對 HepG2 細胞轉染效率的比較

右圖：使用以上轉染試劑將 GFP 的 cDNA（pEGFP-N3）按照生產商的提供的轉染步驟轉染到 HepG2 細胞（在膠原預處理的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)）。在轉染 48 小時之后，用流式細胞儀檢測 GFP 陽性細胞（%）和熒光強度。

左圖：血清和***存在的條件下能提高 LipoD293 試劑（升級版）對在 HepG2 細胞的轉染效率。通過三種不同的條件下轉染 HepG2 細胞（生長在膠原處理的培養(yǎng)皿上）---無血清和***，10% 血清和***的存在，轉染 5 小時后換液和不換液。

每孔培養(yǎng)體積均為100μL，細胞數(shù)目在105左右。上海昆蟲細胞轉染試劑作用

簡介：

X-tremeGENE HP DNA轉染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉染試劑，兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，可用于轉染各類真核細胞(包括昆蟲細胞)以及多種難轉染細胞系。

優(yōu)勢：

1.簡單易用的多組分混合試劑，無動物源性成分，室溫穩(wěn)定。

2.高轉染效率，對于原代細胞和使用其它試劑難轉染的**細胞系有高轉染效率。

3.使用細胞毒性低的試劑，結果相關性好.

圖2. X-tremeGENE HP高效低毒的轉染性能。通過X-tremeGENE HP和脂質體轉染方法將GFP表達質粒轉染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實驗后兩種方法均獲得了成功轉染的細胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質體轉染方法的細胞毒性遠高于X-tremeGENE HP，導致存活細胞量減少(圖片來源于網絡). 上海慢病毒轉染試劑分裝原代細胞直接分離自組織并在適當條件下增殖.

.在多種不同類型細胞中基因敲除效率超過90%。

高靈活應用， 同一試劑可用于siRNA和質粒共轉染的基因沉默實驗。

細胞毒性低，結果相關性好，確保所觀察到的細胞效應是由轉染的siRNA而非轉染過程本身介導。

兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，轉染前后均無需換液(如無血清培養(yǎng)基)。

X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent用于4種細胞系的HPRT基因沉默實驗。根據各試劑說明書建議的操作流程，或標準實驗方法，將100nM HPRT特異性siRNA轉染至4種細胞,通過LightCycler® h-HPRT Housekeeping Gene Set的熒光定量法評估基因沉默效率。結果顯示用羅氏這款試劑在四種細胞中轉染后基因沉默表現(xiàn)均表現(xiàn)優(yōu)異。

基于陽離子聚合物的轉染試劑，帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用，并通過內吞作用進入細胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類，前者細胞毒性相對較大，后者細胞毒性較小，但其轉染效率都高于脂質體轉染，適用也較為廣范。以上單一成分的轉染試劑或聚焦于提高效率或著重于降低細胞毒性，可謂魚和熊掌不可兼得也。新一代轉染試劑，不局限于單一成分，混合了不同 配方的脂類（非脂質體）、加上蛋白質組分、以及各種的 成分，兼具了轉染效率高和細胞毒性小的優(yōu)勢，且操作更加簡單，易于高通量。轉染是將核酸導入真核細胞中的過程，是細胞生物學、基因表達和基因***實驗中的關鍵步驟。

基于磷酸鈣成分的轉染試劑，其主要作用原理是與DNA通過沉淀反應形成磷酸鈣-DNA復合物，粘附到細胞膜表面，借助內吞作用進入細胞質。pH值，鈣離子濃度，DNA濃度，沉淀時間，細胞孵育時間乃至各組分加入順序都可能對結果產生影響，因此實驗條件摸索和優(yōu)化時間較長，且重復性不佳。基于脂質體的轉染試劑包括中性脂質體和陽離子脂質體兩種。中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA，借助脂質膜將DNA導入細胞膜內。目前應用比較***的是帶正電的陽離子脂質體轉染試劑，DNA并沒有預先包埋在脂質體中，而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質體上，形成DNA-陽離子脂質體復合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經過內吞被導入細胞。此方法操作簡單，重復性好，在體外轉染中有很高的效率，但具有一定的細胞毒性，可能會干擾細胞的代謝。且活性受血清影響，需要去除血清。在經過***次傳代培養(yǎng)之后，原代培養(yǎng)物變成了一種細胞系。上海動物轉染試劑配制

隨后分離血清并檢測FVII蛋白的水平（Biophen 顯色檢測）。上海昆蟲細胞轉染試劑作用

圖3. 用于轉染的Invivofectamine 3.0試劑及RNAi復合物非常容易獲得：只需簡單地混合，并進行孵育（30min）、稀釋、及注射即可。

高效、靶向敲低

在實驗靶標中可觀察到高達85%的敲低效果

圖4. 使用Invivofectamine 3.0試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實現(xiàn)靶向敲低。Invivofectamine 3.0試劑與靶向Factor VII (FVII)或PPIB mRNA的siRNA組成的復合物，以每千克小鼠體重1 mg(mg/kg)的注射量進行注射，**終靶向mRNA水平出現(xiàn)了高達85%的敲低（使用TaqMan分析對敲低進行評估）。 上海昆蟲細胞轉染試劑作用

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