轉(zhuǎn)錄組學技術(shù):轉(zhuǎn)錄組學(transcriptomics),是一門在整體水平上研究細胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學科。簡而言之,轉(zhuǎn)錄組學是從RNA水平研究基因表達的情況。轉(zhuǎn)錄組即一個活細胞所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,是研究細胞表型和功能的一個重要手段。優(yōu)勢:高通量、更精確的數(shù)字信號;在單核苷酸水平對任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動進行檢測;分析轉(zhuǎn)錄本的結(jié)構(gòu)和表達水平的同時,還能發(fā)現(xiàn)未知轉(zhuǎn)錄本和稀有轉(zhuǎn)錄本;準確地識別可變剪切和融合基因。應(yīng)用方向:植物生長機制的發(fā)現(xiàn)及干預;炎癥發(fā)生機制的發(fā)現(xiàn)及干預;表達差異的研究;基因點突變及多態(tài)性檢測。轉(zhuǎn)錄組學可以準確地識別可變剪切和融合基因。湖北單細胞轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)分析
全轉(zhuǎn)錄組測序為什么需要構(gòu)建兩個文庫?全轉(zhuǎn)錄組測序需要構(gòu)建2個測序文庫,一個小RNA文庫和一個去除核糖體RNA的鏈特異性文庫,然后分別上機測序。小RNA長度較短,一般小于50nt,采用測序策略為50SE。其他三類RNA序列一般大于200,通常在1000以上,可達幾萬,通過片段化構(gòu)建150PE測序文庫。然后小RNA文庫可以獲得miRNA序列信息,去核糖體的鏈特異性文庫可以獲得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。轉(zhuǎn)錄組學即特定細胞在某一功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。南京全長轉(zhuǎn)錄學組分析轉(zhuǎn)錄組學測序可以同時測到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?
轉(zhuǎn)錄組學含義:轉(zhuǎn)錄組學是指一門在整體水平上研究細胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學科。轉(zhuǎn)錄組學是從RNA水平研究基因表達的情況。轉(zhuǎn)錄組即一個活細胞所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,是研究細胞表型和功能的一個重要手段。以DNA為模板合成RNA的轉(zhuǎn)錄過程是基因表達的第一步,也是基因表達調(diào)控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。所謂基因表達,是指基因攜帶的遺傳信息轉(zhuǎn)變?yōu)榭杀鎰e的表型的整個過程。與基因組不同的是,轉(zhuǎn)錄組的定義中包含了時間和空間的限定。同一細胞在不同的生長時期及生長環(huán)境下,其基因表達情況是不完全相同的。通常,同一種組織表達幾乎相同的一套基因以區(qū)別于其他組織,如腦組織或心肌組織等分別只表達全部基因中不同的30%而顯示出組織的特異性。
什么是轉(zhuǎn)錄組學測序?轉(zhuǎn)錄組廣義上指在某一生理條件下,細胞內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄組產(chǎn)物的組合,包括:mRNA、ncRNA、rRNA等;狹義上指所有mRNA的組合。轉(zhuǎn)錄組測序的研究對象為特定細胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,主要包括mRNA和ncRNA。轉(zhuǎn)錄組具有時間特異性、組織特異性、空間特異性等特點。無參轉(zhuǎn)錄組和有參轉(zhuǎn)錄組的區(qū)別?如果所研究的物種有組裝注釋質(zhì)量較好基因組序列,且和該基因組序列比對效率較高,那么可以采用有參轉(zhuǎn)錄組的分析策略,直接進行分析。反之,則需要按照無參轉(zhuǎn)錄組的分析策略進行轉(zhuǎn)錄本組裝,構(gòu)建unigene庫,然后進行后續(xù)分析。什么是轉(zhuǎn)錄組學測序?
轉(zhuǎn)錄組學和基因組學目前有實用價值嗎?二者實用價值非常大,尤其是對有瘤的患者的醫(yī)治,簡直顛覆了傳統(tǒng)醫(yī)治的模式。轉(zhuǎn)錄組和基因組月在生物學研究中有著重要價值。例如研究某個基因功能的時候,可以構(gòu)建該基因的敲除或者過表達生物,然后對比野生型進行轉(zhuǎn)錄組分析看看該基因涉及什么表達網(wǎng)絡(luò)。此外在醫(yī)學方面的應(yīng)用也很大,例如在有的瘤病人中進行基因組學測序和分析能夠了解其中的發(fā)生的發(fā)展的驅(qū)動基因,然后能根據(jù)發(fā)展的驅(qū)動基因研究靶向藥物,從而推動瘤的藥物研發(fā)和醫(yī)治!轉(zhuǎn)錄組學可應(yīng)用于炎癥發(fā)生機制的發(fā)現(xiàn)及干預。湖北單細胞轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)分析
轉(zhuǎn)錄組學測序包括mRNA和非編碼RNA。湖北單細胞轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)分析
單細胞轉(zhuǎn)錄組學測試步驟:第1步就是把單個細胞分選出來。分選的方式也比較多,物理切割,酶消化,F(xiàn)ACS分選等。假如已經(jīng)分到了一個單細胞,跟常規(guī)的轉(zhuǎn)錄組步驟上是一樣的。下一步就是把單細胞里的RNA提取出來去建庫測序。但是一個細胞里的RNA含量是比較少的,難建庫成功。這個里面“量”的概念很有意思。比如說單細胞量少,需要特殊處理。因為單細胞里面RNA的量少,所以說整個富集的過程中會出現(xiàn)一部分基因在一個細胞里能檢測到,在另外一個細胞里面檢測不到,而每個細胞里面的檢測存在一個隨機性,同時單細胞測序深度比較低,所以說分析時相比于普通轉(zhuǎn)錄組有一些是需要特別注意,但整體的分析思路是類似的。湖北單細胞轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)分析