蛋白質(zhì)組學(xué):質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)組學(xué)的基本原理主要是通過測定被測樣品離子的理化性質(zhì)來進(jìn)行分析,根據(jù)樣品的質(zhì)量譜圖和相關(guān)信息從而得到定性和定量結(jié)果。目前,蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析一般是根據(jù)保留時(shí)間(retentiontime)、質(zhì)荷比(m/z)、離子強(qiáng)度(intensity)這三個(gè)維度對肽蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量,即3D蛋白質(zhì)組學(xué)。4D蛋白質(zhì)組學(xué)在3D蛋白質(zhì)組學(xué)的基礎(chǔ)之上增加了第四維度,離子淌度(mobility),主要根據(jù)離子的形狀和截面對離子進(jìn)行分離,能夠區(qū)分m/z差值非常小的肽段,使低豐度蛋白信號能夠被區(qū)分和識別出來。4D蛋白質(zhì)組學(xué)基于timsTOFPro質(zhì)譜儀,結(jié)合PASEF(ParallelAccumulationSerialFragmentation,同步累積連續(xù)碎裂)與TIMS(TrappedIonMobilitySpectrometry,離子遷移譜),可重復(fù)測量所有檢測離子的碰撞截面(CCS),能更快、更靈敏的進(jìn)行蛋白質(zhì)組定性和定量。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)有電噴霧質(zhì)譜。南京4D定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析價(jià)格
定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記(label)和非標(biāo)記(labelfree)定量策略,標(biāo)記策略又分為體內(nèi)標(biāo)記和體外標(biāo)記兩種。細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動態(tài)變化對各種生命過程有重要影響。例如在許多疾病的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程中,常常伴隨著某些蛋白質(zhì)的表達(dá)異常。定量蛋白質(zhì)組學(xué)就是把一個(gè)基因組表達(dá)的全部蛋白質(zhì)或一個(gè)復(fù)雜的混合體系中所有的蛋白質(zhì)進(jìn)行精確的定量和鑒定。非標(biāo)記(labelfree)的定量蛋白組學(xué)技術(shù),Labelfree定量蛋白組學(xué)技術(shù)是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn),只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時(shí)所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號強(qiáng)度,從而對肽段對應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對定量。上海TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法通過對正常個(gè)體及病理個(gè)體間的蛋白質(zhì)組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”。
定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):定量蛋白質(zhì)組學(xué)是蛋白質(zhì)組研究的重要內(nèi)容,通過對基因表達(dá)產(chǎn)物——蛋白質(zhì)的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境條件下的表達(dá)情況。近年來,隨著非凝膠技術(shù)的發(fā)展,蛋白質(zhì)組學(xué)(“Shotgun”proteomics)技術(shù),特別是多維蛋白質(zhì)鑒定(MultidimensionalProteinIdentification,MudPIT)已成為研究復(fù)雜生物樣本中大規(guī)模蛋白質(zhì)表達(dá)和定性和定量分析的強(qiáng)有力工具。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(xué)是研究細(xì)胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學(xué)。
我們究竟怎么研究蛋白質(zhì)組學(xué)呢?目前高通量檢測蛋白質(zhì)的方法中,還是首推基于質(zhì)譜的方法,納流液相可以將復(fù)雜樣品中的肽段高效地分離,然后依次進(jìn)入質(zhì)譜,對每個(gè)被離子化的肽段及其碎裂后碎片的荷質(zhì)比進(jìn)行分析,從而得到該肽段的序列信息,然后根據(jù)對應(yīng)的色譜峰面積或者報(bào)告離子強(qiáng)度等信息,我們又可以得到該肽段的定量信息。蛋白組學(xué)研究怎么做?當(dāng)下蛋白組學(xué)研究中應(yīng)用比較普遍的技術(shù)是同位素標(biāo)記定量(iTRAQ/TMT技術(shù))。iTRAQ/TMT技術(shù)是利用DDA掃描模式,其掃描的方式是將一級質(zhì)譜信號比較強(qiáng)的Top20的多肽進(jìn)行二級打碎,然后進(jìn)入二級質(zhì)譜進(jìn)行檢測。其優(yōu)勢是二級譜圖采集的肽段信息都來源于同一條多肽,有利于后續(xù)的定性分析。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的本質(zhì)(從分析化學(xué)角度來看),就是對蛋白質(zhì)的定性定量分析。
PRM靶向蛋白質(zhì)組學(xué):產(chǎn)品分類:a.相對定量(目的同WB)。b.一定定量(目的同Elisa)。技術(shù)優(yōu)勢:(1)無需抗體,可直接對樣本中目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析。(2)高特異性、準(zhǔn)確度和靈敏度,靶向檢測目標(biāo)蛋白對應(yīng)的多個(gè)unique肽段。(3)通量高,可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)幾十個(gè)蛋白的定量檢測。樣本要求:動物及臨床組織標(biāo)本100mg/sample,血清、血漿200μL/sample,細(xì)胞、微生物1×107cells/sample。應(yīng)用方向:驗(yàn)證修飾和非修飾定量蛋白組學(xué)結(jié)果;目標(biāo)蛋白相對定量和一定定量分析。蛋白質(zhì)組學(xué)屬于后基因組時(shí)代的科學(xué)研究,針對基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測與定量。定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記(label)和非標(biāo)記(label free)定量策略。上海TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法
蛋白質(zhì)組學(xué)在應(yīng)用中,更多地用于提供高通量蛋白質(zhì)定性定量信息。南京4D定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析價(jià)格
蛋白組究竟研究的是什么呢?第1,蛋白質(zhì)定性,或者說大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)是否存在于樣品當(dāng)中;第2,蛋白質(zhì)定量,也就是大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)的含量(包括一定含量與相對含量);第3,蛋白質(zhì)翻譯后修飾,這些修飾主要包括磷酸化,泛素化,糖基化,乙?;鹊龋舶▽@些翻譯后修飾的定量研究。這三大塊中所提到的大規(guī)模,既可以是樣品數(shù)量的大規(guī)模高通量,也可以是少量樣本中蛋白數(shù)量的大規(guī)模高通量。研究原因:首先,由于翻譯調(diào)控和翻譯后調(diào)控的存在,RNA的表達(dá)量與實(shí)際對應(yīng)蛋白質(zhì)的含量相關(guān)性并不高,就簡單地測試了酵母中mRNA和對應(yīng)蛋白質(zhì)的定量相關(guān)性,結(jié)果是,低豐度蛋白與mRNA的相關(guān)性尤其低,而高豐度蛋白和其mRNA的相關(guān)性則高,經(jīng)過平均后r值只為0.4。南京4D定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析價(jià)格