代謝組學(xué)樣本收集注意事項(xiàng):(1)血液離開(kāi)動(dòng)物或人體后,應(yīng)盡快開(kāi)展血清、血漿的分離,并嚴(yán)格按照操作說(shuō)明進(jìn)行。(2)采集到的血清為黃色透明液體、血漿為淡黃色半透明液體,如果發(fā)現(xiàn)樣本中是紅色,說(shuō)明在已經(jīng)發(fā)生了了溶血現(xiàn)象,樣本需重新制備。(3)血清與血漿的主要區(qū)別在于血清中不含纖維蛋白原。血清和血漿中脂質(zhì),氨基酸,核苷酸等代謝譜存在差別。糞便樣本收集:1.人糞便:(1)用無(wú)菌勺挖取新鮮的,排泄中后部的內(nèi)側(cè)糞便(避免尿液及其他壁對(duì)樣本污染);(2)分裝樣本20mg/管。(3)迅速放入液氮中冷凍處理至少15min.(4)-80℃冰箱凍存。寄樣需足量干冰。代謝組學(xué) (metabolomics)的出現(xiàn)是生命科學(xué)研究的必然。湖北LC-MS/MS非靶向代謝組學(xué)定性分析
代謝組學(xué)細(xì)胞樣本收集:懸浮細(xì)胞:1)連同培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到1.5 mL的進(jìn)口離心管中。2)低速離心5 min(低于3000 rpm),使細(xì)胞沉淀于離心管的底部(1*107個(gè)細(xì)胞為宜)。3)倒掉培養(yǎng)基(盡量倒干凈),用預(yù)冷的PBS反復(fù)沖洗2 ~ 3次,低速離心5 min,棄上清。4)標(biāo)記離心管,將離心管的尖的一端插入液氮中,淬滅細(xì)胞沉淀1 min,-80 ℃凍存,干冰寄送。注意事項(xiàng):1. 培養(yǎng)基傾倒時(shí)盡量倒干凈,可使用濾紙將殘留培養(yǎng)液吸凈;2. 甲醇/水請(qǐng)使用色譜純及以上規(guī)格;3. 液氮淬滅細(xì)胞時(shí),請(qǐng)小心避免離心管破碎導(dǎo)致樣本受損;4. 建議細(xì)胞樣本在進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)多準(zhǔn)備樣本,以備后續(xù)使用。上海LC-MS/MS非靶向脂質(zhì)組學(xué)分析研究代謝組學(xué)有哪些特點(diǎn)?
代謝組學(xué)概念:代謝組學(xué)(metabonomics/metabolomics)是效仿基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的研究思想,對(duì)生物體內(nèi)所有代謝物進(jìn)行定量分析,并尋找代謝物與生理病理變化的相對(duì)關(guān)系的研究方式,是系統(tǒng)生物學(xué)的組成部分。其研究對(duì)象大都是相對(duì)分子質(zhì)量1000以內(nèi)的小分子物質(zhì)。先進(jìn)分析檢測(cè)技術(shù)結(jié)合模式識(shí)別和**系統(tǒng)等計(jì)算分析方法是代謝組學(xué)研究的基本方法。代謝組學(xué)是繼基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)之后新近發(fā)展起來(lái)的一門學(xué)科,是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分。
LC-MS非靶向代謝組學(xué):LCMS非靶向是通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用(LC–MS)方法檢測(cè)生物體受擾動(dòng)或刺激前后大量代謝產(chǎn)物的動(dòng)態(tài)變化,從中找出表達(dá)差異的代謝物,進(jìn)而闡明生物體代謝相關(guān)過(guò)程的代謝組學(xué)技術(shù)。LCMS非靶向代謝組學(xué)適用于分析難揮發(fā)或熱穩(wěn)定性差的代謝產(chǎn)物,具有高通量、高分辨率、高靈敏度的特點(diǎn)。超高壓液相色譜或超高效液相色譜(UPLC)通過(guò)采用更小粒徑的色譜填料配合更高的壓力,實(shí)現(xiàn)了更好的分離,具體包括更高的分離能力、更快的分離速度以及更好的靈敏度;串聯(lián)質(zhì)譜儀在MS掃描模式下,可實(shí)現(xiàn)高低碰撞能量快速切換,同時(shí)采集代謝物的一二級(jí)質(zhì)譜信息,結(jié)合代謝組學(xué)數(shù)據(jù)處理軟件對(duì)質(zhì)譜信息的解析,在單次分析中可檢測(cè)和鑒定幾百至幾千種代謝物。代謝組學(xué)主要研究的是產(chǎn)物的小分子代謝物(MW<1000)。
代謝組學(xué)樣本收集指南:1.血漿樣本收集:(1)從合適的靜脈采集血液(典型10mL)到標(biāo)記的肝素鋰血漿收集管中(肝素鋰用作抗凝劑)。(2)立即于4 °C離心(3000g)20min,上清液即為血漿。(3)離心完畢,取出血漿收集管,取上清液(血漿),分等份(0.5mL或0.1mL),轉(zhuǎn)移到凍存管中(冰上),旋蓋。(4)保存于-80℃冰箱。寄樣需足量干冰。2.血清樣本收集:(1)從合適的靜脈采集血液(典型10mL)到血清收集管中。(2)將血清收集管冰水浴(4℃)凝集至少1h(2h以內(nèi)),記錄凝集時(shí)間。(3)將血清收集管放到冷凍離心機(jī)中低溫(4℃)離心15min(2500 g)。(4)離心完畢,取出血清收集管,取上清液,分等份(0.5mL或0.1mL),轉(zhuǎn)移到凍存管中(冰上),旋蓋。(5)保存于-80℃冰箱。寄樣需足量干冰。代謝組學(xué)的研究方法與蛋白質(zhì)組學(xué)的方法類似,通常有兩種方法。深圳LC-MS/MS非靶向脂質(zhì)組學(xué)分析方法
代謝組學(xué)的研究方法與蛋白質(zhì)組學(xué)的方法類似。湖北LC-MS/MS非靶向代謝組學(xué)定性分析
GC-MS非靶向與代謝組學(xué)的關(guān)系?代謝組學(xué)是運(yùn)用多種技術(shù)手段,研究生物體系中小分子代謝物(包括氨基酸、糖和磷酸糖、生物胺和脂質(zhì)等)的種類、數(shù)量及變化規(guī)律的科學(xué),是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分。其中GC-MS非靶向代謝組學(xué)是對(duì)生物體內(nèi)源性代謝物進(jìn)行系統(tǒng)全方面的分析平臺(tái)。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)因?yàn)槠漭^為成熟、分辨率高、靈敏度高、重現(xiàn)性好,擁有大量標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫(kù)的特點(diǎn),被大量地運(yùn)用在植物、動(dòng)物、微生物的研究中。隨著信息科學(xué)和分析技術(shù)的發(fā)展,運(yùn)用GC-MS非靶向代謝組學(xué)研究疾病機(jī)制和發(fā)現(xiàn)藥物靶點(diǎn)的方法日趨成熟,其重要性也日益凸顯。GC-MS非靶向代謝組學(xué)也在代謝性疾病等藥物靶點(diǎn)、疾病機(jī)制研究和藥物靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)中提供重要參考和啟示。湖北LC-MS/MS非靶向代謝組學(xué)定性分析