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翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個細胞過程的重要方式,幾乎在每個細胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學計量和豐度存在,這限制了在分析全細胞裂解液時對其的檢測。蛋白質(zhì)是各種細胞功能比較重要的執(zhí)行者,其功能正常與否決定著生命活動能否有序、高效的進行,而其中翻譯后修飾起著至關(guān)重要的作用。翻譯后修飾改變了蛋白質(zhì)中不同氨基酸殘基上的生物化學官能團,進而改變其化學性質(zhì)或結(jié)構(gòu),使得蛋白質(zhì)具有更為復雜的結(jié)構(gòu)和更為完善的功能,實現(xiàn)更為精細的調(diào)節(jié)。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾過程極其復雜,已知的翻譯后修飾種類有20多種。但其中較為常見的主要是磷酸化、泛素化、SUMO化、酰(含乙酰)化、甲基化以及糖基化。通過蛋白質(zhì)翻譯后修飾也進一步增加了細胞通路機制和生命活動的多樣性和復雜性。深圳蛋白質(zhì)丙二酰化修飾組學分析研究
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學:翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對翻譯后的蛋白質(zhì)進行共價加工的過程。它通過在一個或多個氨基酸殘基加上修飾基團,可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學性質(zhì),進而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)、亞細胞定位、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動研究中具有重大意義,異常的翻譯后修飾會導致多種疾病的發(fā)生。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化,因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對翻譯后修飾方式進行鑒定和定量。北京泛素化修飾蛋白質(zhì)組學一般流程磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學是原核生物和真核生物中比較重要的調(diào)控修飾形式。
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學介紹: 蛋白質(zhì)泛素化修飾(Ubiquitylation)是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,是指一個或多個泛素分子(Ubiquitin,由76個氨基酸組成的多肽)在一系列特殊的酶作用下,將細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)分類,從中選出靶蛋白分子,并對靶蛋白進行特異性修飾的過程。泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾,泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導了真核生物80%~85%的蛋白質(zhì)降解。除參與蛋白質(zhì)降解之外,泛素化修飾還參與了細胞周期、增殖、細胞凋亡、分化、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、基因表達、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號傳遞、損傷修復、炎癥免疫等幾乎一切生命活動的調(diào)控。
蛋白質(zhì)糖基化修飾組學技術(shù)怎么確定位點?蛋白質(zhì)經(jīng)過酶解后利用凝集素(lectin)富集N-糖基化肽段,然后用N-糖酰胺酶(PNGase)在H218O中切除連接在天冬酰胺殘基(Asn)上的糖鏈。該處理致使Asn分子量增加2.9890Da。之后用高精度LC-MS質(zhì)譜儀檢測脫糖后的肽段,并通過MASCOT軟件檢索數(shù)據(jù)庫,確認脫糖后分子量與其理論分子量的變化以及糖基化修飾肽段的序列,從而確定該蛋白質(zhì)的N-糖基化位點。琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點:采用主流抗體親和富集方法,特異性高,富集效率好。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學是什么?
泛素化修飾PRM定量驗證:原理: 泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,調(diào)控包括細胞周期、細胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復以及免疫應答等在內(nèi)的多種細胞活動。首先對泛素化的蛋白進行胰酶消化,在賴氨酸的修飾位點上會產(chǎn)生兩個甘氨酸的殘基(K-GG),利用對泛素化賴氨酸(K-GG)具有高親和力的基序抗體,特異性富集復雜樣本中的泛素化肽段,結(jié)合LC-MS/MS蛋白質(zhì)定量方法,實現(xiàn)大規(guī)模泛素化蛋白質(zhì)定性定量分析。各種蛋白質(zhì)翻譯后修飾在信號通路和網(wǎng)絡中發(fā)揮著重要的作用。南京蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學質(zhì)譜鑒定
蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (PTMs) 進一步促進了從基因組水平到蛋白質(zhì)組復雜性的增加。深圳蛋白質(zhì)丙二?;揎椊M學分析研究
蛋白質(zhì)翻譯后修飾分析策略:早期蛋白質(zhì)組研究的大部分工作集中在細胞生長的不同時期,或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質(zhì)表達水平的變化。然而,許多生命過程不僅受蛋白質(zhì)的相對豐度控制,還受時空分布可逆的翻譯后修飾控制。因此,揭示翻譯后修飾的規(guī)律是了解蛋白質(zhì)復雜性和多樣的生物學功能的前提。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是一個復雜的過程。目前,發(fā)現(xiàn)的比較常見的修飾類型是糖基化、泛素化和磷酸化。樣品中翻譯后修飾蛋白質(zhì)含量低、動態(tài)范圍廣給相關(guān)研究帶來了很大的挑戰(zhàn)。基于翻譯后修飾蛋白的異質(zhì)性和相對豐度低的特點,主要利用凝膠、生物質(zhì)譜和生物信息學工具對其進行研究。用于PTM分析的質(zhì)譜方法類似于用于“常規(guī)”蛋白質(zhì)鑒定的方法,包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白質(zhì)組學分析。深圳蛋白質(zhì)丙二酰化修飾組學分析研究