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轉(zhuǎn)錄組學(xué),基因組學(xué),蛋白質(zhì)組學(xué)的區(qū)別:蛋白組學(xué)針對的是全體蛋白,組要以2D-Gel和質(zhì)譜為主,分為top-down和bottom-up分析方法。理念和基因組類似,將蛋白用特定的物料化學(xué)手段分解成小肽段,在通過質(zhì)量反推蛋白序列,之后進行搜索,標識已知未知的蛋白序列。轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的是某個時間點的mRNA總和,可以用芯片,也可以用測序。芯片是用已知的基因探針,測序則有可能發(fā)現(xiàn)新的mRNA?;蚪M學(xué)研究的主要是基因組DNA,使用方法目前以二代測序為主,將基因組拆成小片段后再用生物信息學(xué)算法進行迭代組裝。當(dāng)然這只是第1步,隨后還有繁瑣的基因注釋等數(shù)據(jù)分析工作。轉(zhuǎn)錄組,指細胞某一時期所有基因的轉(zhuǎn)錄水平。哈爾濱轉(zhuǎn)錄組學(xué)鑒定
circRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué):是一類具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子,沒有5′帽子結(jié)構(gòu)和3′poly(A)結(jié)構(gòu),主要位于細胞質(zhì)或儲存于外泌體中,不受RNA外切酶影響,表達更穩(wěn)定且不易降解,已被證明普遍存在于多種真核生物體內(nèi)[1]。大多數(shù)circRNA是由外顯子環(huán)化而成,也有部分circRNA是由內(nèi)含子環(huán)化而成的套索結(jié)構(gòu)。同時由于circRNA含有大量的miRNA應(yīng)答原件(MREs),能與AGO蛋白形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(RISC)的催化關(guān)鍵,然后導(dǎo)致circRNA降解。根據(jù)來源,circRNA可大致分為四類:全外顯子型的circRNA,內(nèi)含子和外顯子組合的EIcircRNA,內(nèi)含子組成的套索型ciRNA,由病毒RNA基因組、tRNA、rRNA、snRNA等環(huán)化產(chǎn)生的circRNA。哈爾濱全轉(zhuǎn)錄學(xué)組分析鑒定轉(zhuǎn)錄學(xué)組測序可對任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動進行檢測。
轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù):轉(zhuǎn)錄組學(xué)(transcriptomics),是一門在整體水平上研究細胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科。簡而言之,轉(zhuǎn)錄組學(xué)是從RNA水平研究基因表達的情況。轉(zhuǎn)錄組即一個活細胞所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,是研究細胞表型和功能的一個重要手段。優(yōu)勢:高通量、更精確的數(shù)字信號;在單核苷酸水平對任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動進行檢測;分析轉(zhuǎn)錄本的結(jié)構(gòu)和表達水平的同時,還能發(fā)現(xiàn)未知轉(zhuǎn)錄本和稀有轉(zhuǎn)錄本;準確地識別可變剪切和融合基因。應(yīng)用方向:植物生長機制的發(fā)現(xiàn)及干預(yù);炎癥發(fā)生機制的發(fā)現(xiàn)及干預(yù);表達差異的研究;基因點突變及多態(tài)性檢測。
轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域:農(nóng)林領(lǐng)域:生長發(fā)育機制,抗逆脅迫機制,育種,物種保護研究等;畜牧業(yè):生長發(fā)育機制,致病機理研究,肉類及乳制品品質(zhì)研究等;海洋水產(chǎn):生長發(fā)育機制,漁業(yè)資源,漁業(yè)環(huán)境與水產(chǎn)品安全等;微生物:致病機理,耐藥機制,病原體-宿主相互作用研究等;生物醫(yī)藥:生物標志物,疾病機理機制,疾病分型,藥物開發(fā),個性化醫(yī)治等;環(huán)境科學(xué):發(fā)酵過程優(yōu)化,生物燃料生產(chǎn),環(huán)境危害風(fēng)險評估研究等;食品科學(xué):食品儲藏及加工條件優(yōu)化,食品組分及品質(zhì)鑒定,功能性食品開發(fā),食品安全監(jiān)檢測等。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于植物生長機制的發(fā)現(xiàn)及干預(yù)。
轉(zhuǎn)錄組學(xué)差異基因數(shù)目多少比較合理?不同的處理,不同的研究目標,差異基因的數(shù)目是不同的,從幾十個到幾千個都有可能。但是如果差異基因數(shù)目是個位數(shù)或者上萬,那么就需要和分析人員溝通一下,查一查是否有問題。轉(zhuǎn)錄組學(xué)差異基因太多,注釋信息太雜亂,怎么挑選目標基因?對不同的差異組合進行維恩圖分析,挑選共有或者特有的差異基因作為后續(xù)的研究對象;根據(jù)前人的文獻報道,挑選相關(guān)差異基因,不要局限在自己研究的物種上。單細胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù): Anydeplete技術(shù)首先通過隨機引物進行一鏈合成,一鏈合成引入核苷酸類似物,用于酶切打斷,二鏈合成同樣引入核苷酸類似物用于保證鏈特異性。然后兩端加上接頭,接頭一條鏈也帶有核苷酸類似物,用于酶切降解。當(dāng)形成單鏈文庫后,設(shè)計特異性引物與rRNA形成文庫結(jié)合,一輪退火延伸,rRNA文庫形成雙鏈結(jié)構(gòu)。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序必須做生物學(xué)重復(fù)么?廣州mRNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)定性分析
轉(zhuǎn)錄組學(xué)無需了解物種基因信息,能夠直接對任何物種進行轉(zhuǎn)錄組分析。哈爾濱轉(zhuǎn)錄組學(xué)鑒定
RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)的應(yīng)用:RNA-Seq即對轉(zhuǎn)錄組進行測序和分析。一般來說在研究所會委托公司測序得到數(shù)據(jù)自己進行后續(xù)的生信分析(質(zhì)控,mapping,差異基因表達分析,SNV分析等)。RNA-Seq有著巨大的應(yīng)用前景。在不同背景下比較mRNA水平同一物種,不同組織:研究基因在不同部分的表達情況。同一物種,同一組織:研究基因在不同處理下,不同條件下的表達變化。同一組織,不同物種:研究基因的進化關(guān)系。時間序列實驗:基因在不同時期的表達情況與發(fā)育的關(guān)系?;蚍诸悾赫业郊毎禺?,疾病相關(guān),處理相關(guān)的基因表達模式,用于診斷疾病和預(yù)測等?;蚓W(wǎng)絡(luò)和通路:基因在細胞活動中的功能,基因間的相互作用。哈爾濱轉(zhuǎn)錄組學(xué)鑒定