翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學(xué)修飾過程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)通過給蛋白質(zhì)添加磷酸酯、乙酸酯、酰胺基或甲基等官能團(tuán)增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,并影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)理的幾乎所有方面。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過程中起著關(guān)鍵作用,如細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)降解、信號(hào)傳導(dǎo)和調(diào)節(jié)過程、基因表達(dá)調(diào)節(jié)以及蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化、糖基化、泛素化、亞硝基化、甲基化、乙?;⒅|(zhì)化和蛋白水解。因此,PTM的特征(包括修飾類別和修飾位點(diǎn))在細(xì)胞生物學(xué)以及疾病診斷和預(yù)防研究中至關(guān)重要。蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)能夠影響蛋白的多種屬性,包括蛋白質(zhì)折疊、活性以及之后的功能。哈爾濱蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)主要方式
泛素化修飾PRM定量驗(yàn)證:原理: 泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動(dòng)。首先對(duì)泛素化的蛋白進(jìn)行胰酶消化,在賴氨酸的修飾位點(diǎn)上會(huì)產(chǎn)生兩個(gè)甘氨酸的殘基(K-GG),利用對(duì)泛素化賴氨酸(K-GG)具有高親和力的基序抗體,特異性富集復(fù)雜樣本中的泛素化肽段,結(jié)合LC-MS/MS蛋白質(zhì)定量方法,實(shí)現(xiàn)大規(guī)模泛素化蛋白質(zhì)定性定量分析。深圳蛋白質(zhì)亞硝基化修飾組學(xué)分析價(jià)格蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)是通過在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基加上修飾基團(tuán),可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì)。
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)有些什么?泛素化可以生產(chǎn)出單泛素化或多泛素化蛋白質(zhì)。后者在當(dāng)7個(gè)賴氨酸殘基的泛素與另一個(gè)泛素的甘氨酸C端連接形成。這種泛素分子鏈接在生物過程中起到重要的作用。共價(jià)結(jié)合泛素的蛋白質(zhì)能被蛋白酶識(shí)別并降解,這是細(xì)胞內(nèi)短壽命蛋白質(zhì)和一些異常蛋白降解的普遍途徑。泛素化及類泛素化蛋白在細(xì)胞分裂,自噬,DNA修復(fù),免疫應(yīng)答,細(xì)胞消亡等方面同樣起到關(guān)鍵作用。與消化道內(nèi)進(jìn)行的蛋白質(zhì)水解不同,從泛素與蛋白的結(jié)合到將蛋白水解成小的肽段,整個(gè)水解過程需要能量參與。人們開始意識(shí)到泛素-蛋白酶系統(tǒng)是一個(gè)對(duì)于真核細(xì)胞非常重要的調(diào)節(jié)系統(tǒng)。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)產(chǎn)品:常規(guī)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究往往只關(guān)注不同生理、病理?xiàng)l件下蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。然而,越來越多的研究發(fā)現(xiàn),許多重要的生命活動(dòng)、疾病發(fā)生不僅與蛋白質(zhì)的豐度相關(guān),更重要的是被各類蛋白質(zhì)翻譯后修飾所調(diào)控。因此深入研究蛋白質(zhì)翻譯后修飾對(duì)揭示生命活動(dòng)的機(jī)理、篩選疾病的臨床標(biāo)志物、鑒定藥物靶點(diǎn)等方面都具有重要意義。由于翻譯后修飾的蛋白質(zhì)在生物樣本中含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣,質(zhì)譜分析前需要對(duì)修飾進(jìn)行富集以提高其豐度。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化。
定量N-糖基化蛋白質(zhì)翻譯修飾組學(xué):蛋白質(zhì)的N-糖基化位點(diǎn)修飾是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一,主要在復(fù)雜的多細(xì)胞或組織形成過程中起關(guān)鍵作用。蛋白質(zhì)的N-糖基化修飾位點(diǎn)具有保守的氨基酸序列NX(S/T)(其中X為除脯氨酸以外的其它氨基酸)凝集素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用普遍的分離富集方法。凝集素(lectin)是一類糖結(jié)合蛋白質(zhì),能專一識(shí)別某一特殊結(jié)構(gòu)的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結(jié)合,它們與糖鏈可逆非共價(jià)結(jié)合,糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后,通常用特定的單糖通過競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來。泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)有些什么?蛋白質(zhì)亞硝基化修飾組學(xué)費(fèi)用
蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化,糖基化,泛素化,亞硝基化,甲基化,乙?;?,脂質(zhì)化和蛋白水解。哈爾濱蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)主要方式
根據(jù)不同的作用位點(diǎn),蛋白質(zhì)乙?;揎椃譃椋喊l(fā)生在蛋白N端的乙?;揎?、發(fā)生在蛋白賴氨酸上的乙酰化修飾。前者發(fā)生在90%以上的真核生物新生蛋白上,對(duì)于新生蛋白的成熟和細(xì)胞定位非常重要,由N乙酰轉(zhuǎn)移酶(NATs)負(fù)責(zé);而后者是一個(gè)可逆的過程,主要由賴氨酸乙?;福↘ATs)和賴氨酸去乙酰化酶(KDACs),賴氨酸的乙?;揎検俏覀兡壳把芯康闹攸c(diǎn)。蛋白質(zhì)磷酸化修飾應(yīng)用領(lǐng)域:應(yīng)用在食品工業(yè)方面,通過人工翻譯磷酸化修飾的蛋白可以普遍用于各種食用蛋白質(zhì)的改性,以改善蛋白質(zhì)品質(zhì)。如,花生蛋白、大豆蛋白、小麥面筋蛋白等。在人工磷酸化修飾的方法下,也可以研究各種蛋白質(zhì)的功能和相關(guān)代謝途徑的調(diào)控。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,蛋白質(zhì)的磷酸化紊亂,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控異常,因此,病理的形成與蛋白質(zhì)的磷酸化異常也有很大相關(guān)性。其分子機(jī)制問題對(duì)于病癥等重大疾病的研究具有相當(dāng)?shù)闹笇?dǎo)意義,這也是指當(dāng)之無愧地成為生物學(xué)研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)。哈爾濱蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)主要方式