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哈爾濱動物靶向代謝組學分析

來源: 發(fā)布時間:2022-04-28

代謝組學的特點:1.相對于其他組學研究,檢測技術(shù)相對簡單(液-質(zhì)聯(lián)用,氣-質(zhì)聯(lián)用及核磁)2.代謝組學是體內(nèi)外多種綜合因素的結(jié)果。代謝組學的應(yīng)用:生物標志物尋找,療效的監(jiān)控,疾病分型,中藥研究中的治病機理,毒副作用評價。代謝組學研究思路:1.?通過差異分析得到差異代謝物后,對大樣本數(shù)據(jù)進行KM,ROC,Cox等分析,發(fā)現(xiàn)臨床生存及疾病預測價值。2.?差異代謝物進行功能研究,抗代謝物或者是添加外源代謝物,細胞及動物實驗驗證該代謝物對表型的重要性。3.?多組學研究,根據(jù)代謝物找到上游調(diào)控蛋白,對上游蛋白進行研究。代謝組學的概念來源于代謝組,代謝組是指某一生物或細胞在一特定生理時期內(nèi)所有的低分子量代謝產(chǎn)物。哈爾濱動物靶向代謝組學分析

非靶向代謝組學:非靶向代謝組學是將生物體所有內(nèi)源性代謝物作為研究目標(廣篩),重點在于比較實驗組和對照組,發(fā)現(xiàn)尋找其種具有明顯的變化的代謝物質(zhì)(差異代謝物),并構(gòu)建代謝通路以解釋代謝物于該生命體的關(guān)聯(lián)。LC-MS非靶向代謝組的優(yōu)勢:1、分析范圍廣,MS幾乎可以檢測所有的化合物,更加容易地解決了分析熱不穩(wěn)定化合物的難題;2、分離能力強,即使被分析混合物在色譜上沒有完全分離開,但通過MS的特征離子質(zhì)量色譜圖也能分別給出它們各自的色譜圖來進行定性定量。濟南LC-MS/MS非靶向脂質(zhì)組學研究內(nèi)容與基因組學和蛋白質(zhì)組學相比,代謝組學與生理學的聯(lián)系更加緊密。

代謝組學需要多少的生物學重復?生物學重復指的是相同處理的相同類型的生物樣本的數(shù)量(如相同劑量給藥后2小時的小鼠采集并且相同儲存條件和處理方法血清樣本)。相較于基因和蛋白,代謝物處于生命活動的下游,收到環(huán)境和遺傳背景等因素影響較大,生物學重復少可能會放大組內(nèi)差異對于整體差異的影響,進而影響結(jié)果(如準確和足夠多的找出生物標志物)。因此根據(jù)不同的生物類型,需要不同的生物學重復來增加數(shù)據(jù)的可靠性和說服力。代謝組學的研究方法與蛋白質(zhì)組學的方法類似。

代謝組學樣品收集方法及所需樣本量是什么?(1) 血清樣品: 避免反復凍融。血液收集在離心管中靜置30分鐘進行凝血。8000rpm離心10分鐘,取上清分裝到凍存管中,放置液氮中或-80度凍存;單個樣本要求體積為50μL。(2) 尿液樣品:臨床樣本請全部取清晨第1次尿液。尿液直接分裝到離心管中,8000rpm離心10分鐘,取上清分裝到凍存管中,放置液氮中或-80度凍存,-80度凍存;單個樣本要求體積為100μL。(3) 其他樣本收集辦法請咨詢譜領(lǐng)工作人員。代謝組學可與生物表型變化建立直接相關(guān)性。

非靶向代謝組學:新陳代謝網(wǎng)絡(luò)是復雜的網(wǎng)絡(luò),特別是人體的代謝網(wǎng)絡(luò),一直被認為是相對復雜的代謝網(wǎng)絡(luò)。現(xiàn)在多數(shù)信號通路的研究是集中在代謝網(wǎng)絡(luò)的一個很小的領(lǐng)域?;蚪M學、蛋白組學研究已經(jīng)揭示了部分調(diào)節(jié)通路,但是和代謝網(wǎng)絡(luò)直接相關(guān)的是代謝產(chǎn)物。從多種代謝產(chǎn)物中選取研究對象,無疑是困難的。非靶向代謝組學又稱為發(fā)現(xiàn)代謝組學,主要是將對照組和實驗組的代謝組(某一生物體的全部代謝物)進行比對,以找出其代謝物的差異。代謝組學研究通過一定的手段能夠幫助研究員從代謝產(chǎn)物海中跳出來,提供一個“航拍”的視角,從而發(fā)現(xiàn)差異性代謝產(chǎn)物。然后通過已知的代謝通路逆推找出調(diào)節(jié)酶和基因,完成疾病發(fā)病機制、藥物療理機制等方面的研究。代謝組學的研究方法與蛋白質(zhì)組學的方法類似。哈爾濱動物靶向代謝組學分析

代謝組學作為系統(tǒng)生物學的一個重要的分支,與其他組學相比有著其特有的優(yōu)勢。哈爾濱動物靶向代謝組學分析

靶向代謝組學分析成功的關(guān)鍵因素是準確度、高通量和可靠性。靶向代謝組學鑒定一般采用 GC/MS 系統(tǒng)的選擇性離子監(jiān)測 (SIM),或在三重串聯(lián)四極桿 LC/MS 系統(tǒng)上用多反應(yīng)離子監(jiān)測 (MRM) 進行靶向 MS/MS。SIM 比全掃描圖譜采集具有更高的靈敏度,在單四極桿質(zhì)譜中,這種靈敏度增強的原因是延長了所選擇離子的采集時間。因為監(jiān)測的是一個很小的質(zhì)量窗口,所以質(zhì)量色譜圖只表示對極為特定質(zhì)量的檢測。在大多數(shù)情況下,靈敏度可以提高 10 倍。MRM 是進行質(zhì)譜定量的選擇方法,與 SIM 相比更為靈敏、更加特異??梢援a(chǎn)生獨特的碎片離子,可對非常復雜基質(zhì)中的目標化合物進行監(jiān)測和定量。哈爾濱動物靶向代謝組學分析