蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)技術(shù):乙酰化修飾是體內(nèi)保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾,對(duì)細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的刺激有著重要的作用。此外,還存在的非組蛋白乙?;揎梾⑴c了代謝通路及代謝酶活性的調(diào)節(jié)。采用肽段預(yù)分離降低高豐度組蛋白對(duì)蛋白乙?;b定的影響,再結(jié)合免疫共沉淀通過(guò)抗體富集乙酰化的肽段,從而實(shí)現(xiàn)乙酰化的鑒定及定量。樣品要求:1、SDS-PAGE條帶:5個(gè)以上可見(jiàn)考染條帶。2、溶液(目標(biāo)蛋白質(zhì)):目標(biāo)蛋白總量>50μg,目標(biāo)蛋白濃度>80%。3、溶液(大規(guī)模混合蛋白質(zhì)):蛋白總量>1mg,蛋白濃度>1μg/μl。質(zhì)譜可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測(cè)。杭州甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域
質(zhì)譜分析乙?;鞍踪|(zhì)組:質(zhì)譜分析技術(shù)可以對(duì)蛋白質(zhì)組中的乙酰化蛋白進(jìn)行鑒定、乙?;稽c(diǎn)定位以及定量。當(dāng)質(zhì)譜用于乙?;康鞍捉M研究中時(shí),因?yàn)橐阴;鞍踪|(zhì)在生物樣本中含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣,需要先對(duì)乙?;亩芜M(jìn)行富集,然后再對(duì)富集得到的乙酰化肽段樣品進(jìn)行定量分析。質(zhì)譜定量乙?;鞍捉M采用肽段預(yù)分離降低高豐度蛋白的影響,結(jié)合免疫共沉淀通過(guò)高效的抗體富集乙?;碾亩?,從而實(shí)現(xiàn)大規(guī)模乙?;蔫b定及定量。為了鑒定和定量更多的乙?;亩?,在酶切過(guò)程中還可使用多種不同的酶對(duì)蛋白樣品進(jìn)行酶切。山東蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)方法蛋白磷酸化修飾過(guò)程是通過(guò)蛋白激酶催化,將磷酸基團(tuán)從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、或酪氨酸殘基上。
蛋白翻譯后修飾檢測(cè):由于PTMs在基礎(chǔ)生物學(xué)以及疾病發(fā)病機(jī)理中的重要性,因此非常需要對(duì)蛋白質(zhì)的翻譯后修飾進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)蛋白翻譯后修飾進(jìn)行研究時(shí)通常需要富集步驟,因?yàn)檫@些翻譯后修飾的蛋白質(zhì)相對(duì)含量較低。大多數(shù)PTMs的檢測(cè)方法與富集策略結(jié)合在一起開(kāi)發(fā),以提供比較好的機(jī)會(huì)來(lái)識(shí)別、驗(yàn)證和研究蛋白翻譯后修飾的功能。但是,在檢測(cè)已有特異性翻譯后修飾抗體的修飾蛋白質(zhì)時(shí),可能不需要富集步驟。質(zhì)譜技術(shù),通過(guò)測(cè)定肽段的分子量可以對(duì)該肽段的翻譯后修飾情況進(jìn)行檢測(cè),并可以對(duì)翻譯后修飾蛋白進(jìn)行定性和定量分析。
蛋白磷酸化修飾過(guò)程:蛋白磷酸化修飾這一過(guò)程是通過(guò)蛋白激酶催化,將磷酸基團(tuán)從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、蘇氨酸,或酪氨酸殘基上。并且磷酸化修飾的過(guò)程是可逆的,去磷酸化反應(yīng)由蛋白磷酸酶催化完成。蛋白磷酸化檢測(cè)方法:Western Blot檢測(cè)方法:Western Blot是檢測(cè)蛋白磷酸化水平的常用方法,主要過(guò)程為先利用SDS-PAGE分離蛋白質(zhì),隨后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,然后使用特異性識(shí)別磷酸化蛋白的抗體來(lái)鑒定目標(biāo)蛋白的磷酸化水平。只有被磷酸化修飾的蛋白才會(huì)在相應(yīng)分子質(zhì)量的地方顯現(xiàn)特異性蛋白條帶。乙?;揎棇?duì)細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的刺激有著非常重要的作用。
蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾自下而上分析策略:常用的糖蛋白分離和富集技術(shù)有:a. 凝集素親和技術(shù);b. 肼化學(xué)富集;c. 親水性相互作用色譜法;d. β-消除/邁克爾加成反應(yīng)?;谫|(zhì)譜的糖蛋白鑒定和糖基化位點(diǎn)測(cè)定方法有:a. PNGase F酶法;b. Endo H酶法;c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。泛素化:泛素是一種由76個(gè)氨基酸組成的多肽,在真核生物中高度保守,可通過(guò)異肽鍵與目標(biāo)蛋白賴氨酸殘基的氨基進(jìn)行共價(jià)連接。泛素化蛋白的富集主要基于標(biāo)記,泛素用親和標(biāo)簽(通常為6xHis)進(jìn)行標(biāo)記,并通過(guò)鎳螯合色譜親和提取泛素化蛋白。由于泛素的C端為Arg-Gly-Gly結(jié)構(gòu),經(jīng)胰蛋白酶水解后,Gly-Gly保留在修飾蛋白的肽鏈上,使肽的質(zhì)量增加114,因此可作為泛素定位位點(diǎn)的質(zhì)量標(biāo)記。用HPLC對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)分離,使用針對(duì)特定殘留結(jié)構(gòu)的抗體富集泛素化肽,可很大程度上提高泛素化蛋白的濃度。串聯(lián)質(zhì)譜可以鑒定泛素化位點(diǎn)。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有可靠性。上海蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)主要方式
蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法有免疫印跡技術(shù)。杭州甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):蛋白質(zhì)翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行共價(jià)加工的過(guò)程。它通過(guò)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基加上修飾基團(tuán),可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì),進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)、亞細(xì)胞定位、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動(dòng)研究中具有重大意義,異常的翻譯后修飾會(huì)導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化,因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對(duì)翻譯后修飾方式進(jìn)行鑒定和定量。杭州甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域
上海拜譜生物科技有限公司總部位于東川路555號(hào)丙樓1171室,是一家從事生物科技、醫(yī)療科技、化工科技和檢測(cè)科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開(kāi)發(fā),技術(shù)轉(zhuǎn)讓,技術(shù)咨詢,技術(shù)服務(wù),軟件開(kāi)發(fā),化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)化學(xué)品,監(jiān)控化學(xué)品,煙花爆竹,民用物,易制毒化學(xué)品)、儀器儀表的銷售。。。....的公司。拜譜生物作為從事生物科技、醫(yī)療科技、化工科技和檢測(cè)科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開(kāi)發(fā),技術(shù)轉(zhuǎn)讓,技術(shù)咨詢,技術(shù)服務(wù),軟件開(kāi)發(fā),化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)化學(xué)品,監(jiān)控化學(xué)品,煙花爆竹,民用物,易制毒化學(xué)品)、儀器儀表的銷售。。。....的企業(yè)之一,為客戶提供良好的多組學(xué)服務(wù),質(zhì)譜檢測(cè),蛋白質(zhì)組學(xué),代謝組學(xué)。拜譜生物不斷開(kāi)拓創(chuàng)新,追求出色,以技術(shù)為先導(dǎo),以產(chǎn)品為平臺(tái),以應(yīng)用為重點(diǎn),以服務(wù)為保證,不斷為客戶創(chuàng)造更高價(jià)值,提供更優(yōu)服務(wù)。拜譜生物始終關(guān)注商務(wù)服務(wù)市場(chǎng),以敏銳的市場(chǎng)洞察力,實(shí)現(xiàn)與客戶的成長(zhǎng)共贏。