細(xì)菌***對(duì)CCK8檢測(cè)的影響：我們做***的，經(jīng)常會(huì)做到細(xì)菌或***對(duì)細(xì)胞的影響。那這種情況下我們應(yīng)該怎么辦。其實(shí)細(xì)菌防御系統(tǒng)還是非常強(qiáng)大，單獨(dú)和CCK-8在一起孵育時(shí)，不會(huì)發(fā)生還原反應(yīng)，幾乎不會(huì)和細(xì)菌發(fā)生顯色反應(yīng)。而細(xì)菌不需要入胞繁殖，所以結(jié)果還是可信的。**討厭的就是***，我不知道有多少人是做***的。***是需要入胞繁殖的，而且需要借助細(xì)胞的東西來進(jìn)行繁殖。繁殖過程中就需要消耗宿主的能量，會(huì)產(chǎn)生氧化還原反應(yīng)，所以我用CCK-8來測(cè)定***對(duì)細(xì)胞活性的影響或者某個(gè)***對(duì)***復(fù)制的影響時(shí)，我都小心翼翼的測(cè)很多個(gè)時(shí)間點(diǎn)，說實(shí)話，效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅。主要是重復(fù)性優(yōu)于MTT；江蘇cck8 同仁

切記一定要使用無血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，一是可以排除血清對(duì)細(xì)胞生長的影響；二是血清的存在會(huì)對(duì)吸光度的測(cè)量產(chǎn)生影響。以上是MTT比色法的介紹，MTT比色法因?yàn)樯婕暗轿雠囵B(yǎng)基溶解沉淀的操作，所以更適用于貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞比較好選用CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖，下面給大家介紹一下CCK8操作的注意事項(xiàng)。CCK8實(shí)驗(yàn)操作CCK8的優(yōu)勢(shì)在于對(duì)細(xì)胞沒有毒性，可以直接加入細(xì)胞中長時(shí)間孵育，而不用考慮試劑本身對(duì)細(xì)胞帶來的影響。向各孔中加入10ul的CCK-8檢測(cè)溶液。如若檢測(cè)的細(xì)胞增殖或毒性試驗(yàn)，需在此之前加入作用***培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間，例如6h/12h/24h等，然后再加入CCK8檢測(cè)液。浙江cck8檢測(cè)細(xì)胞活力在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的，有呼吸，有能量代謝）.

7、若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。注意：如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響。當(dāng)然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可?；盍τ?jì)算：保存條件：4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。

二、優(yōu)點(diǎn)：·使用方便，省去了洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；·CCK-8法能快速檢測(cè)；·CCK-8法的檢測(cè)靈敏度很高，甚至可以測(cè)定較低細(xì)胞密度；·CCK-8法的重復(fù)性優(yōu)于MTT法，MTT實(shí)驗(yàn)生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有機(jī)溶劑溶解；而本方法產(chǎn)生的formazan是水溶性的，不但省去了溶解步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差；·CCK-8法對(duì)細(xì)胞毒性小，可以多次測(cè)定選取比較好測(cè)定時(shí)間，與MTT方法相比線性范圍更寬，靈敏度更高；·CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑中為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開即用。無需放射性同位素和有機(jī)溶劑，對(duì)細(xì)胞毒性低.

制作標(biāo)準(zhǔn)曲線1.先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。2.按比例(例如：1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組3-6個(gè)復(fù)孔。3.接種后培養(yǎng)2-4小時(shí)使細(xì)胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定O.D值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X軸)，O.D值為縱坐標(biāo)(Y軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提條件是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間)。cck8結(jié)果處理**終結(jié)果.天津cck8測(cè)細(xì)胞活性的方法

微生物對(duì)細(xì)胞的毒性或增殖的實(shí)驗(yàn)。江蘇cck8 同仁

用途：

***篩選、

細(xì)胞增殖測(cè)定、

細(xì)胞毒性測(cè)定、

**藥敏試驗(yàn)等。

所需設(shè)備及儀器：

10ul，100-200ul及多通道移液器

酶標(biāo)儀（帶有450nm濾光片）

96孔培養(yǎng)板

二氧化碳培養(yǎng)箱

培養(yǎng)0.5-4小時(shí):細(xì)胞種類不同，形成的Formazan的量也不一樣。如果顯色不夠的話，可以繼續(xù)培養(yǎng)，以確認(rèn)比較好條件。特別是血液細(xì)胞形成的Formazan很少，需要較長的顯色時(shí)間（5-6小時(shí)）。

測(cè)定450nm吸光度：建議采用雙波長進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)波長450-490nm，參比波長600-650nm。 江蘇cck8 同仁