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細胞凍存和復蘇的原則是:慢凍速融,這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑,會導致細胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,從而使細胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機械損傷,引起細胞內(nèi)環(huán)境滲透壓,PH,電解質(zhì)等的改變,進而促使細胞死亡。在過去的幾十年中,科研工作者將培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例配制成凍存液,并配合手工使細胞從4℃,-20℃,-80℃到液氮中逐步轉(zhuǎn)移使其達到“慢凍”的效果。但這種自制的凍存液儲存時間一般比較短,不能滿足時間跨度大的實驗項目的需求。且這樣人力和時間成本大,人手操作的誤差和血清制品的批間差也給實驗結(jié)果帶來了不穩(wěn)定性。無血清快速細胞凍存液,是一種新型開發(fā)的快速凍存細胞的保護液.單核細胞凍存液
無血清細胞凍存液產(chǎn)品介紹:無血清細胞凍存液是一款針對細胞凍存和復蘇所研發(fā)的即用型細胞凍存液。該凍存液采用獨特的凍存配方,包括DMSO在內(nèi)的凍存保護劑復合物,**降低了細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷。凍存液中添加了葡萄糖,氨基酸等各種細胞營養(yǎng)成分,***提高了細胞的活力和復蘇率。無血清細胞凍存液不含牛血清,無任何動物源組分,可維持干細胞低分化狀態(tài),并且可減少各類***和支原體污染的風險,確保細胞凍存安全。與傳統(tǒng)細胞凍存液相比,本產(chǎn)品重懸細胞后可直接凍存于-80℃,無需程序降溫。上海足細胞凍存液作用通用型細胞凍存液配方是?
根據(jù)細胞培養(yǎng)皿的大小加入適量細胞培養(yǎng)基后進行細胞常規(guī)培養(yǎng)。保存條件:4℃保存,有效期一年。若長不用可凍存于-20℃,有效期三年。產(chǎn)品質(zhì)量:無血清細胞凍存液經(jīng)過嚴格的內(nèi),滲透壓,pH檢測,并經(jīng)過0.1um濾膜過濾,確保產(chǎn)品不含有細菌,支原體等污染。注意事項:1.請選擇對數(shù)生長期細胞進行凍存,由于DMSO對細胞有一定的損傷,凍存細胞分裝后應盡快轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱,減少在室溫存放時間。如遇特殊情況,可先短暫放置于4℃并盡快轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱。
冷凍保護劑甘油或二甲基亞砜(DMSO)分子量小、溶解度大、細胞膜通透性好,可以使冰點下降,提高細胞膜對水的通透性,且對細胞無明顯毒性。DMSO能夠快速穿透細胞膜進入細胞,降低冰點、延緩凍存過程,同時提高細胞膜通透性,提高細胞內(nèi)離子濃度,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少細胞損傷達到保護細胞的目的。諾為生物所提供的STEMCELLTechnologiescGMP級別、無血清的細胞凍存液可使長期儲存的細胞保持高存活率,可應用于臨床細胞和特殊珍貴細胞的凍存。細胞的凍存密度一般為?
血清這種富含營養(yǎng)成分的物質(zhì),可以直接支持細胞。CellApplications公司的副總裁DanielSchroen曾說道“當細胞處于這種營養(yǎng)豐富的環(huán)境時,它們能夠更好地復蘇”。其中,白蛋白是一種關鍵的組分,可在細胞周圍形成保護性的涂層。當細胞開始解凍時,血清也可以與釋放的***相結(jié)合。DMSO作用是取代細胞中的一些水,以防止冰晶形成,刺穿細胞。據(jù)賽默飛世爾科技的***科學家RhondaNewman介紹,DMSO還能防止細胞在冷凍期間發(fā)生收縮,而后在解凍時又變得腫脹。既適用于一般培養(yǎng)細胞的凍存,也適用于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞的凍存。江蘇低溫細胞凍存液價格
加入適量的細胞凍存液,重懸細胞,使細胞濃度達到1~10×106/ml,置于凍存管中密閉。單核細胞凍存液
細胞凍存常用凍存液的成分如下:20%血清(FBS)、10%DMSO、70%1640培養(yǎng)液;或90%血清(FBS)、10%DMSO,更可防止細胞內(nèi)冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中,各自含量占總體積的10%,然后濾膜過濾后分裝保存?zhèn)溆?。注意事項?.DMSO不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌,可以過濾除菌。2.DMSO要用新的,而且要避光保存。3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。DMSO在凍存液中的作用:DMSO在4℃時對細胞無明顯毒性,分子量小、溶解度大、易透過細胞膜,降低細胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度,使細胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細胞內(nèi)水分也不會過分外滲,避免了細胞過分脫水皺縮;DMSO與水分子結(jié)合,可使冰點下降,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少冰晶損傷。單核細胞凍存液
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