CCK8檢測細胞增殖/毒性的注意事項：1.加入CCK8溶液時不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)；2.要設(shè)計空白對照組；3.對于大多數(shù)情況，加入CCK8溶液后，孵育2h左右就可以了；4.使用酶標(biāo)儀之前要提前開啟10min預(yù)熱；5.若連續(xù)多天檢測，必須保持所有條件一致。相關(guān)鏈接：CCK8的特性、保存方法以及與BrdU的區(qū)別CCK8空白對照，測定參比波長的設(shè)定以及OD值的合適范圍CCK8標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢測時間、終止反應(yīng)以及減少加樣誤差的方法外界因素(金屬/***/細菌/培養(yǎng)基/培養(yǎng)板)對CCK8測定的影響細胞因素(預(yù)培養(yǎng)/生長方式/狀態(tài)/細胞數(shù)/死細胞)對CCK8測定的影響細胞增殖到底用MTT還是CCK8呢?cck8結(jié)果處理**終結(jié)果.上海cck8吸光度

二、優(yōu)點：·使用方便，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑；·CCK-8法能快速檢測；·CCK-8法的檢測靈敏度很高，甚至可以測定較低細胞密度；·CCK-8法的重復(fù)性優(yōu)于MTT法，MTT實驗生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有機溶劑溶解；而本方法產(chǎn)生的formazan是水溶性的，不但省去了溶解步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差；·CCK-8法對細胞毒性小，可以多次測定選取比較好測定時間，與MTT方法相比線性范圍更寬，靈敏度更高；·CCK-8細胞活性檢測試劑中為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開即用。江蘇cck8結(jié)果用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。

。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時，還應(yīng)考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。金屬對CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會***5%、15%、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降級。如果終濃度是10 mM的話，將會*****。懸浮細胞由于染色比較困難，一般需要增加細胞數(shù)量和延長培養(yǎng)時間。

細胞增殖實驗就是對細胞生長的測定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細胞生長的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項。MTT實驗操作1、在96孔板中培養(yǎng)細胞，設(shè)置對照組（細胞+無血清培養(yǎng)基）、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：2、在對照組和實驗組中，每孔加入細胞懸液100ul在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）.

CCK-8的原理

所以粗略的可以認為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細胞的數(shù)量成正比。為什么是粗略的呢，因為這里沒有考慮到細胞代謝水平的高低，有些細胞在***處理后，可能活細胞數(shù)不變，但是代謝率低了以后，細胞呼吸減弱，NAD+產(chǎn)生減少，測出的Formazan也會減少，所以此時怎么算呢（此時我就比較懷戀中性紅了）？當(dāng)然也有解決的辦法，下期給大家介紹。因此可利用這個原理進行細胞增殖和毒性分析，在吸光度為450時檢測讀數(shù)。顏色也會越深 用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值.上海cck8 顏色深淺

CCK8試驗的總體實驗心得.上海cck8吸光度

實驗材料及試劑

96 孔板、CO2培養(yǎng)箱、酒精燈、移液***、酶標(biāo)儀等；細胞、CCK8等。

實驗內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細胞，每孔按 4×103個接種至 96 孔板中，每組設(shè)置8個復(fù)孔，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒后。繼續(xù)培養(yǎng) 48h 后，棄含藥培養(yǎng)基，每孔加入新鮮配制的含 10ｕL的毒性檢測液CCK8，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 4h 后，用酶標(biāo)儀測波長為450 nm的OD值。實驗重復(fù) 3 次， 取實驗結(jié)果的平均值作為**終實驗結(jié)果。按公式計算生長***率＝[(對照組 OD－實驗組 OD)/對照組 OD]  ×**，以分組為橫坐標(biāo)，生長***率為縱坐標(biāo)，繪制細胞生長***率柱狀圖。 上海cck8吸光度