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濟(jì)南IncRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-04-13

全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序:由于在轉(zhuǎn)錄組研究中通常所使用的第二代測(cè)序技術(shù)具有測(cè)序讀長(zhǎng)的限制,因此在進(jìn)行測(cè)序之前,需要先將樣本的mRNA打碎為小片段,之后再通過(guò)與參考基因組比對(duì)或拼接的方式識(shí)別轉(zhuǎn)錄本,這就會(huì)造成一定的錯(cuò)誤比例,同時(shí)在也很難區(qū)分單堿基水平的差異。全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的優(yōu)勢(shì):1、全方面鑒定可變剪切;2、發(fā)現(xiàn)更多新基因;3、有效改善基因組注釋;4、鑒定更多的LncRNA;5、準(zhǔn)確定位融合基因。研究思路:由于全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序是基于第三代測(cè)序技術(shù),因而其成本依然較高,如果全部研究項(xiàng)目均基于全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組,通常來(lái)說(shuō)很難承擔(dān),因此,全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序一般與普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序相結(jié)合。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于表達(dá)差異的研究。濟(jì)南IncRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究

轉(zhuǎn)錄組學(xué)為什么原核物種只能做有參轉(zhuǎn)錄組分析?由于原核生物的基因組中存在大量基因重疊區(qū)域、操縱子及多順?lè)醋樱绻凑諢o(wú)參轉(zhuǎn)錄組分析策略進(jìn)行組裝的話,難度較大,組裝結(jié)果存在較大風(fēng)險(xiǎn)。轉(zhuǎn)錄組學(xué)差異基因數(shù)目多少比較合理?不同的處理,不同的研究目標(biāo),差異基因的數(shù)目是不同的,從幾十個(gè)到幾千個(gè)都有可能。但是如果差異基因數(shù)目是個(gè)位數(shù)或者上萬(wàn),那么就需要和分析人員溝通一下,查一查是否有問(wèn)題。轉(zhuǎn)錄組學(xué)差異基因太多,注釋信息太雜亂,怎么挑選目標(biāo)基因?對(duì)不同的差異組合進(jìn)行維恩圖分析,挑選共有或者特有的差異基因作為后續(xù)的研究對(duì)象;根據(jù)前人的文獻(xiàn)報(bào)道,挑選相關(guān)差異基因,不要局限在自己研究的物種上。江蘇SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜分析轉(zhuǎn)錄組學(xué)狹義上指所有mRNA的組合。

轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序比其他研究方法有哪些優(yōu)勢(shì)?(1)可以直接測(cè)定每個(gè)轉(zhuǎn)錄本片段序列、單核苷酸分辨率的準(zhǔn)確度,同時(shí)不存在傳統(tǒng)微陣列雜交的熒光模擬信號(hào)帶來(lái)的交叉反應(yīng)和背景噪音問(wèn)題;(2)靈敏度高,可以檢測(cè)細(xì)胞中少至幾個(gè)拷貝的稀有轉(zhuǎn)錄本;(3)可以對(duì)任意物種進(jìn)行全基因組分析,無(wú)需預(yù)先設(shè)計(jì)特異性探針,因此無(wú)需了解物種基因信息,能夠直接對(duì)任何物種進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析,同時(shí)能夠檢測(cè)未知基因,發(fā)現(xiàn)新的轉(zhuǎn)錄本,并準(zhǔn)確地識(shí)別可變剪切位點(diǎn)及cSNP,UTR區(qū)域。

RNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué):也被稱為整個(gè)轉(zhuǎn)錄組鳥(niǎo)測(cè)序(wts)。RNA-seq包含三個(gè)步驟:測(cè)序文庫(kù)的建立,在特定平臺(tái)中測(cè)序和生物信息學(xué)分析。RNA-Seq是一種基于NGS技術(shù)的新的轉(zhuǎn)錄分析方法。采用NGS技術(shù)對(duì)從感興趣的RNA樣本序列反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA進(jìn)行測(cè)序。簡(jiǎn)而言之,就是對(duì)剪切變體、轉(zhuǎn)錄后RNA編輯、內(nèi)含子表達(dá)水平和特定等位基因的表達(dá)情況進(jìn)行定性和定量分析。RNA-Seq原理:在對(duì)基因組測(cè)序和分析研究的同時(shí),復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄組研究也普遍發(fā)展起來(lái)。利用高通量測(cè)序技術(shù)平臺(tái)分析轉(zhuǎn)錄組的結(jié)構(gòu)和表達(dá)水平情況,更能挖掘未知轉(zhuǎn)錄本和稀有轉(zhuǎn)錄本信息,精確地識(shí)別RNA的選擇性剪切以及編碼序列的單核苷酸多態(tài)性(SPN),進(jìn)一步解析復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄組信息。轉(zhuǎn)錄組學(xué)廣義上指在某一生理?xiàng)l件下,細(xì)胞內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄組產(chǎn)物的組合。

轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)路線及研究意義:轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的研究對(duì)象為特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。相對(duì)于傳統(tǒng)的芯片雜交平臺(tái),轉(zhuǎn)錄組測(cè)序無(wú)需預(yù)先針對(duì)已知序列設(shè)計(jì)探針,即可對(duì)任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動(dòng)進(jìn)行檢測(cè),提供更準(zhǔn)確的數(shù)字化信號(hào),更高的檢測(cè)通量以及更普遍的檢測(cè)范圍,是目前深入研究轉(zhuǎn)錄組復(fù)雜性的強(qiáng)大工具?;诟咄繙y(cè)序平臺(tái)的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)能夠全方面獲得物種特定組織的轉(zhuǎn)錄本信息,從而進(jìn)行基因表達(dá)水平研究、新轉(zhuǎn)錄本發(fā)現(xiàn)研究、轉(zhuǎn)錄本結(jié)構(gòu)變異研究等。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可以在單核苷酸水平對(duì)任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動(dòng)進(jìn)行檢測(cè)。濟(jì)南IncRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究

宏轉(zhuǎn)錄組是特定時(shí)期、環(huán)境樣本、組織樣本中所有的微生物的RNA(轉(zhuǎn)錄本)的匯合。濟(jì)南IncRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究

轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序比其他研究方法有哪些優(yōu)勢(shì)?轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序具有以下優(yōu)勢(shì):(1)可以直接測(cè)定每個(gè)轉(zhuǎn)錄本片段序列、單核苷酸分辨率的準(zhǔn)確度,同時(shí)不存在傳統(tǒng)微陣列雜交的熒光模擬信號(hào)帶來(lái)的交叉反應(yīng)和背景噪音問(wèn)題;(2)靈敏度高,可以檢測(cè)細(xì)胞中少至幾個(gè)拷貝的稀有轉(zhuǎn)錄本;(3)可以對(duì)任意物種進(jìn)行全基因組分析,無(wú)需預(yù)先設(shè)計(jì)特異性探針,因此無(wú)需了解物種基因信息,能夠直接對(duì)任何物種進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析,同時(shí)能夠檢測(cè)未知基因,發(fā)現(xiàn)新的轉(zhuǎn)錄本,并準(zhǔn)確地識(shí)別可變剪切位點(diǎn)及cSNP,UTR區(qū)域。(4)檢測(cè)范圍廣,高于6個(gè)數(shù)量級(jí)的動(dòng)態(tài)檢測(cè)范圍,能夠同時(shí)鑒定和定量稀有轉(zhuǎn)錄本和正常轉(zhuǎn)錄本。濟(jì)南IncRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究