circRNA轉(zhuǎn)錄組學生物學功能：circRNA主要存在于細胞質(zhì)或外泌體中，具有組織特異性、疾病特異性、時序特異性及高穩(wěn)定性等特征。近幾年，大量的研究表明circRNA在生物的生長發(fā)育、脅迫應(yīng)答、疾病發(fā)生和發(fā)展等方面密切相關(guān)，并預(yù)測其在疾病診斷標記物等方面的應(yīng)用前景，但其生物學功能在很大程度上仍然未知。目前認可度比較高的circRNA生物學功能。miRNAsponge。circRNA富含miRNA結(jié)合位點來充當miRNA海綿作用，阻止miRNA在3′非翻譯區(qū)與mRNA相互作用，進而間接調(diào)控miRNA下游靶基因的表達。RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學即對轉(zhuǎn)錄組進行測序和分析。深圳外泌體轉(zhuǎn)錄組學領(lǐng)域

單細胞 RNA-seq轉(zhuǎn)錄組學的工作流程：單細胞 RNA 測序等高通量單細胞轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)通常從針對不同瘤和組織類型（解離、分選和分離細胞等）量身定制的實驗工作流程開始，然后產(chǎn)生可以比對的序列，量化、質(zhì)量控制 (QC) 過濾和以不同方式標準化，以實現(xiàn)許多下游計算分析，例如聚類分析以識別轉(zhuǎn)錄不同的細胞類型和亞群，等位基因分析以識別單核苷酸變異（SNV，用星號表示）或拷貝數(shù)變體（CNV）、軌跡分析、剪接檢測或瘤的微環(huán)境（TME）相互作用的推斷中。廣州RNA轉(zhuǎn)錄組學轉(zhuǎn)錄組學可以在單核苷酸水平對任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動進行檢測。

全轉(zhuǎn)錄組測序為什么需要構(gòu)建兩個文庫？全轉(zhuǎn)錄組測序需要構(gòu)建2個測序文庫，一個小RNA文庫和一個去除核糖體RNA的鏈特異性文庫，然后分別上機測序。小RNA長度較短，一般小于50nt，采用測序策略為50SE。其他三類RNA序列一般大于200，通常在1000以上，可達幾萬，通過片段化構(gòu)建150PE測序文庫。然后小RNA文庫可以獲得miRNA序列信息，去核糖體的鏈特異性文庫可以獲得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。轉(zhuǎn)錄組學即特定細胞在某一功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和，包括mRNA和非編碼RNA。

全長轉(zhuǎn)錄組測序的優(yōu)勢：1、全方面鑒定可變剪切；2、發(fā)現(xiàn)更多新基因；3、有效改善基因組注釋；4、鑒定更多的LncRNA；5、準確定位融合基因。研究思路：由于全長轉(zhuǎn)錄組測序是基于第三代測序技術(shù)，因而其成本依然較高，如果全部研究項目均基于全長轉(zhuǎn)錄組，通常來說很難承擔，因此，全長轉(zhuǎn)錄組測序一般與普通轉(zhuǎn)錄組測序相結(jié)合。宏轉(zhuǎn)錄組學是什么？宏轉(zhuǎn)錄組學也稱為環(huán)境轉(zhuǎn)錄組學，指從整體水平上研究某一特定環(huán)境、特定時期菌群群體全部基因轉(zhuǎn)錄情況以及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律，以揭示微生物在不同環(huán)境壓力下的適應(yīng)機制，探索環(huán)境與微生物之間的相互作用機理。轉(zhuǎn)錄組學狹義上指所有mRNA的組合。

單細胞轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)：單細胞轉(zhuǎn)錄組目前主要有三種方法：SMART擴增技術(shù)、10×genomics技術(shù)及Andeplete技術(shù)。SMART擴增技術(shù)比較關(guān)鍵的技術(shù)，就是設(shè)計了2個特殊的引物。再配合用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶進行逆轉(zhuǎn)錄。特殊引物1由中間PolyT序列加上一段通用序列及3’末端兩個簡并堿基構(gòu)成，但在PolyT的3’端倒數(shù)第二個堿基是A、C、G而非T的簡并堿基，而倒數(shù)第1個為簡并堿基，這樣做的好處是讓它正好結(jié)合在mRNA的3’端連到Poly(A)尾巴的這個連接處，而不會結(jié)合到mRNA的別的地方。這樣就保證了逆轉(zhuǎn)錄的起始位置正好是mRNA的3’端的序列終止位置。轉(zhuǎn)錄組學靈敏度高，可以檢測細胞中少至幾個拷貝的稀有轉(zhuǎn)錄本。廣州RNA轉(zhuǎn)錄組學

宏轉(zhuǎn)錄組學以生態(tài)環(huán)境中的全部RNA為研究對象，避開了微生物分離培養(yǎng)困難的問題。深圳外泌體轉(zhuǎn)錄組學領(lǐng)域

circRNA轉(zhuǎn)錄組學：是一類具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子，沒有5′帽子結(jié)構(gòu)和3′poly（A）結(jié)構(gòu)，主要位于細胞質(zhì)或儲存于外泌體中，不受RNA外切酶影響，表達更穩(wěn)定且不易降解，已被證明普遍存在于多種真核生物體內(nèi)[1]。大多數(shù)circRNA是由外顯子環(huán)化而成，也有部分circRNA是由內(nèi)含子環(huán)化而成的套索結(jié)構(gòu)。同時由于circRNA含有大量的miRNA應(yīng)答原件（MREs），能與AGO蛋白形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體（RISC）的催化關(guān)鍵，然后導(dǎo)致circRNA降解。根據(jù)來源，circRNA可大致分為四類：全外顯子型的circRNA，內(nèi)含子和外顯子組合的EIcircRNA，內(nèi)含子組成的套索型ciRNA，由病毒RNA基因組、tRNA、rRNA、snRNA等環(huán)化產(chǎn)生的circRNA。深圳外泌體轉(zhuǎn)錄組學領(lǐng)域