在難轉(zhuǎn)染細胞（原代大鼠動脈平滑肌細胞）轉(zhuǎn)染效率的比較

圖片由芝加哥大學(xué)肺和重癥護理系的 Nickolai Dulin 博士友情提供

制備大鼠的動脈平滑肌原代細胞并用使用 LipoD293?試劑（左圖）和 Lipofecatmine 2000（L2K, 右圖）分別將 GFP 的 cDNA（pEGFP-N3）按照生產(chǎn)制造商的轉(zhuǎn)染操作步轉(zhuǎn)染至該細胞。轉(zhuǎn)染 24 小時后，用尼康 Eclipse 2000 熒光顯微鏡檢測 GFP 熒光，以此來評價轉(zhuǎn)染效率。

對難轉(zhuǎn)染細胞 LNCap 細胞轉(zhuǎn)染效率的比較

圖片由羅斯威爾公園**研究所（Roswell Cancer Institute）的 Lyn Gao 博士友情提供

各種轉(zhuǎn)染試劑成分分析.神經(jīng)細胞轉(zhuǎn)染試劑配制

簡介：

X-tremeGENE HP DNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑，兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，可用于轉(zhuǎn)染各類真核細胞(包括昆蟲細胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細胞系。

優(yōu)勢：

1.簡單易用的多組分混合試劑，無動物源性成分，室溫穩(wěn)定。

2.高轉(zhuǎn)染效率，對于原代細胞和使用其它試劑難轉(zhuǎn)染的**細胞系有高轉(zhuǎn)染效率。

3.使用細胞毒性低的試劑，結(jié)果相關(guān)性好.

圖2. X-tremeGENE HP高效低毒的轉(zhuǎn)染性能。通過X-tremeGENE HP和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將GFP表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實驗后兩種方法均獲得了成功轉(zhuǎn)染的細胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法的細胞毒性遠高于X-tremeGENE HP，導(dǎo)致存活細胞量減少(圖片來源于網(wǎng)絡(luò)). 慢病毒轉(zhuǎn)染試劑原理我們希望把mRNA轉(zhuǎn)染進入原代細胞，那**適合的轉(zhuǎn)染產(chǎn)品就是Lipofectamine MessengerMAX?或是Neon電轉(zhuǎn)儀。

基于陽離子聚合物的轉(zhuǎn)染試劑，帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團形成帶正電的復(fù)合物后與細胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過內(nèi)吞作用進入細胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類，前者細胞毒性相對較大，后者細胞毒性較小，但其轉(zhuǎn)染效率都高于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，適用也較為廣范。以上單一成分的轉(zhuǎn)染試劑或聚焦于提高效率或著重于降低細胞毒性，可謂魚和熊掌不可兼得也。新一代轉(zhuǎn)染試劑，不局限于單一成分，混合了不同配方的脂類（非脂質(zhì)體）、加上蛋白質(zhì)組分、以及各種的成分，兼具了轉(zhuǎn)染效率高和細胞毒性小的優(yōu)勢，且操作更加簡單，易于高通量。

原代細胞直接分離自組織并在適當(dāng)條件下增殖。因此，它們的形態(tài)學(xué)和生理特征和體內(nèi)狀態(tài)更為相似。但相對于連續(xù)細胞系，它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。在經(jīng)過***次傳代培養(yǎng)之后，原代培養(yǎng)物變成了一種細胞系。源自于原代培養(yǎng)物的細胞系具有有限的壽命（即它們是有限細胞系），且隨著傳代的進行，具有比較高的生長能力的細胞逐漸占據(jù)支配地位，從而造成了細胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。相對來說，這一類細胞要比原代細胞使用起來更為方便，尤其是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆傳代。 包括**常見的DNA，用于基因編輯的siRNA，能夠更快表達蛋白的mRNA，CRISPR-Cas9甚至是體內(nèi)轉(zhuǎn)染。

圖5.Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的siRNA在單次靜脈注射后可在肝臟中引起劑量反應(yīng)的敲低現(xiàn)象。Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的AmbioninvivosiRNA以0.02到2mg/kg的劑量進行注射。隨后分離血清并檢測FVII蛋白的水平（Biophen顯色檢測）。持續(xù)敲低能力在單次注射后可觀察到更長的敲低時間圖6.使用三種不同濃度的靶向FactorVII(FVII)的siRNA研究劑量效應(yīng)。siRNA分子與Invivofectamine3.0試劑形成復(fù)合物后分別以1、0.5、及0.25mg/kg的劑量進行注射。在第2、5、9、16、23及30日收集血清，并使用顯色法對血清進行分析以確定FVII蛋白的敲低效果。低毒性將20μL轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入孔中的細胞懸液中，前后移動培養(yǎng)皿，混合均勻；基因轉(zhuǎn)染試劑報價

所見即所得——分享兩款超好用的轉(zhuǎn)染試劑,拯救你的細胞.神經(jīng)細胞轉(zhuǎn)染試劑配制

圖3. 用于轉(zhuǎn)染的Invivofectamine 3.0試劑及RNAi復(fù)合物非常容易獲得：只需簡單地混合，并進行孵育（30min）、稀釋、及注射即可。

高效、靶向敲低

在實驗靶標(biāo)中可觀察到高達85%的敲低效果

圖4. 使用Invivofectamine 3.0試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實現(xiàn)靶向敲低。Invivofectamine 3.0試劑與靶向Factor VII (FVII)或PPIB mRNA的siRNA組成的復(fù)合物，以每千克小鼠體重1 mg(mg/kg)的注射量進行注射，**終靶向mRNA水平出現(xiàn)了高達85%的敲低（使用TaqMan分析對敲低進行評估）。 神經(jīng)細胞轉(zhuǎn)染試劑配制

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