蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)成為現(xiàn)代的生物技術(shù)快速發(fā)展的重要支撐,并將帶領(lǐng)生物技術(shù)取得關(guān)鍵性的突破。為幫助生命科學(xué)領(lǐng)域的工作者全方面掌握蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)與方法、實(shí)驗(yàn)難點(diǎn)與關(guān)鍵點(diǎn)、研究前沿與熱點(diǎn),包括雙向凝膠電泳、等電聚焦、生物質(zhì)譜分析及非凝膠技術(shù)。雙向凝膠電泳:雙向凝膠電泳的原理是第1向基于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同用等電聚焦分離,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復(fù)雜蛋白混合物中的蛋白質(zhì)在二維平面上分開(kāi)。由于雙向電泳技術(shù)在蛋白質(zhì)組與醫(yī)學(xué)研究中所處的重要位置,它可用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾研究,蛋白質(zhì)組的比較和蛋白質(zhì)間的相互作用,細(xì)胞分化凋亡研究,致病機(jī)制及耐藥機(jī)制的研究,療效監(jiān)測(cè),新藥開(kāi)發(fā),病癥研究,蛋白純度檢查,小量蛋白純化,新替代疫苗的研制等許多方面。近年來(lái)經(jīng)過(guò)多方面改進(jìn)已成為研究蛋白質(zhì)組的比較有使用價(jià)值的關(guān)鍵方法。定量蛋白質(zhì)組學(xué)通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境條件下的表達(dá)情況。貴州蛋白質(zhì)組學(xué)方法
我國(guó)科學(xué)家已經(jīng)在重大疾病如肝病、維甲酸誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡啟動(dòng)模型及維甲酸定向誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)系統(tǒng)分化的模型等比較蛋白質(zhì)組研究以及一些重要生理和病理體系的蛋白質(zhì)組成分研究方面獲得了重要成就。蛋白質(zhì)組學(xué)的重要應(yīng)用領(lǐng)域有:在臨床疾病中的應(yīng)用、在微生物蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用、在植物研究中的應(yīng)用、在腎臟病學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用。我們通過(guò)研究蛋白質(zhì)組,可以為患者提供有用的疾病診斷、診療、預(yù)后評(píng)估信息;可以早期更為準(zhǔn)確的診斷出胰腺病;也可以為AD的診斷、診療藥物的設(shè)計(jì)和篩選奠定基礎(chǔ)。這項(xiàng)研究技術(shù)其實(shí)離我們生活非常近,對(duì)我們生命而言尤為重要。近年來(lái),高通量蛋白質(zhì)分離與鑒定技術(shù),如雙向電泳、生物質(zhì)譜、蛋白質(zhì)芯片、酵母雙雜交系統(tǒng)、生物信息學(xué)等相繼建立并日趨完善,加速了蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展。北京定量蛋白組學(xué)應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)并帶領(lǐng)生物技術(shù)取得關(guān)鍵性的突破。
蛋白質(zhì)組學(xué)植物篇樣品寄樣要求:植物相較于動(dòng)物,蛋白占比不高,所以送樣在量上面的要求會(huì)多一些,推薦送500mg以上的量可以確保實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛱崛〉匠渥愕牡鞍?。如果是種仁、豆類(lèi)等蛋白含量比較高的,200mg足以完成抽提。處理樣本需要用PBS將樣本表面的泥土等雜質(zhì)沖洗干凈,去除掉多余的組織。盡量能夠保證樣本的形態(tài)和純度,不推薦用錫紙包裹,放在EP管中使其形態(tài)完整為比較好。用液氮急速冷凍5min后置于-80℃環(huán)境中保存,送樣時(shí)需要添加干冰。
定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析(QuantitativeProteomics)是對(duì)一個(gè)基因組表達(dá)的全部蛋白質(zhì)或一個(gè)復(fù)雜混合體系內(nèi)所有蛋白質(zhì)進(jìn)行精確鑒定和定量。可用于篩選和尋找任何因素引起的樣本之間的差異表達(dá)蛋白,結(jié)合生物信息學(xué)揭示細(xì)胞生理病理等功能,同時(shí)也可對(duì)某些關(guān)鍵蛋白進(jìn)行定性和定量分析。目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)常見(jiàn)標(biāo)記(Label)和非標(biāo)記的(LabelFree)定量策略。定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)常見(jiàn)的幾類(lèi)主要包括:LabelFree定量蛋白組分析、SILAC與免疫共沉淀蛋白互作分析、MRM/PRM定量蛋白組學(xué)分析、SILAC/Dimethyl標(biāo)記定量蛋白組分析、SWATH定量蛋白組學(xué)、TMT/iTRAQ/multinotch定量蛋白組學(xué)分析。蛋白質(zhì)組學(xué)可系統(tǒng)研究農(nóng)作物在特定環(huán)境或某個(gè)發(fā)育階段的組織中蛋白質(zhì)的表達(dá)變化。
蛋白質(zhì)組學(xué)的介紹:蛋白組學(xué)主要以全蛋白組(組織、細(xì)胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對(duì)象,通過(guò)對(duì)蛋白組進(jìn)行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學(xué)功能、作用機(jī)制、疾病診斷的標(biāo)志物以及預(yù)測(cè)蛋白的上、下游變化關(guān)系。蛋白質(zhì)組學(xué)可以克服核酸水平預(yù)測(cè)的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。修飾蛋白組學(xué)(定量磷酸化修飾組學(xué)、定量糖基化修飾蛋白組學(xué)、定量乙?;揎椀鞍捉M學(xué)和定量泛素化修飾蛋白組學(xué))。蛋白質(zhì)組與基因組相對(duì)應(yīng),也是一個(gè)整體的概念。深圳TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)
蛋白質(zhì)組學(xué)將成為尋找疾病分子標(biāo)記和藥物靶標(biāo)有效的方法之一。貴州蛋白質(zhì)組學(xué)方法
蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動(dòng)規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),也能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。通過(guò)對(duì)正常個(gè)體及病理個(gè)體間的蛋白質(zhì)組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”,它們可成為新藥物設(shè)計(jì)的分子靶點(diǎn),或者也會(huì)為疾病的早期診斷提供分子標(biāo)志。確實(shí),那些世界范圍內(nèi)銷(xiāo)路比較好的藥物本身是蛋白質(zhì)或其作用靶點(diǎn)為某種蛋白質(zhì)分子。因此,蛋白質(zhì)組學(xué)研究不只是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類(lèi)健康事業(yè)帶來(lái)巨大的利益。蛋白質(zhì)組學(xué)的研究是生命科學(xué)進(jìn)入后基因時(shí)代的特征。貴州蛋白質(zhì)組學(xué)方法