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浙江蛋白質(zhì)定量組學(xué)領(lǐng)域

來源: 發(fā)布時間:2022-04-14

定量蛋白質(zhì)組學(xué)的方法學(xué)背景意義:從生命活動的直接執(zhí)行者——蛋白質(zhì)的角度研究生命現(xiàn)象和規(guī)律(特別是疾病防治和病理研究)已成為研究生命科學(xué)的主要手段。而這些研究往往離不開對細(xì)胞、組織中含有蛋白質(zhì)種類和表達(dá)量的研究。對處不同時期、不同條件下蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化的研究,識別功能模塊和路徑,監(jiān)控疾病的生物標(biāo)志物,這些研究都需要對蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量。生物質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)和不斷成熟為蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析提供了更可靠、動態(tài)范圍更廣的研究手段。近兩年來蛋白質(zhì)組研究技術(shù)已被應(yīng)用到各種生命科學(xué)領(lǐng)域。浙江蛋白質(zhì)定量組學(xué)領(lǐng)域

定量蛋白質(zhì)組學(xué)的方法學(xué)背景和意義:從生命活動的直接執(zhí)行者——蛋白質(zhì)的角度研究生命現(xiàn)象和規(guī)律(特別是疾病防治和病理研究)已成為研究生命科學(xué)的主要手段。而這些研究往往離不開對細(xì)胞、組織中含有蛋白質(zhì)種類和表達(dá)量的研究。對處不同時期、不同條件下蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化的研究,識別功能模塊和路徑,監(jiān)控疾病的生物標(biāo)志物,這些研究都需要對蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量。生物質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)和不斷成熟為蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析提供了更可靠、動態(tài)范圍更廣的研究手段。基于質(zhì)譜技術(shù),科學(xué)家們不斷開發(fā)出新的定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法,來了解細(xì)胞、組織或生物體的整體蛋白質(zhì)動力學(xué)。浙江蛋白質(zhì)定量組學(xué)領(lǐng)域蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)有飛行時間質(zhì)譜。

蛋白質(zhì)組(Proteome)的概念指由一個基因組(genome),或一個細(xì)胞、組織表達(dá)的所有蛋白質(zhì)(Protein).蛋白質(zhì)組的概念與基因組的概念有許多差別,它隨著組織、甚至環(huán)境狀態(tài)的不同而改變.在轉(zhuǎn)錄時,一個基因可以多種mRNA形式剪接,并且,同一蛋白可能以許多形式進(jìn)行翻譯后的修飾.故一個蛋白質(zhì)組不是一個基因組的直接產(chǎn)物,蛋白質(zhì)組中蛋白質(zhì)的數(shù)目有時可以超過基因組的數(shù)目.蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)處于早期“發(fā)育”狀態(tài),這個領(lǐng)域的**否認(rèn)它是單純的方法學(xué),就像基因組學(xué)一樣,不是一個封閉的、概念化的穩(wěn)定的知識體系,而是一個領(lǐng)域.蛋白質(zhì)組學(xué)集中于動態(tài)描述基因調(diào)節(jié),對基因表達(dá)的蛋白質(zhì)水平進(jìn)行定量的測定,鑒定疾病、藥物對生命過程的影響,以及解釋基因表達(dá)調(diào)控的機(jī)制.作為一門科學(xué)。

蛋白組學(xué)技術(shù):蛋白質(zhì)組學(xué)研究的首要任務(wù)是建立獲取和分析蛋白質(zhì)的常規(guī)、可靠、有效的技術(shù)。為達(dá)到這一要求,就需要樣品準(zhǔn)備、數(shù)據(jù)獲取標(biāo)準(zhǔn)化及自動化,也就是要有可重復(fù)的高通量的技術(shù)。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)手段在不斷完善,其工作流程,包括蛋白質(zhì)樣本的制備、分離、定量及鑒定。由雙向凝膠電泳、質(zhì)譜技術(shù)、酵母雙雜交系統(tǒng)、蛋白質(zhì)微陣列技術(shù)、能進(jìn)行大規(guī)模數(shù)據(jù)處理的計算機(jī)系統(tǒng)和軟件、軟電離技術(shù)及生物信息學(xué)技術(shù)構(gòu)成了蛋白質(zhì)組學(xué)研究的主要技術(shù)體系。其中蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)中的質(zhì)譜技術(shù)是現(xiàn)在比較常用的一種蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)。蛋白質(zhì)組學(xué)包括翻譯后的修飾。

Labelfree非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)特點:(1)不需要標(biāo)記處理,操作簡單,成本低、實驗周期短;(2)每個樣品單獨處理、上機(jī);(3)可以做任意樣本的總蛋白質(zhì)差異定量,樣品類型不受限制;(4)對單個樣品的蛋白總量要求相對較低,對于組織本身蛋白量不高,可以選擇Label-Free,適用于一些難收集樣品;(5)定性沒有問題,但是定量的準(zhǔn)確性較標(biāo)記定量稍差,會受到質(zhì)譜穩(wěn)定性等因素的影響;(6)適合于大樣本量的定量比較(大于24個樣本)。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)是研究細(xì)胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學(xué)。生物質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中比較重要的鑒定技術(shù)。四川Label free非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析

蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)療和健康方面有什么應(yīng)用?浙江蛋白質(zhì)定量組學(xué)領(lǐng)域

我們究竟怎么研究蛋白質(zhì)組學(xué)呢?目前高通量檢測蛋白質(zhì)的方法中,還是首推基于質(zhì)譜的方法,納流液相可以將復(fù)雜樣品中的肽段高效地分離,然后依次進(jìn)入質(zhì)譜,對每個被離子化的肽段及其碎裂后碎片的荷質(zhì)比進(jìn)行分析,從而得到該肽段的序列信息,然后根據(jù)對應(yīng)的色譜峰面積或者報告離子強(qiáng)度等信息,我們又可以得到該肽段的定量信息。蛋白組學(xué)研究怎么做?當(dāng)下蛋白組學(xué)研究中應(yīng)用比較普遍的技術(shù)是同位素標(biāo)記定量(iTRAQ/TMT技術(shù))。iTRAQ/TMT技術(shù)是利用DDA掃描模式,其掃描的方式是將一級質(zhì)譜信號比較強(qiáng)的Top20的多肽進(jìn)行二級打碎,然后進(jìn)入二級質(zhì)譜進(jìn)行檢測。其優(yōu)勢是二級譜圖采集的肽段信息都來源于同一條多肽,有利于后續(xù)的定性分析。浙江蛋白質(zhì)定量組學(xué)領(lǐng)域