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泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)原理:盡管質(zhì)譜儀器的分析能力近年來有了長足的發(fā)展,但是由于蛋白翻譯后修飾化學(xué)計(jì)量值低、復(fù)雜性大,直接將蛋白組(如全細(xì)胞裂解產(chǎn)物,組織勻漿產(chǎn)物或全血清蛋白)的酶解肽段送入質(zhì)譜鑒定和定量PTM是非常困難的。因此,很多翻譯后修飾的富集方法會被采用,來提高樣品中PTM肽段的豐度和相對比例,從而提高了質(zhì)譜對翻譯后修飾位點(diǎn)的鑒定效率。研究發(fā)現(xiàn)在泛素化修飾的蛋白在tyrpsin的作用下都會產(chǎn)生diGly位點(diǎn)?;谶@一特異性,利用針對蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTM)基序(motif)抗體,在肽段水平上免疫親和富集帶有泛素化修飾的肽段,利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)進(jìn)行定量分析,能夠快速、準(zhǔn)確、高通量地分析多種疾病相關(guān)信號通路關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)蛋白修飾的變化,滿足創(chuàng)新性研究、生物標(biāo)志物鑒定、藥物靶點(diǎn)篩選和評價的需求。常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括糖基化。北京蛋白質(zhì)丙二?;揎椊M學(xué)有哪些
乙?;揎椀鞍捉M學(xué)應(yīng)用方向:1、乙?;揎椗c細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)控、表觀調(diào)控、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性等生理過程研究。2、乙酰化引起的代謝疾病、代謝紊亂發(fā)生等疾病機(jī)理研究。乙?;飳W(xué)意義:1、調(diào)節(jié)DNA-蛋白、蛋白-蛋白相互作用;2、與其他PTMs發(fā)生crosstalk;3、調(diào)節(jié)酶活性;4、調(diào)控蛋白亞細(xì)胞定位。生物領(lǐng)域各個研究方面,如:1、農(nóng)林領(lǐng)域:抗逆脅迫機(jī)制,生長發(fā)育機(jī)制,育種保護(hù)研究等;2、 畜牧業(yè):肉類及乳品質(zhì)研究,致病機(jī)理研究等。江蘇蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學(xué)質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時應(yīng)該注意些什么問題?
蛋白質(zhì)的甲基化修飾 :蛋白質(zhì)的甲基化(methylation)是指將甲基酶促轉(zhuǎn)移到蛋白質(zhì)的某個殘基上,通常是賴氨酸或精氨酸,也包括組氨酸、半胱氨酸和天冬酰胺等。蛋白質(zhì)的甲基化是一種普遍的修飾,在大鼠肝細(xì)胞核的總蛋白提取物中,大約2%的精氨酸殘基是二甲基化的。蛋白質(zhì)甲基化經(jīng)常與乙酰化并列,因?yàn)樗鼈兌际浅R姷谋碛^遺傳修飾,經(jīng)常發(fā)生在組蛋白上。不過從化學(xué)反應(yīng)的角度來看,乙?;梢运阕饕环N短鏈脂酰化修飾,這里主要討論甲基化方面的問題。
翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學(xué)修飾過程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)通過給蛋白質(zhì)添加磷酸酯、乙酸酯、酰胺基或甲基等官能團(tuán)增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,并影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)理的幾乎所有方面。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過程中起著關(guān)鍵作用,如細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)降解、信號傳導(dǎo)和調(diào)節(jié)過程、基因表達(dá)調(diào)節(jié)以及蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化、糖基化、泛素化、亞硝基化、甲基化、乙?;?、脂質(zhì)化和蛋白水解。因此,PTM的特征(包括修飾類別和修飾位點(diǎn))在細(xì)胞生物學(xué)以及疾病診斷和預(yù)防研究中至關(guān)重要。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學(xué)修飾過程。
甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域:基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床診斷:生物標(biāo)志物,疾病機(jī)理機(jī)制,疾病分型,個性化治理等;生物醫(yī)藥:藥物作用機(jī)理,藥效評價,藥物開發(fā)等;農(nóng)林領(lǐng)域:抗逆脅迫機(jī)制,生長發(fā)育機(jī)制,育種保護(hù)研究等;畜牧業(yè):肉類及乳品質(zhì)研究,致病機(jī)理研究等;微生物領(lǐng)域:致病機(jī)理,耐藥機(jī)制,病原體-宿主相互作用研究等;海洋水產(chǎn):漁業(yè)資源,海水養(yǎng)殖,漁業(yè)環(huán)境與水產(chǎn)品安全等。技術(shù)優(yōu)勢:采用抗體,特異性高;鑒定通量高, 一次可檢測高可達(dá)上千個甲基化修飾位點(diǎn)。蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法有免疫印跡技術(shù)。北京蛋白質(zhì)丙二?;揎椊M學(xué)有哪些
磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)是原核生物和真核生物中比較重要的調(diào)控修飾形式。北京蛋白質(zhì)丙二?;揎椊M學(xué)有哪些
蛋白質(zhì)翻譯后修飾:蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (Protein translational modifications,PTMs) 通過功能基團(tuán)或蛋白質(zhì)的共價添加、調(diào)節(jié)亞基的蛋白水解切割或整個蛋白質(zhì)的降解來增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性。這些修飾包括磷酸化、糖基化、泛素化、亞硝基化、甲基化、乙?;?、脂質(zhì)化和蛋白水解,幾乎影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)制的所有方面。因此,識別和理解 PTM 在細(xì)胞生物學(xué)和疾病療理和預(yù)防的研究中至關(guān)重要。蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (PTMs) 進(jìn)一步促進(jìn)了從基因組水平到蛋白質(zhì)組復(fù)雜性的增加。PTMs 是一種化學(xué)修飾,在功能蛋白質(zhì)組中發(fā)揮關(guān)鍵作用,因?yàn)樗鼈冋{(diào)節(jié)活性、定位以及與其他細(xì)胞分子(如蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)和輔助因子)的相互作用。北京蛋白質(zhì)丙二?;揎椊M學(xué)有哪些