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北京糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-05-05

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)產(chǎn)品:常規(guī)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究往往只關(guān)注不同生理、病理?xiàng)l件下蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。然而,越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn),許多重要的生命活動(dòng)、疾病發(fā)生不僅與蛋白質(zhì)的豐度相關(guān),更重要的是被各類蛋白質(zhì)翻譯后修飾所調(diào)控。因此深入研究蛋白質(zhì)翻譯后修飾對(duì)揭示生命活動(dòng)的機(jī)理、篩選疾病的臨床標(biāo)志物、鑒定藥物靶點(diǎn)等方面都具有重要意義。由于翻譯后修飾的蛋白質(zhì)在生物樣本中含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣,質(zhì)譜分析前需要對(duì)修飾進(jìn)行富集以提高其豐度。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)的特征,雖然具有挑戰(zhàn)性,但提供了對(duì)病因?qū)W過(guò)程下的細(xì)胞功能的無(wú)價(jià)的洞察。北京糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定

蛋白質(zhì)的甲基化修飾 :蛋白質(zhì)的甲基化(methylation)是指將甲基酶促轉(zhuǎn)移到蛋白質(zhì)的某個(gè)殘基上,通常是賴氨酸或精氨酸,也包括組氨酸、半胱氨酸和天冬酰胺等。蛋白質(zhì)的甲基化是一種普遍的修飾,在大鼠肝細(xì)胞核的總蛋白提取物中,大約2%的精氨酸殘基是二甲基化的。蛋白質(zhì)甲基化經(jīng)常與乙酰化并列,因?yàn)樗鼈兌际浅R?jiàn)的表觀遺傳修飾,經(jīng)常發(fā)生在組蛋白上。不過(guò)從化學(xué)反應(yīng)的角度來(lái)看,乙?;梢运阕饕环N短鏈脂酰化修飾,這里主要討論甲基化方面的問(wèn)題。四川甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)有哪些乙?;揎検窃撕驼婧松锼灿械囊环N翻譯后修飾類型。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行共價(jià)加工的過(guò)程。它通過(guò)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基加上修飾基團(tuán),可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì),進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)、亞細(xì)胞定位、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動(dòng)研究中具有重大意義,異常的翻譯后修飾會(huì)導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化,因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對(duì)翻譯后修飾方式進(jìn)行鑒定和定量。

琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點(diǎn):采用主流抗體親和富集方法,特異性高,富集效率好;通過(guò)高分辨率、高掃描速度的質(zhì)譜,對(duì)富集的琥珀?;亩芜M(jìn)行大規(guī)模鑒定;結(jié)合常用的定量技術(shù)可對(duì)不同樣品間的琥珀?;讲町愡M(jìn)行定量比較。適用范圍:藥物作用靶點(diǎn)研究;疾病標(biāo)志物篩選;植物脅迫/抗逆研究;作用機(jī)制研究;要求物種具有蛋白質(zhì)參考數(shù)據(jù)庫(kù)、EST序列(轉(zhuǎn)錄組)或基因組注釋信息。應(yīng)用方向:線粒體代謝、生物合成與代謝、中心代謝途徑、炎癥與疾病。在早期的研究中,乙?;揎椧恢北徽J(rèn)為是真核細(xì)胞所特有的一種翻譯后修飾。

磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué):磷酸化修飾蛋白質(zhì)組的研究主要集中于真核生物中普遍存在的絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸化。由于體內(nèi)磷酸化蛋白的含量很低,因此在分析前必須對(duì)其進(jìn)行分離和富集。目前,常用的磷酸化蛋白質(zhì)的分離和富集技術(shù)包括固定化金屬親和色譜、免疫沉淀、強(qiáng)陽(yáng)離子交換色譜、強(qiáng)陰離子交換色譜、反相色譜等。這些技術(shù)被整合和優(yōu)化用于不同生物樣品的磷酸化蛋白質(zhì)組分析。翻譯后修飾分析自中而下分析策略:自中而下的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可用于組蛋白修飾的分析。樣品制備與普遍使用的自下而上的分析策略相同,直到得到純化的組蛋白。提取組蛋白后,用GluC進(jìn)行消化。然后用弱陽(yáng)離子交換/親水相互作用色譜與配備電子轉(zhuǎn)移解離(的高分辨率質(zhì)譜聯(lián)機(jī)聯(lián)用,對(duì)樣品進(jìn)行理想的分離。譜識(shí)別可以用傳統(tǒng)的軟件進(jìn)行,但是由于估計(jì)適當(dāng)?shù)腻e(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率的問(wèn)題,需要對(duì)結(jié)果進(jìn)行過(guò)濾。蛋白質(zhì)翻譯后修飾有什么生物學(xué)意義?四川甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)有哪些

泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位。北京糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定

泛素化修飾蛋白組學(xué)研究分析樣品要求:1. 如果您提供的是組織樣品,請(qǐng)您干冰將組織樣品寄給我們;植物組織樣本大于400mg,血液樣品至少2ml(血漿注意用EDTA防凝),血清2ml,尿液10ml,動(dòng)物組織樣品至少2g,細(xì)胞樣品為1X10^8個(gè)細(xì)胞,酵母、微生物等干重400mg。2. 如果您提供的是蛋白樣品,請(qǐng)您保證蛋白總量在2-5mg;蛋白提取時(shí)使用普通的組織、細(xì)胞裂解液即可。3. 樣品運(yùn)輸:請(qǐng)使用足量的干冰運(yùn)輸,并且盡量選用較快的郵遞方式,以降低運(yùn)輸過(guò)程中樣品降解的可能性。4. 在正式實(shí)驗(yàn)之前,我們都會(huì)對(duì)您提供的樣品進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)合格后開(kāi)始正式試驗(yàn)。北京糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定