蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時(shí)應(yīng)該注意些什么問題？覆蓋率：覆蓋率越高，檢測(cè)和鑒定含有修飾基團(tuán)的肽幾率就越大。修飾位點(diǎn)的占有率：被修飾的蛋白質(zhì)的百分比低，則檢測(cè)到修飾肽的機(jī)會(huì)會(huì)隨之減少。如果百分比較高（> 30％），則有助于識(shí)別修飾位點(diǎn)。棕櫚?；鞍仔揎椯|(zhì)譜鑒定方法：S-棕櫚?；闹饕δ苁谴龠M(jìn)蛋白質(zhì)與細(xì)胞膜的結(jié)合。蛋白質(zhì)可以由一個(gè)棕櫚?；M成，也可以與更多棕櫚基或與其他脂質(zhì)，如豆蔻?；Ｓ捎趯?duì)S-棕櫚酰化蛋白分析仍然具有挑戰(zhàn)性，由于S-棕櫚酰化修飾蛋白亞水平以及疏水性和潛在不穩(wěn)定的硫代質(zhì)鏈的S-脂?；摹Ｔ诘鞍追g后修飾方式的鑒定過程中，蛋白會(huì)首先被酶切成肽段，然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。貴州丙二酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析研究

蛋白質(zhì)翻譯后修飾自中而下分析策略：自中而下的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可用于組蛋白修飾的分析。樣品制備與普遍使用的自下而上的分析策略相同，直到得到純化的組蛋白。提取組蛋白后，用GluC進(jìn)行消化。然后用弱陽離子交換/親水相互作用色譜（WCX-HILIC）與配備電子轉(zhuǎn)移解離（ETD）的高分辨率質(zhì)譜聯(lián)機(jī)聯(lián)用，對(duì)樣品進(jìn)行理想的分離。譜識(shí)別可以用傳統(tǒng)的軟件進(jìn)行，但是由于估計(jì)適當(dāng)?shù)腻e(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率的問題，需要對(duì)結(jié)果進(jìn)行過濾。自上而下分析策略：自上而下的技術(shù)可以直接引入完整的蛋白質(zhì)并在串聯(lián)質(zhì)譜儀上對(duì)其進(jìn)行片段化，不需要蛋白質(zhì)水解消化。目前，有兩種完全分離蛋白質(zhì)的方法：離線和在線。前者用四維分離法，后者用WCX-HILIC。杭州氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)方法研究蛋白質(zhì)磷酸化對(duì)闡明蛋白質(zhì)功能具有重要意義。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾分析策略：早期蛋白質(zhì)組研究的大部分工作集中在細(xì)胞生長的不同時(shí)期，或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。然而，許多生命過程不只受蛋白質(zhì)的相對(duì)豐度控制，還受時(shí)空分布可逆的翻譯后修飾控制。因此，揭示翻譯后修飾的規(guī)律是了解蛋白質(zhì)復(fù)雜性和多樣的生物學(xué)功能的前提。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是一個(gè)復(fù)雜的過程。目前，發(fā)現(xiàn)的比較常見的修飾類型是糖基化、泛素化和磷酸化。樣品中翻譯后修飾蛋白質(zhì)含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣給相關(guān)研究帶來了很大的挑戰(zhàn)?；诜g后修飾蛋白的異質(zhì)性和相對(duì)豐度低的特點(diǎn)，主要利用凝膠、生物質(zhì)譜和生物信息學(xué)工具對(duì)其進(jìn)行研究。用于PTM分析的質(zhì)譜方法類似于用于“常規(guī)”蛋白質(zhì)鑒定的方法，包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白質(zhì)組學(xué)分析。

泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)的作用：泛素化、心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān)。因此，作為近年來生物化學(xué)研究的一個(gè)重大成果，它已然成為研究、開發(fā)新藥物的新靶點(diǎn)。技術(shù)原理是首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物，然后使用液相色譜對(duì)酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度，然后通過高質(zhì)量的泛素化修飾抗體和生物材料對(duì)修飾肽段進(jìn)行富集，之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析定量。技術(shù)優(yōu)勢(shì)：高特異性的修飾抗體；高分辨率、高靈敏度質(zhì)譜儀；鑒定通量高；可與代謝組學(xué)等進(jìn)行多組學(xué)聯(lián)合分析。常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括泛素化。

乙酰化修飾蛋白組學(xué)應(yīng)用方向有什么？1、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床診斷：生物標(biāo)志物，疾病機(jī)理機(jī)制，疾病分型，個(gè)性化治理等；2、生物醫(yī)藥：藥物作用機(jī)理，藥效評(píng)價(jià)，藥物開發(fā)等；3、微生物領(lǐng)域：致病機(jī)理，耐藥機(jī)制，病原體-宿主相互作用研究等；4、海洋水產(chǎn)：漁業(yè)資源，海水養(yǎng)殖，漁業(yè)環(huán)境與水產(chǎn)品安全等；5、生物能源、環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域：發(fā)酵過程優(yōu)化，生物燃料生產(chǎn)，環(huán)境危定風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究等；6、食品營養(yǎng)：食品儲(chǔ)藏及加工條件優(yōu)化，食品組分及品質(zhì)鑒定，功能性食品開發(fā)，食品安全監(jiān)檢測(cè)等。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)自中而下的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可用于組蛋白修飾的分析。浙江蛋白質(zhì)亞硝基化修飾組學(xué)主要技術(shù)

蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過程中起著關(guān)鍵作用。貴州丙二?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)分析研究

蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)技術(shù)怎么確定位點(diǎn)？蛋白質(zhì)經(jīng)過酶解后利用凝集素（lectin）富集N-糖基化肽段，然后用N-糖酰胺酶（PNGase）在H218O中切除連接在天冬酰胺殘基（Asn）上的糖鏈。該處理致使Asn分子量增加2.9890Da。之后用高精度LC-MS質(zhì)譜儀檢測(cè)脫糖后的肽段，并通過MASCOT軟件檢索數(shù)據(jù)庫，確認(rèn)脫糖后分子量與其理論分子量的變化以及糖基化修飾肽段的序列，從而確定該蛋白質(zhì)的N-糖基化位點(diǎn)。琥珀?；揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點(diǎn)：采用主流抗體親和富集方法，特異性高，富集效率好。貴州丙二酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析研究