一直都像個新手，從未老道過。所有新手的迷茫與無奈我**能體會。看到園子里有一些同學在問有關CCK8試驗的事情，當初我也和他們一樣，像個被蜘蛛絲纏住頭的迷茫蒼蠅一頭扎進園子里，期待能找到些解決謎團的只言片語。希望我寫的這些非專業(yè)文字能夠幫助那些在實驗室里沒有前行者指點迷津的筒子們。當然仁者見仁智者見智，我寫的只是個人實驗心得，就供參考。歡迎大家拍磚共同進步。實驗是簡單的，道路是曲折的，時間就是用來浪費的，科研就是自娛自樂使勁折騰。**藥敏試驗：這個是用的比較廣的，我見過做**的團隊，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買。上海同仁化學研究所 cck8

、***濃度的確定需要做一個時間梯度，鋪板和上述相同，只需把各個實驗組改成各個作用時間就可以了。至于說***濃度的確定，網(wǎng)上有很多確認方法，個人建議以IC50值作為***濃度即可。計算方法，某園子里都有，就不在這里介紹了。

MTT作用之后，一定要小心吸走培養(yǎng)液，以免將孔內(nèi)的紫色結晶吸走。有條件的實驗室，這一步可以采用離心機將沉淀充分離心到孔底，防止被吸出。如果沒有這種類型的離心機，可以在測量吸光度的時候，將酶聯(lián)免疫的機器震蕩時間調(diào)制5分鐘，**起碼可以保證沉淀充分溶解。 天津cck8 數(shù)據(jù)要求用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值.

氧化還原試劑對CCK8測定的影響：CCK8是一個氧化還原反應實驗，在整個操作當中，如果有氧化還原試劑都會影響**終的結果。當有還原性物質(zhì)存在時會影響CCK8的測定，增加OD值。在有氧化性物質(zhì)存在時會***測定反應的發(fā)生，減少OD值。在高中化學我們就知道金屬是氧化還原反應中的重要參與者。各個公司都會告訴你：“終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會***5%、15%、90%的顯色反應，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話，將會*****?！蔽?*開始看到這句話時很懵，因為不知道在操作中怎樣會遇到這種情況。下面就分享我能想到或者在操作中真實遇到的。

讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻，酶標儀在 450nm 波長處檢測每孔的吸光度。

***率（％）= [（對照孔吸光度-實驗孔吸光度）/（對照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50

注意事項

CCK8法檢測細胞生長情況基于的原理是脫氫酶催化的反應，如果實驗處理條件中存在還原劑的影響，應事先去除。如果實驗條件中存在還原物質(zhì)，需單獨測定還原物質(zhì)的空白吸光度。如果還原物質(zhì)的吸光度很小，可以忽略不計；但如果吸光度很大，則需要去除培養(yǎng)基，再用培養(yǎng)基洗滌細胞3次，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進行檢測。 cck8試劑盒價格是多少?

。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時，還應考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。金屬對CCK-8顯色有影響：當終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會***5%、15%、90%的顯色反應，使靈敏度降級。如果終濃度是10 mM的話，將會*****。懸浮細胞由于染色比較困難，一般需要增加細胞數(shù)量和延長培養(yǎng)時間。靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好.天津cck8 od值統(tǒng)計方法

若細胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化，建議更換培養(yǎng)基后再加 CCK-8.上海同仁化學研究所 cck8

二、優(yōu)點：·使用方便，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑；·CCK-8法能快速檢測；·CCK-8法的檢測靈敏度很高，甚至可以測定較低細胞密度；·CCK-8法的重復性優(yōu)于MTT法，MTT實驗生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有機溶劑溶解；而本方法產(chǎn)生的formazan是水溶性的，不但省去了溶解步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差；·CCK-8法對細胞毒性小，可以多次測定選取比較好測定時間，與MTT方法相比線性范圍更寬，靈敏度更高；·CCK-8細胞活性檢測試劑中為1瓶溶液，毋需預制，即開即用。上海同仁化學研究所 cck8