一、細(xì)胞冷凍保存1.材料：生長(zhǎng)良好之培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO(SigmaD-2650)、無(wú)菌塑料冷凍保存管(Nalgene5000-0020)、0.4％（w/v）trypanblue(GibcoBRL15250-061)、血球計(jì)數(shù)盤(pán)與蓋玻片、等速降溫機(jī)(KRYO10SeriesII)2、冷凍保存方法：（1）傳統(tǒng)方法:冷存管置于4℃10分鐘--->-20℃30分鐘--->-80℃16～18小時(shí)(或隔夜)--->液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí)，以防止胞內(nèi)冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。（2）程序降溫：利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1～-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。細(xì)胞凍存液具體有哪些?江蘇淋巴細(xì)胞凍存液配制

細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，減少細(xì)胞代謝，以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種技術(shù)。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一，起到了細(xì)胞保種的作用。中文名細(xì)胞凍存儲(chǔ)存方式將細(xì)胞放在低溫環(huán)境細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過(guò)程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費(fèi)，而且細(xì)胞一旦離開(kāi)***開(kāi)始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存十分必要。上海干細(xì)胞凍存液一次加多少細(xì)胞凍存液配方是什么?

脫水當(dāng)生物材料處于上述條件（2）的情況下，細(xì)胞脫水則會(huì)開(kāi)放相關(guān)壓力對(duì)細(xì)胞直接傷害的“大門(mén)”。4.細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成雖然一些***或組織能夠耐受細(xì)胞外的冰晶，但是在凍存過(guò)程的中如果在細(xì)胞內(nèi)形成了任何微小冰晶時(shí)對(duì)細(xì)胞來(lái)說(shuō)都是致命的。凍存液凍存保護(hù)劑（cryoprotectant）又或者說(shuō)是凍存液是一種用來(lái)保護(hù)生物組織免受凍存?zhèn)Φ奈镔|(zhì)。其實(shí)在現(xiàn)實(shí)生活中，自然的凍存保護(hù)劑可以在北極或者南極的昆蟲(chóng)，魚(yú)類(lèi)，兩棲動(dòng)物等生物中找到，這樣的保護(hù)劑（抗凍復(fù)合物，抗凍蛋白）能夠在他們的身體中使寒冷冬季的嚴(yán)寒傷害降到比較低

凍存細(xì)胞類(lèi)型：臍血及臍帶組織、外周血、間充質(zhì)干細(xì)胞、多能干細(xì)胞、組織樣本等① 用于減輕冷凍和解凍復(fù)蘇期間由溫度引起的分子應(yīng)激反應(yīng)② 分別以2%、5%或10%USP級(jí)的二甲基亞砜（DMSO）預(yù)先配制即用型細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞類(lèi)型：臍血及臍帶組織、外周血和骨髓① BloodStor®55-5以55%（重量/體積）的DMSO（USP）級(jí)、5%（重量/體積）的葡萄糖-40（USP）級(jí)和注射液（WFI）級(jí)別的水預(yù)先配制② BloodStor®100含有**（重量/體積）的DMSO（USP級(jí)）細(xì)胞凍存液一般有兩種配置方法是什么?

細(xì)胞凍存概念：細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。AMBANKER®無(wú)血清細(xì)胞凍存液：BAMBANKER是一種日本原裝進(jìn)口含DMSO的無(wú)血清細(xì)胞凍存液，均無(wú)不明動(dòng)物源成分，高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為實(shí)驗(yàn)效果帶來(lái)保證。不需要進(jìn)行程序降溫，可在-80℃長(zhǎng)期保存細(xì)胞（**細(xì)胞和常規(guī)細(xì)胞）。減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。上海干細(xì)胞凍存液一次加多少

細(xì)胞凍存液除去蛋白酶，添加適量配置好的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液.江蘇淋巴細(xì)胞凍存液配制

細(xì)胞凍存的操作步驟是什么配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái)；離心1000rpm，5min；去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的**終密度為5×106/ml～1×107/ml；將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5ml；在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱(chēng)，凍存時(shí)間及操作者；凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜江蘇淋巴細(xì)胞凍存液配制

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