、***濃度的確定需要做一個時間梯度，鋪板和上述相同，只需把各個實驗組改成各個作用時間就可以了。至于說***濃度的確定，網上有很多確認方法，個人建議以IC50值作為***濃度即可。計算方法，某園子里都有，就不在這里介紹了。

MTT作用之后，一定要小心吸走培養(yǎng)液，以免將孔內的紫色結晶吸走。有條件的實驗室，這一步可以采用離心機將沉淀充分離心到孔底，防止被吸出。如果沒有這種類型的離心機，可以在測量吸光度的時候，將酶聯(lián)免疫的機器震蕩時間調制5分鐘，**起碼可以保證沉淀充分溶解。 cck8試劑盒價格是多少?天津cck8英文說明書

經驗總結及分享： 

CCK8的說明書大家一定要認真閱讀，里面很多細節(jié)的問題都有提到。而且說明書里提供的一些關于各種細胞的種板數(shù)都很有參考價值，因為那是反復驗證過的比較好數(shù)值。但無論如何，做這個試驗一定要摸條件。你就算再懶，這個懶不得，否則你都只是在做無用功。以下言論全部以細胞毒性試驗為前提， 如果你做的是促進細胞生長的***的藥效實驗那就另當別論了。

摸條件包括1、種板數(shù)；2、種板后細胞的貼壁生長時間；3、加藥后的孵育時間；4、cck8試劑加入量；5、cck8試劑加入后細胞孵育時間?？雌饋砗芏?，其實這就是一個實驗。而且都是種的空白板，也就是不加***，只加細胞和CCK8。 浙江cck8檢測細胞增殖原理CCK8系列簡稱終于來了.

CCK8檢測細胞增殖/毒性的方法：

1.將處于對數(shù)生長期的各實驗組細胞胰酶消化后，完全培養(yǎng)基重懸成細胞懸液，并計數(shù)。

2.根據(jù)細胞生長快慢決定鋪板細胞密度（多數(shù)為1000-2000 cell/well），每組3-5重復，每孔100-200μl培養(yǎng)基。根據(jù)實驗設計決定鋪板數(shù)量（如需要檢測5天，則鋪5張96孔板），我們以1000 cell/well，5復孔，200μl培養(yǎng)基，檢測5天為例，各實驗組需要細胞數(shù)量為1000×5×5個細胞，從計數(shù)好的細胞懸液中取出所需的細胞量和完全培養(yǎng)基混勻，**終體積為200×5×5μl。

7、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發(fā)生變化。注意：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響。當然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可?；盍τ嬎悖罕４鏃l件：4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細胞.

CCK-8沒有具體規(guī)定反應時間的長短，以具體反映比較好顯色的時間為主。因為不同的細胞反應時間、顯色標準都不一樣，所以一定要設置預實驗。預實驗中，可以先做幾個孔摸索一下接種數(shù)量和培養(yǎng)時間。3、懸浮細胞比貼壁細胞難顯色。在加入CCK-8培養(yǎng)后，可每隔一小時觀測一下顏色的變化情況，或者之間用酶標儀檢測更為準確。4、CCK8作用時間越長，OD值就越大，所以對于作用時間也不是越長久越好，要把OD值控制在1左右。5、CCK8要求檢測孔內不能有氣泡。用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值.北京cck8 日本同仁

加入CCK8那會空白對照組的細胞剛好長滿嗎？天津cck8英文說明書

再此，給大家分享個小事情，有次，因為實驗時間點已經到，但是盒子不夠，我們就用了某天的CCK-8試劑盒，***出來的結果如圖3。這個結果是我所不能接受的。后來用Sigma的再重復了一次，如圖4，這種有深有淺的才是該有的結果。我想說的是在有能力選擇范圍內，盡量選擇好一點的試劑，免得浪費時間。后來博士換了導師，換了課題，沒有再用Sigma的了，用了一個日本的牌子，名字和貨號如下，結果只能說justsoso，肯定沒有Sigma的好用。二次天津cck8英文說明書