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上海淋巴細胞凍存液配比

來源: 發(fā)布時間:2022-08-01

凍存風險在凍存中,會對生物材料造成損傷的階段往往出現(xiàn)在材料結(jié)冰的過程中,那么伴隨著這樣一個結(jié)冰的過程,往往會產(chǎn)生以下的風險。1.溶液的影響當冰晶在凍結(jié)的水中形成的時候,溶液中的溶質(zhì)便會析出,液體中會形成很高的溶解物濃度,從而會導致生物材料所處的環(huán)境的滲透壓升高,對生物材料造成不可逆的損傷。2.細胞外的冰晶形成當生物材料的凍存時間過長時,生物液(水)會從生物材料中遷移出來,并在細胞外形成冰晶,而這樣的冰晶對脆弱的細胞膜來說無疑是“致命威脅”。dmso在凍存液中的作用?上海淋巴細胞凍存液配比

凍存細胞類型:臍血及臍帶組織、外周血、間充質(zhì)干細胞、多能干細胞、組織樣本等① 用于減輕冷凍和解凍復蘇期間由溫度引起的分子應(yīng)激反應(yīng)② 分別以2%、5%或10%USP級的二甲基亞砜(DMSO)預先配制即用型細胞凍存液凍存細胞類型:臍血及臍帶組織、外周血和骨髓① BloodStor®55-5以55%(重量/體積)的DMSO(USP)級、5%(重量/體積)的葡萄糖-40(USP)級和注射液(WFI)級別的水預先配制② BloodStor®100含有**(重量/體積)的DMSO(USP級)上海bi細胞凍存液顏色細胞凍存液要不要含血清?

注意冷凍保護劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級等級,無菌且無色(以0.22micronFGLPTelflon過濾或是直接購買無菌產(chǎn)品,如SigmaD-2650),以5~10ml小體積分裝,4℃避光保存,勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級等級,以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液,可避免DMSO直接加入時釋放的熱量對細胞的損傷。緩慢逐滴加入細胞懸液是使細胞逐步適應(yīng)高滲,可降低細胞受損。DMSO可能引起部分白血病細胞株的分化,可換用10%甘油凍存。

解凍解凍后,應(yīng)該立即鋪板在預先包被好的培養(yǎng)皿中。開始之前,提前準備好以下材料:試管,恢復至室溫的培養(yǎng)基,預先包被的培養(yǎng)板,確保整個解凍復蘇程序可以在**短的時間內(nèi)完成。注意:不要在37°C水浴中加熱培養(yǎng)基。1.在37°C水浴中快速解凍,持續(xù)溫和的在水中晃動凍存管,直到剩余少量細胞還處于結(jié)冰狀態(tài)。2.水浴中取出凍存管,用70%的酒精或異丙醇擦拭除菌。3.用2mL的血清移液管把細胞懸液轉(zhuǎn)移到一個15mL的錐形試管。注意:用2mL的血清移液管代替1mL的***頭可以減少細胞聚集體的分解。細胞凍存液可快速冷凍,可直接置于-80℃冰箱冷凍,長期保存,不需要程序性降溫。

細胞凍存常用凍存液的成分如下:20%血清(FBS)、10%DMSO、70%1640培養(yǎng)液;或90%血清(FBS)、10%DMSO,更可防止細胞內(nèi)冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中,各自含量占總體積的10%,然后濾膜過濾后分裝保存?zhèn)溆?。注意事項?.DMSO不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌,可以過濾除菌。2.DMSO要用新的,而且要避光保存。3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。DMSO在凍存液中的作用:DMSO在4℃時對細胞無明顯毒性,分子量小、溶解度大、易透過細胞膜,降低細胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度,使細胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細胞內(nèi)水分也不會過分外滲,避免了細胞過分脫水皺縮;DMSO與水分子結(jié)合,可使冰點下降,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少冰晶損傷。無血清快速細胞凍存液,減少各類霉菌和支原體等的污染,確保凍存細胞安全.江蘇免疫細胞凍存液配方

細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑.上海淋巴細胞凍存液配比

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