鼗?、丙?；⒍□；?、丙二?；?、戊二?；㈢牾；?、單甲基化、二甲基化、三甲基化。1、磷酸化：信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期、生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)理等；2、糖基化：蛋白質(zhì)折疊、更新以及免疫應(yīng)答等；3、乙?；夯虮磉_(dá)調(diào)控、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性以及神經(jīng)退行性的病變等；4、泛素化：細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA修復(fù)以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等；5、甲基化：染色質(zhì)結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等；6、丙?；?/ 丙二?；?/ 戊二?；?/ 琥珀?；褐饕嬖谟诰€粒體和細(xì)菌中，與代謝過(guò)程密切相關(guān)。各種蛋白質(zhì)翻譯后修飾在信號(hào)通路和網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要的作用。深圳蛋白質(zhì)丙二?；揎椊M學(xué)主要方式
蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有可靠性。武漢乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)有哪些類型
蛋白磷酸化檢測(cè)方法：質(zhì)譜檢測(cè)方法優(yōu)勢(shì)：1. 準(zhǔn)確度高，能夠同時(shí)檢測(cè)多個(gè)蛋白的多個(gè)磷酸化位點(diǎn)。2. 適用于大規(guī)模分析蛋白磷酸化水平。3. 不依賴于磷酸化抗體。在實(shí)際應(yīng)用中，Western Blot與質(zhì)譜分析方法各有各的好，誰(shuí)也無(wú)法完全被另一種方法所替代。所以在選擇測(cè)定磷酸化修飾的時(shí)候還應(yīng)該根據(jù)具體需要來(lái)決定。如果研究的蛋白正好有商業(yè)化的磷酸化抗體，那么lucky you，你可以選擇Western Blot進(jìn)行快速磷酸化測(cè)定研究。但是如果你所研究的蛋白質(zhì)沒(méi)有可用的商業(yè)化磷酸抗體，或是抗體價(jià)效過(guò)低，亦或是需要大規(guī)模地檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)磷酸化蛋白的水平的話，質(zhì)譜檢測(cè)會(huì)是更好地選擇。武漢乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)有哪些類型