單細胞轉錄組關鍵步驟：單細胞的分離和捕獲：溫和分離，稀有細胞。轉錄本的捕獲和擴增：RNA測序需要0.1-1.0ug total RNA，捕獲效率10%（5-**NA測序需要1ng DNA，極限稀釋加移液分離單細胞；顯微操作分選單細胞；流式分選帶有表面Marker的單細胞；激光切割實體組織；微流控技術；磁珠捕獲，主要用于CTC。單細胞轉錄組學基本概念：普通轉錄組的思路也可以應用到單細胞轉錄組。普通轉錄組相當于把一群細胞混合到一起去提取RNA，獲得的是每個細胞中RNA表達量的平均值。單細胞是把每個細胞單獨分出來去提取RNA，然后建庫測序，獲得是是單個細胞的表達值。在每個細胞里面基因的表達具有隨機性，且存在異質性?；诟咄繙y序平臺的轉錄組學測序技術能夠全方面獲得物種特定組織的轉錄本信息。河南高通量轉錄組學定性分析

轉錄組學應用領域：農林領域：生長發(fā)育機制，抗逆脅迫機制，育種，物種保護研究等；畜牧業(yè)：生長發(fā)育機制，致病機理研究，肉類及乳制品品質研究等；海洋水產：生長發(fā)育機制，漁業(yè)資源，漁業(yè)環(huán)境與水產品安全等；微生物：致病機理，耐藥機制，病原體-宿主相互作用研究等；生物醫(yī)藥：生物標志物，疾病機理機制，疾病分型，藥物開發(fā)，個性化醫(yī)治等；環(huán)境科學：發(fā)酵過程優(yōu)化，生物燃料生產，環(huán)境危害風險評估研究等；食品科學：食品儲藏及加工條件優(yōu)化，食品組分及品質鑒定，功能性食品開發(fā)，食品安全監(jiān)檢測等。濟南宏轉錄學組轉錄組學有高通量、更精確的數(shù)字信號。

轉錄組學測序流程：1、樣品RNA準備。2、測序文庫構建。3、DNA成簇(Cluster)擴增。4、高通量測序(Illumina)。5、數(shù)據(jù)分析。轉錄組的分析大致有以下幾種情況：1、同一物種在發(fā)育過程中的各時間節(jié)點的基因表達特點及存在的差異；2、不同品系之間存在的差異表達基因；3、不同的外界條件處理，如細菌、病毒、光照、紫外、干旱、高溫、高鹽脅迫，對基因表達的影響；4、同一個體，不同組織之間的基因表達差異。簡而言之，轉錄組學是從RNA水平研究基因表達的情況。

轉錄組學測序比其他研究方法有哪些優(yōu)勢?轉錄組學測序具有以下優(yōu)勢：（1）可以直接測定每個轉錄本片段序列、單核苷酸分辨率的準確度，同時不存在傳統(tǒng)微陣列雜交的熒光模擬信號帶來的交叉反應和背景噪音問題；（2）靈敏度高，可以檢測細胞中少至幾個拷貝的稀有轉錄本；（3）可以對任意物種進行全基因組分析，無需預先設計特異性探針，因此無需了解物種基因信息，能夠直接對任何物種進行轉錄組分析，同時能夠檢測未知基因，發(fā)現(xiàn)新的轉錄本，并準確地識別可變剪切位點及cSNP，UTR區(qū)域。（4）檢測范圍廣，高于6個數(shù)量級的動態(tài)檢測范圍，能夠同時鑒定和定量稀有轉錄本和正常轉錄本。轉錄學組測序可對任意物種的整體轉錄活動進行檢測。

circRNA轉錄組學：是一類具有閉合環(huán)狀結構的非編碼RNA分子，沒有5′帽子結構和3′poly（A）結構，主要位于細胞質或儲存于外泌體中，不受RNA外切酶影響，表達更穩(wěn)定且不易降解，已被證明普遍存在于多種真核生物體內[1]。大多數(shù)circRNA是由外顯子環(huán)化而成，也有部分circRNA是由內含子環(huán)化而成的套索結構。同時由于circRNA含有大量的miRNA應答原件（MREs），能與AGO蛋白形成RNA誘導沉默復合體（RISC）的催化關鍵，然后導致circRNA降解。根據(jù)來源，circRNA可大致分為四類：全外顯子型的circRNA，內含子和外顯子組合的EIcircRNA，內含子組成的套索型ciRNA，由病毒RNA基因組、tRNA、rRNA、snRNA等環(huán)化產生的circRNA。轉錄組學可應用于疾病標志物篩查、疾病的診斷和分型、疾病復發(fā)診斷。河南高通量轉錄組學定性分析

轉錄組學無需了解物種基因信息，能夠直接對任何物種進行轉錄組分析。河南高通量轉錄組學定性分析

單細胞轉錄組學技術：Anydeplete技術首先通過隨機引物進行一鏈合成，一鏈合成引入核苷酸類似物，用于酶切打斷，二鏈合成同樣引入核苷酸類似物用于保證鏈特異性。然后兩端加上接頭，接頭一條鏈也帶有核苷酸類似物，用于酶切降解。當形成單鏈文庫后，設計特異性引物與rRNA形成文庫結合，一輪退火延伸，rRNA文庫形成雙鏈結構。Reverseadaptor上帶有特異的酶切位點，當形成雙鏈結構酶切位點被識別，切去接頭，這樣rRNA形成的文庫不帶有完整的接頭，而其他文庫帶有完整接頭，通過PCR擴增富積既能得到想要的信息，包含mRNA及LncRNA信息。同樣Anydeplete技術與10×genomics技術一樣，包含分子標簽，可分析duplication及PCR產生突變位點。河南高通量轉錄組學定性分析