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什么叫轉(zhuǎn)錄組?廣義轉(zhuǎn)錄組是指生命單元(通常是一種細(xì)胞)中所有按基因信息單元轉(zhuǎn)錄和加工的RNA分子(包括編碼和非編碼RNA功能單元),或者是一個(gè)特定細(xì)胞所有轉(zhuǎn)錄本的總和.它的研究對(duì)象就是這些RNA與蛋白質(zhì)分子和它們所組成的基因功能網(wǎng)絡(luò)以及它們與細(xì)胞功能的關(guān)系.而狹義轉(zhuǎn)錄組是指可直接參與翻譯蛋白質(zhì)的mRNA總和.研究生物細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄組的發(fā)生和變化規(guī)律的科學(xué)就稱為轉(zhuǎn)錄組學(xué)(tran—scriptomics).轉(zhuǎn)錄組學(xué)的意義1.轉(zhuǎn)錄組譜可以提供特定條件下某些基因表達(dá)的信息,并據(jù)此推斷相應(yīng)未知基因的功能,揭示特定調(diào)節(jié)基因的作用機(jī)制.2.通過基于基因表達(dá)譜的分子標(biāo)簽,不僅可以辨別細(xì)胞的表型歸屬,還可以用于疾病的診斷.3.轉(zhuǎn)錄組的研究應(yīng)用于臨床的另一個(gè)例子是可以將表面上看似相同的病癥分為多個(gè)亞型,尤其是對(duì)原發(fā)性惡性瘤子,通過轉(zhuǎn)錄組差異表達(dá)譜的建立,可以詳細(xì)描繪出患者的生存期以及對(duì)藥物的反應(yīng)等。circRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)一類具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子。杭州靶向轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)
轉(zhuǎn)錄組測(cè)序推薦的測(cè)序數(shù)據(jù)量?轉(zhuǎn)錄組測(cè)序所需數(shù)據(jù)量與所研究物種的基因組大小有關(guān),基因組越大,則所需數(shù)據(jù)量越大。按照我們的經(jīng)驗(yàn)來(lái)說:常規(guī)物種一般建議6G數(shù)據(jù)即可;基因組較大的物種推薦8G以上數(shù)據(jù),比如:小麥建議10G數(shù)據(jù)起,甘蔗、甘薯建議至少8G數(shù)據(jù)。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序必須做生物學(xué)重復(fù)么?需要幾個(gè)重復(fù)?生物學(xué)重復(fù)是生物實(shí)驗(yàn)所必須的,轉(zhuǎn)錄組測(cè)序也不例外,至少3 次生物學(xué)重復(fù)。準(zhǔn)備生物重復(fù)樣品時(shí),通過對(duì)實(shí)驗(yàn)的預(yù)先設(shè)計(jì)和控制,盡可能將與實(shí)驗(yàn)處理無(wú)關(guān)的背景條件控制在同一水平,減少批次效應(yīng)對(duì)結(jié)果的影響。濟(jì)南外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)主要技術(shù)轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析轉(zhuǎn)錄本的結(jié)構(gòu)和表達(dá)水平的同時(shí),還能發(fā)現(xiàn)未知轉(zhuǎn)錄本和稀有轉(zhuǎn)錄本。
轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用于胃腸瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制研究:circRNA是一種非編碼RNA,可以多種方式參與生物學(xué)功能,如細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、侵襲和轉(zhuǎn)移等。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),環(huán)狀RNA可以通過海綿吸附微小RNA和RNA結(jié)合蛋白參與轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,從而影響瘤耐藥過程中的DNA修復(fù)、凋亡、增殖、細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn),以及介導(dǎo)瘤耐藥的細(xì)胞內(nèi)酶,進(jìn)而在瘤耐藥中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域:農(nóng)林領(lǐng)域:生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制,抗逆脅迫機(jī)制,育種,物種保護(hù)研究等;畜牧業(yè):生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制,致病機(jī)理研究,肉類及乳制品品質(zhì)研究等。
宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)也稱為環(huán)境轉(zhuǎn)錄組學(xué),指從整體水平上研究某一特定環(huán)境、特定時(shí)期菌群群體全部基因轉(zhuǎn)錄情況以及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律,以揭示微生物在不同環(huán)境壓力下的適應(yīng)機(jī)制,探索環(huán)境與微生物之間的相互作用機(jī)理。其適用范圍包括人體微生態(tài)、環(huán)境、工業(yè)、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)以生態(tài)環(huán)境中的全部RNA為研究對(duì)象,避開了微生物分離培養(yǎng)困難的問題,能有效的擴(kuò)展微生物資源的利用空間。應(yīng)用領(lǐng)域:包括腸道微生物、口腔微生物、糞便微生物、人體組織微生物。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序可以對(duì)所有轉(zhuǎn)錄物進(jìn)行分類、確定基因的轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)、量化轉(zhuǎn)錄物的表達(dá)水平。
轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序結(jié)果的影響因素?RNA的降解嚴(yán)重影響測(cè)序的質(zhì)量,RNA降解后,加入poly-A后無(wú)法捕獲純化mRNA,因此,隨機(jī)引物反轉(zhuǎn)錄無(wú)法得到全部的cDNA,導(dǎo)致測(cè)序結(jié)果出現(xiàn)明顯的3‘-和5’-偏向。文庫(kù)中的poly-A多聚物的存在會(huì)對(duì)測(cè)序信號(hào)產(chǎn)生干擾,影響測(cè)序結(jié)果的準(zhǔn)確性;同時(shí)由于轉(zhuǎn)錄組中轉(zhuǎn)錄本的豐度不一致,實(shí)驗(yàn)前需要對(duì)樣本進(jìn)行均一化處理,否則高豐度的表達(dá)基因會(huì)掩蓋低豐度表達(dá)基因,導(dǎo)致尋找新基因失敗或者是獲得大量無(wú)意義的重復(fù)序列。轉(zhuǎn)錄組學(xué)狹義上指所有mRNA的組合。杭州轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析
轉(zhuǎn)錄組學(xué)差異基因太多,注釋信息太雜亂,怎么挑選目標(biāo)基因?杭州靶向轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)
全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的優(yōu)勢(shì):1、全方面鑒定可變剪切;2、發(fā)現(xiàn)更多新基因;3、有效改善基因組注釋;4、鑒定更多的LncRNA;5、準(zhǔn)確定位融合基因。研究思路:由于全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序是基于第三代測(cè)序技術(shù),因而其成本依然較高,如果全部研究項(xiàng)目均基于全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組,通常來(lái)說很難承擔(dān),因此,全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序一般與普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序相結(jié)合。宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)是什么?宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)也稱為環(huán)境轉(zhuǎn)錄組學(xué),指從整體水平上研究某一特定環(huán)境、特定時(shí)期菌群群體全部基因轉(zhuǎn)錄情況以及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律,以揭示微生物在不同環(huán)境壓力下的適應(yīng)機(jī)制,探索環(huán)境與微生物之間的相互作用機(jī)理。杭州靶向轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)