蛋白質(zhì)修飾位點分析:基于LC-MS/MS分析能夠精確測定蛋白質(zhì)或多肽分子質(zhì)量這一特性,從而檢測蛋白質(zhì)或者多肽上位點發(fā)生何種修飾??蓹z測修飾類型如下: 磷酸化、糖基化、乙?;?、泛素化、丙酰化、丁?;?、丙二?;⑽於;㈢牾;渭谆?、二甲基化、三甲基化。1、磷酸化:信號轉(zhuǎn)導、細胞周期、生長發(fā)育機理等;2、糖基化:蛋白質(zhì)折疊、更新以及免疫應(yīng)答等;3、乙?;夯虮磉_調(diào)控、細胞凋亡、細胞代謝、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性以及神經(jīng)退行性的病變等;4、泛素化:細胞周期、細胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA修復(fù)以及信號轉(zhuǎn)導等;5、甲基化:染色質(zhì)結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等;6、丙?;?/ 丙二酰化 / 戊二?;?/ 琥珀?;褐饕嬖谟诰€粒體和細菌中,與代謝過程密切相關(guān)。乙?;揎検求w內(nèi)保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾。貴州蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學分析
蛋白質(zhì)學組翻譯后修飾分析:組蛋白是一類高度保守的蛋白質(zhì),是染色質(zhì)的關(guān)鍵成分,是DNA包裝的結(jié)構(gòu)單位。組蛋白的功能受其翻譯后修飾介導。組蛋白翻譯后修飾包括通過絲氨酸或蘇氨酸殘基的磷酸化,賴氨酸或精氨酸的甲基化,賴氨酸的乙?;兔撘阴;?,賴氨酸的泛素化和磺酰化等對組蛋白進行的共價修飾。組蛋白這些修飾對于核完整性至關(guān)重要,因為它們可以調(diào)節(jié)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)并募集參與基因調(diào)節(jié)、DNA修復(fù)和染色體濃縮的酶。組蛋白的翻譯后修飾大多位于N末端的尾巴上,因為N末端是蛋白質(zhì)中比較暴露和比較靈活的區(qū)域。分析組蛋白翻譯后修飾有助于探索組蛋白修飾與染色體濃縮、DNA轉(zhuǎn)錄等生物功能之間的關(guān)系。廣東蛋白質(zhì)糖基化修飾組學價錢乙?;揎検窃撕驼婧松锼灿械囊环N翻譯后修飾類型。
蛋白磷酸化修飾過程:蛋白磷酸化修飾這一過程是通過蛋白激酶催化,將磷酸基團從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、蘇氨酸,或酪氨酸殘基上。并且磷酸化修飾的過程是可逆的,去磷酸化反應(yīng)由蛋白磷酸酶催化完成。蛋白磷酸化檢測方法:Western Blot檢測方法:Western Blot是檢測蛋白磷酸化水平的常用方法,主要過程為先利用SDS-PAGE分離蛋白質(zhì),隨后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,然后使用特異性識別磷酸化蛋白的抗體來鑒定目標蛋白的磷酸化水平。只有被磷酸化修飾的蛋白才會在相應(yīng)分子質(zhì)量的地方顯現(xiàn)特異性蛋白條帶。
翻譯后修飾蛋白的檢測方法:翻譯后修飾蛋白的檢測技術(shù)包括有免疫沉淀、western blot、質(zhì)譜技術(shù)、體外生化分析等。其中,免疫沉淀是大多數(shù)翻譯后修飾檢測中的關(guān)鍵步驟,它利用蛋白特異性抗體或某種翻譯后修飾的特異性抗體來富集目標蛋白,之后再用western blot或質(zhì)譜技術(shù)分析目標蛋白。Western blot和質(zhì)譜技術(shù)均可用于蛋白質(zhì)翻譯后修飾的下游檢測,其中Western blot相對簡單但依賴于特異性抗體且無法識別單個蛋白質(zhì)變化,質(zhì)譜則可以檢測包括未知PTM在內(nèi)的幾乎所有的PTMs但成本更高需要專業(yè)知識來分析產(chǎn)生的大量數(shù)據(jù)。研究人員可以根據(jù)成本、有無可用抗體,以及有沒有目標等選擇合適的方法進行檢測。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學具有全方面性。
蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學:蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價修飾方式之一。磷酸化修飾本身所具有的簡單、靈活、可逆的特性,以及磷酸基團的供體ATP的易得性,使得磷酸化修飾被真核細胞所選擇接受成為一種比較普遍的調(diào)控手段。蛋白質(zhì)的磷酸化和去磷酸化這一可逆過程,幾乎調(diào)節(jié)著包括細胞的增殖、發(fā)育、分化、細胞骨架調(diào)控、細胞凋亡、神經(jīng)活動、肌肉收縮、新陳代謝發(fā)生等生命活動的所有過程,并且可逆的蛋白質(zhì)磷酸化是目前所知道的比較主要的信號轉(zhuǎn)導方式。目前已經(jīng)知道有許多人類疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起,而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導致的后果。泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。深圳磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學有哪些
蛋白質(zhì)翻譯后修飾有什么生物學意義?貴州蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學分析
質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾:相對于蛋白質(zhì)印跡等技術(shù),質(zhì)譜技術(shù)能更有效的對蛋白質(zhì)的翻譯后修飾進行分析,且可以對常規(guī)的Western blot 翻譯后修飾蛋白鑒定進行補充。質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾一般使用自下而上的基于肽段的方法。但是自下而上的質(zhì)譜方法無法保證可以完全識別目的蛋白的特定翻譯后修飾,因為質(zhì)譜是通過蛋白質(zhì)序列內(nèi)的多個肽段來鑒定的,這很大程度上降低了翻譯后修飾肽段被識別的機會。一種提高質(zhì)譜儀檢測到修飾肽段數(shù)量的策略是使用PTM親和試劑進行肽段富集,而不是使用PTM親和試劑進行蛋白富集,這將減少富集的未修飾肽段的數(shù)量。貴州蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學分析
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